滤膜肠球菌琼脂：用于水样肠球菌滤膜法分离与计数的选择性培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

滤膜肠球菌琼脂的核心是“目标菌截留、选择性培养和红色显色”。检测时，水样经滤膜过滤，微生物被截留在滤膜表面。随后将滤膜贴放在培养基表面，培养基中的营养成分支持肠球菌生长，叠氮化钠抑制多种非目标菌，TTC作为显色系统帮助观察典型菌落。

叠氮化钠可抑制许多细菌的呼吸代谢，对不少革兰氏阴性菌具有较强抑制作用，而肠球菌相对耐受，因此可在该培养基上形成菌落。TTC全称为2,3,5-三苯基四氮唑氯化物，是常用氧化还原显色剂。肠球菌生长过程中可将TTC还原为不溶性红色甲臜，使菌落呈红色或深红色，便于在滤膜上识别和计数。

需要注意的是，红色菌落是疑似肠球菌的重要筛选特征，但并非最终确认依据。部分非目标菌在特定条件下也可能形成带色菌落，因此水质检测中通常还需结合确认培养基或生化试验进一步判定。

四、使用方法

称取本品41.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解。该培养基无需高压灭菌，溶解后按实验需要倾注平板或制备适合滤膜法使用的培养基平板。

配制时应避免长时间过度加热。TTC为显色成分，受热和光照均可能影响稳定性；叠氮化钠为选择性化学成分，应避免不必要的高温处理。培养基煮沸溶解后应尽快倒板，倒板前轻轻混匀，避免产生大量气泡。制备后的平板应表面平整、厚度适宜、无污染、无明显水膜或干裂。

滤膜法操作时，应将过滤后的滤膜无菌转移至培养基表面，避免滤膜与培养基之间夹带气泡。滤膜应完全贴附在培养基表面，否则会影响营养扩散、菌落形成和计数准确性。培养后按规定观察红色菌落数量，并结合标准方法进行结果计算和确认。

五、质量控制

注：PR≥0.7表示粪肠球菌在该培养基上的回收能力应达到规定要求；选择性菌株不生长说明叠氮化钠及培养基选择性体系正常。

六、结果观察与计数提示

肠球菌在滤膜肠球菌琼脂上通常形成红色至暗红色菌落，大小、颜色深浅会受菌株、培养时间、滤膜孔径、样品基质和培养基状态影响。计数时应选择菌落分布均匀、无蔓延污染、菌落数量适宜的滤膜进行统计。若菌落过密、相互融合或背景菌较多，应选择合适稀释度重新检测或结合标准方法处理。

由于该培养基以TTC红色显色为主要筛选特征，观察时应避免强光长时间照射平板，以免颜色变化影响判读。计数后如需确认，应及时挑取典型菌落进行后续试验。

七、与水质肠球菌检测流程的关系

滤膜法适合检测水样中数量较低的指示菌。通过过滤较大体积水样，可以将目标菌集中在滤膜表面，从而提高检测灵敏度。滤膜肠球菌琼脂提供选择性培养和显色识别条件，使肠球菌在滤膜上形成可计数菌落。

在水质卫生评价中，肠球菌常作为粪便污染指示菌，尤其在环境水、游泳水、饮用水源或其他水样卫生监测中具有参考意义。由于肠球菌比部分肠道指示菌对环境应激更耐受，检测结果可作为评价水体受到人畜粪便污染风险的重要指标之一。但培养基检测结果仍应结合采样体积、样品保存、过滤条件、培养条件和确认试验综合判断。

八、与其他肠球菌培养基的区别

滤膜肠球菌琼脂与胆汁七叶苷培养基、胆汁液态培养基等都可用于肠球菌相关检测，但用途不同。滤膜肠球菌琼脂侧重水样滤膜法计数；胆汁液态培养基主要观察胆汁耐受；胆汁七叶苷类培养基则常用于鉴别七叶苷水解能力。

因此，滤膜肠球菌琼脂更适合作为滤膜法初筛和计数培养基，不宜替代所有肠球菌确认培养基。

九、常见问题与原因分析

若粪肠球菌质控菌株生长率偏低，应检查培养基配制浓度、pH、加热时间、平板含水量、滤膜贴附状态、菌株活性和培养温度。TTC受热或光照影响后可能导致显色变弱，平板过干也会影响菌落形成和回收率。

若大肠埃希氏菌或金黄色葡萄球菌未被抑制，应检查叠氮化钠是否失效、称量是否准确、培养基是否过度稀释、平板保存是否过久、接种量是否过大，以及是否存在污染或误用培养基。需要注意的是，选择性培养基的抑制能力并非无限，过高背景菌量可能突破选择性，影响判读。

若平板背景颜色异常或菌落颜色不典型，应检查TTC质量、加热时间、储存避光条件和pH。若滤膜上菌落扩散或边缘模糊，可能与滤膜表面水分过多、平板过湿或滤膜贴附不良有关。若滤膜边缘卷曲，可能导致局部菌落缺失或生长不均。

十、叠氮化钠和TTC的安全注意事项

本培养基含叠氮化钠和TTC，操作时应注意个人防护。叠氮化钠具有毒性，称量和配制时应避免吸入粉尘、皮肤接触和误食；TTC为显色试剂，也应避免直接接触。建议佩戴口罩、手套和护目镜，并在通风良好的环境中操作。

含叠氮化钠的培养基废液和废弃平板应按实验室化学和生物安全要求处理。不要将高浓度叠氮化钠溶液直接倒入含铜、铅等金属管道，以免形成危险金属叠氮化物。检测后的带菌滤膜、平板和耗材应经121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室废弃物管理要求处理。

十一、贮存与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和TTC显色性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度、光照和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的平板应避光保存，并在实验室验证期限内使用。若出现污染、明显变色、平板干裂、水膜过多、pH异常或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。滤膜法检测时应注意无菌操作、滤膜完整性、过滤体积和滤膜贴附状态，以保证计数结果可靠。

参考标准与资料

滤膜肠球菌琼脂产品说明。

m-Enterococcus Agar / Slanetz-Bartley Agar 相关培养基资料。

水样滤膜法肠球菌分离、计数与确认相关方法资料。