MRS肉汤：用于乳酸菌培养的经典营养培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、培养基原理

MRS肉汤的核心是“丰富营养 + 可发酵糖源 + 缓冲体系 + 乳酸菌生长促进因子”。蛋白胨、牛肉膏粉和酵母浸膏为乳酸菌提供氨基酸、短肽、维生素、矿物质和核苷酸等复杂营养成分。乳酸菌对部分氨基酸和维生素依赖较强，因此这类复合营养源对其复苏和稳定生长非常重要。

葡萄糖是乳酸菌最重要的发酵底物之一，菌体可利用葡萄糖产生乳酸和能量。随着乳酸积累，培养基pH可能下降，磷酸氢二钾、乙酸钠和柠檬酸钠等成分可在一定程度上维持培养环境稳定，减少过度酸化对菌体生长的影响。乙酸钠和柠檬酸盐还可抑制部分非乳酸菌背景菌，使乳酸菌在培养过程中具有一定生长优势。

吐温-80可为部分乳酸菌提供油酸等脂肪酸相关生长促进因子，同时改善培养环境中疏水性成分的分散。硫酸镁和硫酸锰提供镁、锰离子，这些金属离子可作为多种酶反应的辅助因子，对乳酸菌代谢、抗氧化和稳定生长有帮助。需要注意的是，MRS肉汤虽对乳酸菌较友好，但并非严格选择性培养基，不能单靠肉汤浑浊判断样品中存在乳酸菌。

四、使用方法

称取本品55.2 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，按实验需要分装后，于121 ℃高压灭菌15 min。灭菌结束后冷却备用。

配制时应确保干粉完全溶解，特别是含葡萄糖、吐温-80和盐类成分的培养基，需要充分混匀以保证批内一致性。灭菌后培养基应为均一液体，无污染、无明显异常沉淀或异味。若出现明显颜色加深、沉淀增多或pH偏离，应结合质控结果判断是否可用。

接种时可根据实验目的接入纯培养乳酸菌、样品增菌液或待培养菌株。通常于适宜温度下培养24～72 h，质控条件为36 ℃培养72 h。对于双歧杆菌等对氧敏感的菌株，建议按菌株特性采用厌氧或低氧条件，必要时使用改良MRS体系或添加半胱氨酸等还原性成分。

五、质量控制

注：MRS肉汤为液体培养基，质控结果通常以肉汤浑浊度评价生长情况。对于双歧杆菌等厌氧或氧敏感菌，若培养条件不合适，即使培养基本身合格，也可能出现生长弱或不生长。

六、结果观察与应用提示

乳酸菌在MRS肉汤中生长后通常表现为培养液浑浊、底部沉淀、轻微酸味或pH下降。不同乳酸菌在液体中的生长状态可能不同：乳杆菌可表现为均匀浑浊或沉淀；嗜热链球菌可形成较明显混浊；双歧杆菌在合适厌氧环境下可产生浑浊和沉淀。若培养液保持澄清，可能提示菌株未生长、接种量不足、培养条件不适或培养基失效。

需要强调的是，MRS肉汤变浑浊只能说明有微生物生长，不能直接确认生长菌为乳酸菌。若用于样品检测，培养后应转种相应平板，观察菌落形态，并结合革兰氏染色、触酶试验、产酸特征、分子鉴定或标准方法规定项目综合判定。若用于菌种培养或发酵前扩培，应确保接种菌株为纯培养物，避免杂菌污染。

七、与MRS琼脂和改良MRS培养基的区别

MRS肉汤、MRS琼脂和改良MRS培养基同属MRS体系，但用途不同。MRS肉汤用于液体培养和增菌；MRS琼脂用于分离、计数和观察菌落；改良MRS培养基则常通过添加选择剂或还原剂来适应特定菌群，例如双歧杆菌培养。

因此，MRS肉汤不能替代MRS琼脂进行菌落计数，也不能替代改良MRS用于所有双歧杆菌选择性分离。实际选择应以检测目的、菌种特性和标准方法为依据。

八、常见问题与原因分析

若乳酸菌质控菌株生长不良，应检查培养基配制浓度、pH是否为6.2±0.2、灭菌条件是否过度、葡萄糖是否受热变化、吐温-80是否分散均匀、菌株活性是否正常以及培养温度和时间是否符合要求。乳酸菌对培养基pH和营养因子较敏感，干粉吸潮、原料失效或灭菌过度都可能影响结果。

若双歧杆菌生长弱，应优先检查厌氧环境是否充分、培养容器是否密闭、菌株是否新鲜，以及是否需要添加半胱氨酸等还原性成分。双歧杆菌通常比普通乳杆菌更易受氧影响，MRS肉汤能提供营养支持，但不一定能单独满足所有双歧杆菌的最佳培养条件。

若培养基灭菌后颜色明显加深，可能与葡萄糖受热反应或过度加热有关；若出现沉淀，可能与盐类、酵母浸膏、牛肉膏粉或水质有关。轻微沉淀若不影响质控结果通常可以接受；若沉淀明显、pH异常或质控不合格，应停止使用并排查原因。

九、在乳酸菌检测和培养中的应用价值

乳酸菌广泛存在于发酵乳、乳酸菌饮料、益生菌制品、发酵蔬菜、发酵肉制品和其他食品中。MRS肉汤可为乳酸菌提供适宜的液体培养环境，常用于菌株活化、增菌培养、菌种扩培和后续分离前培养。由于该培养基营养丰富，适合多种乳酸菌生长，也容易支持部分杂菌生长，因此操作中应注意无菌性和菌株纯度。

在食品乳酸菌检测中，应按照相应标准选择培养基、培养温度、厌氧条件和计数方法。MRS肉汤在检测流程中更多用于培养和增菌环节，最终的菌数结果通常需要依赖平板计数或其他定量方法。

十、贮存与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的MRS肉汤应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、明显变色、异常沉淀、pH异常或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养液、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 4789.35-2023《食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验》。

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