乙酰胺液体培养基：用于铜绿假单胞菌乙酰胺利用试验的生化鉴定培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

乙酰胺液体培养基的核心是“限制性营养 + 乙酰胺利用 + 氨反应显色”。培养基中不含复杂有机氮源，乙酰胺成为主要可利用的有机营养来源。铜绿假单胞菌能够产生相关酰胺酶，将乙酰胺分解，生成乙酸和氨。培养结束后加入钠氏试剂，若培养液中有氨或铵离子积累，可出现黄色至棕红色反应；在该产品质控中，阳性结果表现为肉汤变砖红色。

大肠埃希氏菌等阴性对照菌通常不能在该体系中有效利用乙酰胺并产生足够氨，因此加入钠氏试剂后不出现砖红色。需要注意的是，乙酰胺试验是铜绿假单胞菌鉴定中的一个生化项目，不能单独作为最终确认依据。实际检测时应结合菌落形态、氧化酶试验、绿脓菌素或荧光色素产生、硝酸盐还原产气及其他确认试验综合判断。

四、使用方法

称取本品3.4 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热至完全溶解，分装试管后，于121 ℃高压灭菌15 min。灭菌结束后冷却备用。

接种时挑取纯培养的疑似菌株接入乙酰胺液体培养基中，置36±1 ℃需氧培养20～24 h。培养结束后加入1～2滴钠氏试剂，轻轻混匀后观察颜色变化。肉汤变砖红色为阳性；不变砖红色为阴性。判读时应设置阳性、阴性质控和未接种对照，避免试剂本身变质、培养基污染或颜色背景干扰结果。

五、质量控制

六、结果判读

钠氏试剂对氨反应较敏感，操作时应避免外源氨污染。玻璃器皿、试管塞、移液器具和水质若受到氨或铵盐污染，可能导致假阳性。钠氏试剂本身也应按要求保存，若颜色异常、沉淀明显或质控不合格，应更换试剂。

七、与铜绿假单胞菌检测流程的关系

在饮用天然矿泉水等样品检测中，铜绿假单胞菌通常需要经过滤膜法或其他方法分离培养，挑取疑似菌落后进行一系列确认试验。乙酰胺液体培养基用于其中的生化确认环节，重点检测疑似菌株是否具有利用乙酰胺产生氨的能力。

铜绿假单胞菌常见鉴别特征包括革兰氏阴性杆菌、氧化酶阳性、可产生特征性色素、能在特定条件下生长，并具有相应生化反应组合。乙酰胺阳性是重要支持依据，但不能替代其他鉴定项目。对于结果不典型的菌株，应结合标准方法进行复核或采用进一步鉴定手段。

八、常见问题与原因分析

若铜绿假单胞菌阳性质控不显砖红色，应重点检查乙酰胺是否漏加或失效、培养基pH是否正常、培养温度和时间是否符合要求、菌株活性是否良好、接种量是否足够，以及钠氏试剂是否有效。培养时间不足或菌株状态较弱时，氨生成量可能不足，导致显色不明显。

若大肠埃希氏菌阴性质控出现砖红色，应优先排查污染、菌株误用、钠氏试剂或器皿被氨污染、培养基配制错误以及接种操作交叉污染。由于培养基本身营养非常有限，若出现明显浑浊或多种菌生长，应检查无菌操作和纯培养状态。

若培养基灭菌后出现明显沉淀、颜色异常或pH偏离，可能与水质、原料吸潮、称量误差或灭菌条件有关。乙酰胺液体培养基配方中含有微量金属盐，正常情况下应为均一液体，若异常明显，应经质控合格后再使用。

九、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的试管培养基应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、明显沉淀、颜色异常、pH异常或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。钠氏试剂通常具有一定腐蚀性和毒性，使用时应注意个人防护，并按实验室化学品管理要求处理废液。检测后的带菌培养物、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 8538-2022《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》。

相关饮用天然矿泉水和微生物检验方法中铜绿假单胞菌分离、确认和乙酰胺利用试验要求。