乳酸菌检验稀释液：用于乳酸菌样品制备与梯度稀释的短时保护液

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

乳酸菌检验稀释液的核心作用是“稀释样品 + 分散菌体 + 短时保护”。胰蛋白胨可提供少量肽类和氮源，对受酸、冷藏、干燥或加工影响的乳酸菌具有一定保护作用。氯化钠用于维持适宜离子强度和渗透压，避免菌体在突然进入纯水或渗透压差异较大的环境时发生损伤。

乳酸菌样品常见于发酵乳、乳酸菌饮料、益生菌制品、发酵食品等。这类样品基质可能含有蛋白质、脂肪、糖类、有机酸和胶体成分，直接接种容易造成菌落分布不均或计数误差。使用稀释液进行均质和梯度稀释，可使样品中的菌体充分分散，并获得适合计数的稀释度。

需要注意的是，稀释液不是培养基，不能用“培养后是否浑浊”来评价样品中乳酸菌含量。乳酸菌计数应按标准方法接种至规定培养基，如MRS琼脂、改良MRS琼脂或其他对应培养基，并在规定培养条件下计数。

四、使用方法

称取本品23.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，按实验需要分装后，于121 ℃高压灭菌15 min，冷却备用。

配制后的稀释液应澄清或均一，无污染、无明显沉淀、无异常颜色和异味。使用前应确认灭菌状态、分装体积和保存条件。用于样品稀释时，应严格执行无菌操作，按照标准方法进行样品称量、均质和十倍系列稀释。稀释后应尽快接种，不宜长时间放置，以免菌体数量发生变化。

对于含双歧杆菌的样品，还应注意菌株对氧较敏感，样品处理和接种应尽量缩短暴露时间，并按标准要求选择适宜培养基和厌氧或低氧培养条件。

五、质量控制

六、结果理解与应用提示

乳酸菌检验稀释液的质量控制重点是观察菌株在稀释液中短时间放置后，菌落数是否保持相对稳定。若放置前后菌落数变化在±50%以内，说明稀释液对测试乳酸菌没有明显杀伤或促增殖作用，适合作为样品处理用稀释液。

若菌落数下降过多，可能说明稀释液渗透压、pH、灭菌过程、水质或容器残留物对菌体造成了损伤。若菌落数明显增加，则可能是放置时间过长、温度偏高、稀释液营养水平过高或操作污染导致。稀释液的理想状态是“保持菌数稳定”，而不是让菌体快速生长。

七、与乳酸菌计数培养基的关系

乳酸菌检验稀释液与MRS琼脂、改良MRS琼脂等培养基在检测流程中承担不同功能。稀释液用于样品前处理和梯度稀释，计数培养基用于菌落形成和计数，二者不能互相替代。

因此，乳酸菌检验稀释液不能用于直接计数，也不能替代MRS类培养基进行培养。

八、常见问题与原因分析

若乳酸菌质控菌株放置后回收率偏低，应检查稀释液配制浓度、灭菌条件、分装体积、保存时间、水质、容器是否有清洗剂或消毒剂残留，以及放置温度和时间是否符合要求。双歧杆菌对氧较敏感，处理过程暴露时间过长也可能造成回收下降。

若放置后菌落数明显增加，应检查是否超出规定放置时间、环境温度是否偏高、初始菌液浓度是否过低导致计数误差增大，以及是否存在污染。稀释液含胰蛋白胨，虽然营养不高，但长时间放置仍可能影响菌数稳定性。

若配制后出现浑浊、异味或沉淀，应检查干粉是否吸潮结块、水质是否合格、灭菌是否过度、容器是否污染。若未接种空白对照出现生长，应停止使用该批稀释液并重新配制。

九、标准应用提示

GB 4789.35-2023适用于含活性乳酸菌食品中乳酸菌的检验。乳酸菌样品类型复杂，不同产品中的菌株组成和基质差异较大，因此样品稀释、培养基选择、培养气氛、培养时间和结果计算均应严格按照标准执行。

对于含有嗜热链球菌、乳杆菌和双歧杆菌的产品，应特别注意不同菌群的培养需求差异。嗜热链球菌和乳杆菌多可在相应乳酸菌培养条件下生长，而双歧杆菌通常需要厌氧或低氧环境。稀释液只负责样品处理阶段的稳定性，不能弥补后续培养条件选择不当造成的计数偏差。

十、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的稀释液应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、明显沉淀、pH异常、异味或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌稀释液、平板、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 4789.35-2023《食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验》。

乳酸菌样品稀释、MRS培养基和乳酸菌计数相关食品微生物检验资料。

嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种和长双歧杆菌婴儿亚种相关质控菌株资料。