乙酰胺琼脂：用于铜绿假单胞菌选择性分离与乙酰胺利用观察的培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

乙酰胺琼脂的核心原理是“限制性营养筛选 + 酚红显色鉴别”。培养基中不加入常规丰富有机氮源，而以乙酰胺作为主要可利用营养底物。铜绿假单胞菌具有乙酰胺酶等相关代谢能力，可利用乙酰胺并产生碱性代谢产物，使菌落周围pH升高。酚红在偏碱条件下呈粉红色至红色，因此铜绿假单胞菌生长区域周围可出现略带粉红色的变化。

磷酸氢二钾和磷酸二氢钾共同构成缓冲体系，使培养基pH保持在适合反应观察的范围内。硫酸镁提供镁离子，参与细胞代谢和酶活性维持。氯化钠维持渗透压，琼脂用于凝固成平板。由于该培养基选择性来自营养限制，因此对非目标菌的抑制能力与菌种代谢特征、接种量、培养时间和样品背景菌状态有关，不应将其理解为含抗生素的强抑菌平板。

四、使用方法

称取本品32.6 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，按实验需要分装后，于121 ℃高压灭菌20 min。灭菌结束后冷却至适宜温度，倾注无菌平板，凝固后备用。

使用时，将经增菌或分离后的疑似菌培养物划线接种于乙酰胺琼脂平板表面，置36±1 ℃需氧培养24 h后观察菌落形态及培养基颜色变化。铜绿假单胞菌典型表现为生长良好，菌落较扁平，边缘不整齐，菌落周围培养基可略带粉红色。若菌落形态或显色不典型，应结合后续氧化酶试验、绿脓菌素试验、乙酰胺液体培养基试验或其他确认方法综合判断。

五、质量控制

注：PR≥0.7表示目标菌在该培养基上的回收能力应达到规定要求；G≤1表示非目标菌应受到明显抑制或仅有极弱生长。实际质控应按企业内控方法和适用标准执行。

六、结果观察与判读

乙酰胺琼脂上的粉红色变化来源于乙酰胺代谢导致的碱性反应，而不是乳糖发酵或酸性产物显色。若培养基整体偏红，可能与初始pH偏高有关；若整体偏黄，则可能与pH偏低、灭菌过度或原料异常有关。判读时应与未接种对照平板比较，避免将背景色差误认为阳性反应。

七、与乙酰胺液体培养基的区别

乙酰胺琼脂和乙酰胺液体培养基都与铜绿假单胞菌乙酰胺利用能力有关，但用途和判读方式不同。乙酰胺琼脂主要用于平板分离和菌落观察，乙酰胺液体培养基则用于培养后加入钠氏试剂检测氨生成。

因此，乙酰胺琼脂不能完全替代乙酰胺液体培养基，二者可根据标准方法或实验室流程配合使用。对于化妆品样品中疑似铜绿假单胞菌，应结合分离培养和多项确认试验综合判定。

八、与铜绿假单胞菌检测流程的关系

化妆品中铜绿假单胞菌检测通常包括样品处理、增菌培养、选择性分离、可疑菌落挑取、染色镜检、氧化酶试验及相关生化确认。乙酰胺琼脂可作为选择性分离或辅助鉴别培养基，用于观察疑似菌是否能够在乙酰胺限制性营养环境中生长并产生典型反应。

由于化妆品样品常含防腐剂、表面活性剂、香精、油脂或其他抑菌成分，直接影响铜绿假单胞菌恢复和分离。因此，在实际检测中应重视样品中和、稀释、增菌和方法适用性验证。若样品抑菌性未被有效中和，即使目标菌存在，也可能导致分离平板生长不良或假阴性。

九、常见问题与原因分析

若铜绿假单胞菌质控菌株PR偏低，应检查培养基pH是否符合7.2±0.1、乙酰胺是否失效、灭菌时间是否过长、平板是否过度干燥、菌株活性是否正常以及接种量是否准确。乙酰胺琼脂营养限制明显，若目标菌状态较弱或接种菌量过低，生长可能受到影响。

若大肠埃希氏菌或鼠伤寒沙门氏菌明显生长，应检查配方称量是否准确、乙酰胺浓度是否正确、是否误加入营养性原料、pH是否偏离以及培养时间是否过长。由于该培养基不是抗生素型选择平板，若接种量过大或培养时间过长，部分非目标菌可能出现弱生长，因此应按质控方法控制接种量和观察时间。

若平板整体变红，通常与pH偏高或碱性物质污染有关；若平板整体偏黄，则可能与pH偏低、灭菌过度或原料受潮有关。若平板表面水分过多，菌落可能扩散，影响形态观察；若平板过干，则可能影响目标菌恢复。

十、贮存与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的平板应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、明显变色、pH异常、平板干裂、表面水分过多或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养物、平板和接触样品的耗材，应经121 ℃高压灭菌后再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

《化妆品安全技术规范》（2015年版）相关微生物检验方法。

GB/T 7918.4-1987《化妆品微生物标准检验方法 绿脓杆菌》。

相关化妆品微生物检验方法中铜绿假单胞菌分离、乙酰胺利用和确认试验要求。