沙氏培养液:用于真菌增菌培养的含氯霉素液体培养基

2026-06-23 15:08:06
逗点生物
简介

沙氏培养液:用于真菌增菌培养的含氯霉素液体培养基

一、产品用途与基本信息

项目 内容
产品名称 沙氏培养液
推荐规范名称 含氯霉素沙氏液体培养基
英文名称 Liquid Sabouraud Medium (Chloramphenicol)
产品货号 GF1147
产品规格 250 g/瓶
产品类型 液体真菌增菌培养基
主要用途 用于真菌的增菌培养
使用量 50.1 g/L
灭菌条件 115 ℃高压灭菌15 min
推荐培养条件 25±2 ℃培养72 h
典型生长表现 肉汤混浊、白色沉淀、絮状菌丝或液面孢子
保质期 未开封三年

注:原资料未列出最终pH。沙氏培养基体系通常偏酸性,有利于真菌生长并辅助抑制部分细菌,但具体最终pH应以产品说明书或企业内控标准为准,不建议在无依据情况下自行填写。

二、配方组成、用量及作用

成分 用量(g/L) 主要作用 用途说明
蛋白胨 10.0 提供氮源、氨基酸、短肽和部分生长因子 支持酵母菌和霉菌恢复、生长和代谢
葡萄糖 40.0 提供高浓度可利用碳源和能量来源 促进真菌增殖,是沙氏培养基的重要营养基础
氯霉素 0.1 抑制部分细菌生长 减少细菌污染或伴随菌对真菌增菌的干扰
最终pH 以产品说明或内控标准为准 控制培养基酸碱环境 影响真菌生长和细菌抑制效果,建议配制后检测确认

三、培养基原理

沙氏培养液的核心是“高糖营养 + 真菌增菌 + 细菌抑制”。蛋白胨为真菌提供氨基酸、短肽和氮源,葡萄糖提供充足碳源和能量来源,使酵母菌和霉菌能够在液体环境中恢复并增殖。对于受损或数量较低的真菌,液体增菌培养可提高后续检出机会。

氯霉素是广谱抗菌成分,可抑制多种细菌的蛋白质合成,从而减少细菌在培养液中快速繁殖造成的干扰。由于真菌与细菌在细胞结构和药物敏感性上存在差异,氯霉素在该体系中主要用于抑制细菌而保留真菌生长条件。需要注意的是,含氯霉素沙氏培养液不是完全选择性培养基,不能保证抑制所有细菌,也不能直接区分不同真菌种类。

四、使用方法

称取本品50.1 g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热至完全溶解,按实验需要分装后,于115 ℃高压灭菌15 min,冷却备用。

该培养基中葡萄糖含量较高,且含氯霉素,配制时不建议随意提高灭菌温度或延长灭菌时间,以免出现颜色加深、糖类受热变化或抑菌活性下降。灭菌后培养液应均一,无污染、无明显异常沉淀或异味。接种后按25±2 ℃培养72 h观察真菌生长情况。

五、质量控制

质控指标 质控菌株及编号 培养条件 质控评定标准 结果说明
生长率 黑曲霉 CMCC(F)98003 25±2 ℃培养72 h 浑浊度2,絮状菌丝,液面可有黑色孢子 验证培养基对霉菌的支持能力
生长率 白色念珠菌 CMCC(F)98001 25±2 ℃培养72 h 浑浊度2,白色沉淀 验证培养基对酵母菌的支持能力
选择性 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 25±2 ℃培养72 h 浑浊度0 验证氯霉素对部分革兰氏阴性细菌的抑制作用
选择性 粪肠球菌 ATCC 29212 25±2 ℃培养72 h 浑浊度0 验证氯霉素对部分革兰氏阳性细菌的抑制作用
外观检查 灭菌后培养基 室温观察 液体均一,无污染、无明显异常沉淀 评价配制和灭菌状态

注:原资料中的“生产率”应修正为“生长率”。液体培养基的质控结果通常以浑浊度、沉淀、菌丝团或孢子形成等方式描述,不同真菌在液体中的生长形态可能差异较大。

六、结果观察与应用提示

沙氏培养液培养后,白色念珠菌等酵母菌通常表现为培养液混浊、底部白色沉淀或轻微菌膜;黑曲霉等霉菌则可能形成絮状菌丝团,液面或管壁附近可见孢子形成,成熟后可出现黑色孢子。观察时应与未接种对照比较,避免将培养基本身轻微沉淀或颜色变化误判为生长。

若培养液出现明显混浊,但无典型真菌形态,应考虑细菌污染或氯霉素抑菌不足。若需要进一步确认,应取培养物涂片镜检或转种至沙氏琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等固体培养基观察菌落形态。液体培养结果只能提示真菌生长,不宜直接作为菌种鉴定结论。

七、与沙氏琼脂的区别

沙氏培养液和沙氏琼脂都属于沙氏培养基体系,但用途不同。沙氏培养液用于液体增菌,有利于提高低水平真菌的检出机会;沙氏琼脂则用于分离、观察菌落形态和计数。两者不能完全替代。

培养基 状态 主要用途 结果观察
沙氏培养液 液体 真菌增菌培养 观察混浊、沉淀、菌丝、孢子等
沙氏琼脂 固体平板 真菌分离、纯化和计数 观察菌落形态、颜色、大小和数量

在实际检验中,若样品中真菌数量较低,可先用沙氏培养液增菌,再转种固体培养基进行分离观察;若需要定量计数,则应按相应标准方法直接采用适宜的平板培养基。

八、常见问题与原因分析

若真菌质控菌株生长不良,应检查培养基是否按50.1 g/L准确配制、灭菌温度是否过高、培养温度和时间是否符合要求、菌株活性是否正常、接种量是否合适,以及干粉是否吸潮或结块。葡萄糖含量高的培养基若过度加热,可能出现颜色加深或营养成分变化,从而影响真菌生长。

若大肠埃希氏菌或粪肠球菌出现明显生长,应检查氯霉素是否失效、配制浓度是否正确、灭菌过程是否影响抑菌效果、培养基保存时间是否过长,以及是否存在接种量过大或污染。氯霉素可抑制多种细菌,但不是绝对抑菌剂,部分耐受菌或高菌量污染仍可能生长。

若培养液出现异常沉淀、絮状物或颜色变化,应结合未接种对照判断。未接种对照若出现混浊或菌膜,说明培养基污染或灭菌不彻底,应停止使用并重新配制。

九、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封,置于避光、干燥处保存,避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护,建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年;开封后受储存湿度、温度和使用频次影响,保质时间可能缩短。

氯霉素属于具有一定职业健康风险的抗菌药物成分,称量和配制时应避免吸入粉尘或皮肤接触,必要时佩戴手套、口罩和护目镜。配制后的培养基应按实验室验证条件保存,并在规定期限内使用。若出现污染、颜色异常、明显沉淀、抑菌质控不合格或真菌生长质控不合格,应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养液、试管和接触样品的耗材,应置于121 ℃高压灭菌30 min后,再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 15979-2024《一次性使用卫生用品卫生要求》。

相关卫生用品、化妆品和微生物检验方法中真菌增菌培养、分离和确认要求。

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