胆汁液态培养基：用于粪链球菌胆汁耐受试验的选择性液体培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

胆汁液态培养基的核心是“营养支持 + 高胆盐选择压力 + 生长浑浊判读”。粪链球菌/肠球菌类细菌通常具有较强的胆盐耐受能力，能够在含胆盐环境中存活并生长。培养基中牛脑浸出粉、牛心浸出粉和月示蛋白胨提供较丰富的氮源、维生素和生长因子，葡萄糖提供能量，氯化钠维持渗透压，磷酸氢二钠帮助缓冲pH变化。

牛胆盐是本培养基的关键选择性成分，含量较高，可对许多胆盐敏感菌形成抑制作用。若待检菌能耐受胆盐并利用培养基中的营养物质生长，肉汤会出现明显混浊；若不能耐受胆盐或生长能力不足，培养液通常保持澄清。由于本培养基不含pH指示剂或显色底物，结果主要依据浑浊度判断，而不是颜色变化。

四、使用方法

称取本品63.1 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，按实验需要分装试管后，于121 ℃高压灭菌15 min，冷却备用。

使用时，将经前期分离或确认流程获得的待检菌接种于胆汁液态培养基中，于35～37 ℃培养18～24 h后观察生长情况。若培养液明显混浊，可判为胆汁耐受生长阳性；若培养液澄清或无明显生长，可判为胆汁耐受阴性或生长受抑。判读时应同时设置阳性、阴性质控和未接种空白对照。

五、质量控制

注：质控菌株中的粪肠球菌 ATCC 29212 可代表胆汁耐受阳性表现；金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 用于评价选择性抑制效果。实际质量控制应按企业内控方法和适用标准执行。

六、结果观察与判读

胆汁液态培养基不含显色剂，因此颜色变化不是主要判读依据。若培养液轻微浑浊，应观察是否有菌体沉淀、菌膜或与空白对照存在明显差异，必要时可转种非选择性平板确认是否有活菌生长。

七、与粪链球菌检测流程的关系

在饮用天然矿泉水等样品检测中，粪链球菌属于重要的粪便污染指示菌之一。胆汁耐受试验可作为其鉴别特征之一，用于观察疑似菌是否能在胆盐环境中生长。由于许多肠球菌具备胆盐耐受性，而部分非目标菌对胆盐敏感，因此该试验有助于提高鉴别可靠性。

不过，胆汁耐受阳性并不等于最终确认。粪链球菌或肠球菌类检测通常还需要结合样品过滤或增菌、选择性分离、菌落形态、革兰氏染色、触酶试验、耐盐性、耐热性或其他生化试验进行综合判定。胆汁液态培养基在整个流程中主要承担“胆汁耐受能力验证”的作用。

八、常见问题与原因分析

若粪肠球菌阳性质控生长不良，应检查培养基配制浓度、pH、灭菌条件、牛胆盐质量、菌株活性、接种量和培养温度。高浓度胆盐对细胞有较强压力，即使是耐受菌，若菌株状态较弱或接种量过低，也可能表现为生长不足。

若金黄色葡萄球菌出现明显混浊，应重点排查胆盐是否称量不足或失效、培养基是否误配、接种量是否过大、培养时间是否过长，以及操作中是否发生污染。若未接种空白对照浑浊，则提示培养基污染或灭菌不彻底，本批培养基不宜使用。

若灭菌后培养基出现少量沉淀，应结合原料特性和空白对照判断。含胆盐和脑心浸出物的培养基在加热灭菌后可能出现轻微浑浊或沉淀，若不影响质控结果通常可以接受；若沉淀明显、颜色异常或pH偏离，应重新配制并排查水质、加热和原料状态。

九、与胆汁七叶苷类培养基的区别

胆汁液态培养基和胆汁七叶苷类培养基都可用于肠球菌或粪链球菌相关鉴别，但检测目标不同。胆汁液态培养基主要观察胆汁耐受生长，结果以肉汤浑浊为主；胆汁七叶苷培养基则同时检测胆汁耐受和七叶苷水解反应，常通过黑色或棕黑色变化进行判读。

因此，胆汁液态培养基更适合用于胆汁耐受单项试验，而不是替代所有肠球菌鉴别培养基。

十、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的胆汁液态培养基应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、pH异常、异常沉淀、颜色明显异常或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养液、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 8538-2022《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》。

相关饮用天然矿泉水微生物检验方法中粪链球菌检测和胆汁耐受试验要求。