甘露醇发酵培养基：用于金黄色葡萄球菌甘露醇发酵试验的生化鉴定培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

甘露醇发酵试验的核心是“底物利用 + 酸性产物显色”。培养基中的甘露醇是被检测的糖醇类底物，若测试菌株能够发酵甘露醇，会产生酸性代谢产物，使培养基pH下降。溴麝香草酚蓝在酸性环境下呈黄色，因此培养基变黄可判断为甘露醇发酵阳性。

蛋白胨和牛肉膏粉为菌体生长提供氮源和生长因子，氯化钠维持渗透压，使测试菌株在培养过程中保持正常生理状态。需要注意的是，蛋白胨代谢有时可能产生碱性物质，若培养时间过长，可能影响颜色判读。因此，甘露醇发酵试验应按规定时间观察，避免过早或过晚判读导致结果偏差。

对于金黄色葡萄球菌，甘露醇发酵阳性可作为鉴定支持依据之一，但不能单独作为最终确认结果。部分非金黄色葡萄球菌或其他细菌也可能发酵甘露醇，而个别菌株表现也可能存在差异，因此应结合其他鉴定项目综合判断。

四、使用方法

称取本品30.0 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，按实验需要分装试管后，于115 ℃高压灭菌20 min。灭菌结束后冷却备用。

接种时应挑取纯培养菌落接入培养基中，置36±1 ℃培养24 h后观察颜色变化。培养基变黄色为甘露醇发酵阳性；培养基颜色不变、保持绿色或蓝绿色，通常判为阴性。若接种后菌体生长不良，则不能直接判定为阴性，应先排查菌株活性、接种量、培养温度、培养时间和培养基状态。

本培养基采用115 ℃灭菌20 min，主要是为了减少甘露醇和指示剂在高温下受影响。不建议随意改为121 ℃长时间灭菌，否则可能导致颜色异常、pH偏移或糖类成分受热变化。

五、质量控制

注：虽然产品用途为金黄色葡萄球菌甘露醇发酵试验，但质控菌株可选择阳性和阴性对照菌来验证显色系统是否正常。若企业资料中用于金黄色葡萄球菌鉴定，也可增加金黄色葡萄球菌阳性质控菌株，以增强产品应用针对性。

六、结果判读

判读时应重点观察与未接种对照相比的颜色变化。若颜色仅轻微发黄，应结合培养时间和菌体生长情况判断；若培养基浑浊但颜色不变，一般说明菌株生长但未发酵甘露醇产酸。若培养时间过长，蛋白胨分解产碱可能使颜色发生回变，影响结果解释。

七、与金黄色葡萄球菌鉴定的关系

金黄色葡萄球菌常具有较强的甘露醇发酵能力，因此甘露醇发酵阳性可作为其鉴定特征之一。在化妆品、卫生用品和食品相关检测中，疑似金黄色葡萄球菌通常需要经过选择性分离、纯化培养，再进行一系列确认试验。甘露醇发酵试验可作为其中一个生化项目，但不能替代血浆凝固酶试验、革兰氏染色、菌落形态观察或其他确认方法。

与甘露醇盐琼脂不同，本品为液体发酵培养基，氯化钠浓度为5.0 g/L，并不依靠高盐条件进行选择性分离。因此，不应将本品理解为“甘露醇高盐选择性培养基”。它更适用于纯培养菌株的生化反应观察。

八、常见问题与原因分析

若阳性质控菌株不变黄，应检查甘露醇是否受热分解或失效、灭菌温度是否过高、pH是否偏离、接种菌是否生长良好以及培养时间是否足够。若阴性质控菌株变黄，应排查污染、菌株误用、培养时间过长或培养基pH过低等因素。

若灭菌后培养基颜色偏黄，可能是初始pH偏低、灭菌过度或原料受潮导致；若颜色偏蓝，可能是pH偏高。溴麝香草酚蓝对pH较敏感，配制后应关注最终pH是否符合7.4±0.2。若培养基出现异常沉淀、絮状物或污染，应停止使用并重新配制。

九、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的试管培养基应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、颜色异常、pH异常、沉淀异常或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养物、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

《化妆品安全技术规范》（2015年版）相关微生物检验方法。

GB 15979-2024《一次性使用卫生用品卫生要求》。

相关化妆品、卫生用品和食品微生物检验方法中金黄色葡萄球菌分离、鉴定和甘露醇发酵试验要求。