MMO-MUG培养基：用于饮用水中大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的酶底物培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

MMO-MUG培养基的核心是“定义底物 + 酶反应显色/荧光”。大肠菌群通常具有β-半乳糖苷酶，可水解ONPG，释放黄色产物，使培养液由无色或浅色转为黄色。因此，培养后出现黄色反应，提示样品中存在能产生β-半乳糖苷酶的大肠菌群。

大肠埃希氏菌通常具有β-葡萄糖醛酸酶，可水解MUG，释放具有荧光的4-甲基伞形酮类产物。在366 nm紫外灯下观察，若出现蓝白色荧光，提示大肠埃希氏菌阳性。实际判读中，大肠埃希氏菌阳性通常表现为“黄色并有荧光”；若仅变黄而无荧光，则提示大肠菌群阳性但大肠埃希氏菌阴性；若不变黄且无荧光，则通常判为阴性。

培养基中的无机盐、微量元素和缓冲体系用于维持目标菌生长和酶反应环境；两性霉素B用于抑制真菌干扰；HEPES及HEPES钠盐维持pH稳定，减少样品基质或代谢产物导致的判读偏差。

四、使用方法

将100 mL水样加入100 mL无菌稀释瓶或规定容器中，加入2.7 g±0.5 g本品，混合均匀，使培养基完全溶解后，置36±1 ℃培养箱内培养24 h。培养结束后先在自然光下观察是否变黄，再在366 nm紫外灯下观察是否有荧光。

操作时应注意无菌取样和无菌加样，避免外源大肠菌群污染导致假阳性。培养基加入后应充分溶解，避免粉末残留影响反应均一性。若样品浑浊、有色或含干扰物，应结合空白对照、阴阳性质控和标准方法要求进行判读。

五、质量控制

注：质控表中的“浑浊”说明菌株能够生长，但结果判读的关键仍是黄色和荧光。MMO-MUG培养基的阳性判断不应单独依赖浑浊度。

六、结果判读

观察荧光时应使用波长约366 nm的紫外灯，并在暗处观察。部分容器材质、样品本底或残留清洗剂可能影响荧光判读，因此检测容器应符合方法要求。若阴性对照出现黄色或荧光，说明存在污染或培养基异常，本次结果不宜判读。

七、与饮用水微生物检测流程的关系

生活饮用水中大肠菌群和大肠埃希氏菌是重要卫生指标。大肠菌群提示水体可能受到环境或粪源污染；大肠埃希氏菌与粪便污染关联更强，是饮用水微生物安全评价的重要指标之一。MMO-MUG培养基通过酶底物反应在24 h内进行筛查，适合饮用水和水源水常规检测。

与传统多管发酵法相比，MMO-MUG法操作相对简化，结果判读更依赖颜色和荧光反应。若结合定量盘或多孔检测系统，还可进行最大可能数或定量分析。具体采用定性还是定量方式，应按GB/T 5750.12-2023和实验室方法确认要求执行。

八、常见问题与原因分析

若大肠埃希氏菌质控菌株不变黄或无荧光，应检查培养基加入量、溶解是否充分、培养温度和时间、紫外灯波长、菌株活性、MUG底物稳定性以及培养基是否受潮或过期。MUG荧光观察应在暗环境下进行，紫外灯强度不足也可能导致假阴性。

若弗氏柠檬酸杆菌不变黄，可能说明ONPG反应体系异常、菌株状态不佳或培养条件不符合要求。若鼠伤寒沙门氏菌变黄或出现荧光，应排查菌株污染、培养基污染、误判或样品容器荧光干扰。若无菌水阴性对照变黄或发荧光，应停止使用该批配制体系并重新检查无菌操作和培养基状态。

若样品本身颜色较深，可能影响黄色判读；若样品含天然荧光物质、清洗剂残留或有机物较多，可能干扰MUG荧光观察。对于可疑样品，应结合空白对照、复检和标准方法规定的确认步骤处理。

九、与EC-MUG培养基的区别

MMO-MUG培养基和EC-MUG培养基都可利用MUG荧光反应检测大肠埃希氏菌，但用途和体系不同。EC-MUG培养基通常用于多管发酵法中大肠埃希氏菌检测，具有胆盐、乳糖和MUG等成分；MMO-MUG培养基则属于定义底物酶反应体系，可同时通过ONPG和MUG检测大肠菌群及大肠埃希氏菌。

因此，MMO-MUG培养基不能简单等同于EC-MUG培养基，使用时应按对应标准方法和产品说明执行。

十、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和酶底物性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度、光照和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的检测体系应按方法要求及时培养，不建议长时间放置后再接种或培养。检测后的阳性培养液、容器和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。判读紫外荧光时应避免紫外光直射眼睛和皮肤，必要时佩戴防护眼镜。

参考标准与资料

GB/T 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标》。

相关生活饮用水及水源水中大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法检测资料。

ONPG和MUG酶底物反应及饮用水微生物检测相关资料。