葡萄糖琼脂：用于肠杆菌科葡萄糖发酵确认试验的指示培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

葡萄糖琼脂的核心是“葡萄糖发酵产酸 + 溴甲酚紫变色”。受试菌接种后，若能利用葡萄糖进行发酵代谢，会产生酸性产物，使培养基pH下降。溴甲酚紫在酸性条件下由紫色转为黄色，因此培养基变黄表示葡萄糖发酵阳性。若受试菌不能发酵葡萄糖，培养基pH不发生明显酸化，通常保持紫色，即为阴性。

肠杆菌科细菌多为兼性厌氧菌，葡萄糖发酵试验应尽量减少氧气对结果的影响。产品说明中提到，如需去除培养基中的氧气，可在使用前将葡萄糖琼脂试管置于沸水浴中15 min，然后迅速垂直放置冷却。这一步有助于降低培养基中的溶解氧，使试验更接近发酵条件，减少单纯氧化利用葡萄糖带来的干扰。

需要注意的是，葡萄糖琼脂只检测葡萄糖发酵产酸能力，不能单独确认肠杆菌科。肠杆菌科确认通常还需结合氧化酶阴性、革兰氏阴性无芽胞杆菌形态、VRBGA典型菌落或其他标准方法规定项目综合判断。

四、使用方法

称取本品38.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管后，于121 ℃高压灭菌15 min。灭菌后取出，垂直放置，使培养基凝固成深层琼脂备用。

如需降低培养基中溶解氧，可在使用前将葡萄糖琼脂试管置于沸水浴中15 min，然后迅速垂直放置冷却。待培养基凝固并冷却至适宜接种温度后，用无菌接种针挑取纯培养菌落，沿培养基中央垂直穿刺接种。接种后于36±1 ℃培养24 h，观察培养基颜色变化。

配制后的培养基应颜色均一，通常呈紫色或紫蓝色，无污染、无明显异常沉淀、无裂隙或气泡。若灭菌后明显变黄，可能提示pH偏低、糖类受热变化或配制异常，应检查pH和质控结果后再决定是否使用。

五、质量控制

注：原资料中“支气管炎鲍特氏菌CMCC(B)40001”建议与菌种证书核对后再用于正式标签或网页。若企业内控目的是设置葡萄糖发酵阴性对照，可在知识库文章中写作“葡萄糖不发酵阴性对照菌株”，避免因菌名争议影响技术严谨性。

六、结果判读

观察时应与未接种对照比较。若阴性对照或未接种培养基出现变黄，说明培养基pH、污染或制备过程可能异常。若阳性质控不变黄，则应排查培养基配制、灭菌、菌株活性、培养温度和接种方式。

七、与肠杆菌科检验流程的关系

在食品中肠杆菌科检验中，葡萄糖发酵试验属于确认环节。通常先通过选择性培养基获得疑似菌落，再挑取典型菌落进行确认。肠杆菌科的典型确认特征包括发酵葡萄糖产酸、氧化酶阴性、革兰氏阴性无芽胞杆菌等。葡萄糖琼脂用于验证其中的“葡萄糖发酵产酸”这一关键特征。

因此，葡萄糖琼脂不能替代VRBGA等选择性分离培养基，也不能替代氧化酶试验或其他确认试验。若疑似菌在葡萄糖琼脂中变黄，只能说明其具有葡萄糖发酵产酸能力；是否属于肠杆菌科，还需按标准流程综合判定。

八、常见问题与原因分析

若大肠埃希氏菌质控菌株不变黄，应检查培养基配制浓度、葡萄糖是否漏加或受热变化、pH是否偏高、培养温度和时间是否符合要求、菌株是否新鲜，以及接种量是否足够。若培养基中氧气较多，也可能影响发酵表现，必要时可按说明进行沸水浴驱氧处理。

若阴性对照菌株出现黄色反应，应检查菌株是否污染或误用、培养时间是否过长、培养基pH是否偏低、葡萄糖浓度是否异常，以及是否存在接种操作带入酸性物质的情况。若培养基灭菌后已偏黄，不应继续用于生化判读。

若试管内出现裂隙、气泡或培养基收缩，可能与灭菌后冷却过快、分装气泡未排出、穿刺操作扰动或菌株产气有关。该培养基主要用于判读产酸变色，气体表现可作为辅助观察，但不宜作为核心判定依据。

九、与其他糖发酵培养基的区别

葡萄糖琼脂与糖发酵管、三糖铁琼脂和Kligler铁琼脂等培养基都可反映糖代谢能力，但检测目的不同。葡萄糖琼脂主要用于单一葡萄糖发酵产酸确认，配方简单、判读直接；三糖铁琼脂等则同时检测多种糖发酵、产气和硫化氢等反应。

因此，葡萄糖琼脂适合用于标准规定的葡萄糖发酵确认，不应简单替代其他复合鉴别培养基。

十、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和指示剂性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的葡萄糖琼脂试管应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、颜色异常、pH异常、培养基裂隙明显、脱水收缩或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌试管、培养物和接触样品的耗材，应经121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 4789.41-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 肠杆菌科检验》。

相关食品微生物检验方法中肠杆菌科确认、葡萄糖发酵试验和氧化酶试验资料。