TGC培养基：用于药品和生物制品无菌检查的硫乙醇酸盐培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、培养基原理

TGC培养基的核心是“营养支持 + 还原环境 + 氧梯度”。蛋白胨、酵母粉和葡萄糖提供微生物恢复与增殖所需的营养物质；硫乙醇酸钠和L-胱氨酸有助于降低培养基氧化还原电位，为厌氧菌和微需氧菌创造相对有利的生长环境；少量琼脂可减缓空气中氧向培养基深层扩散，使试管上部相对有氧、下部相对低氧或厌氧。

刃天青是氧化还原指示剂。培养基暴露于氧气后，上层会逐渐出现粉红色；还原状态下则近乎无色。因此，粉红色层的高度可反映培养基被氧化的程度。临用前如果粉红色部分超过培养基高度的1/3，可用水浴加热去除红色并迅速冷却后使用；如果全管呈粉红色，说明培养基已明显氧化，不应再使用。

TGC培养基能支持多种需氧菌、兼性厌氧菌和厌氧菌生长，因此常用于无菌检查中的广谱微生物培养。但它不是选择性培养基，也不是鉴别培养基，不能根据生长部位单独确认菌种。若无菌试验出现生长，应按相应法规和实验室程序进行复核、分离和鉴定。

四、使用方法

称取本品29.3 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管后，于121 ℃高压灭菌15 min。灭菌后应直立冷却，并尽量减少剧烈振荡和长期暴露空气。

临用时，如果培养基粉红色部分超过1/3高度，应将培养基置水浴中加热，直至红色消失；随后迅速冷却至45 ℃以下并立即接种检品。该恢复操作仅可进行一次。若全管呈现粉红色，说明培养基已明显氧化，不可再用。

分装高度应满足无菌检查需要，试管或容器应密闭保存。由于培养基中含少量琼脂，冷却后可能呈轻微黏稠或流体半固体状态，属于正常现象。使用前应检查培养基外观、粉红色层高度、pH和无菌状态。

五、质量控制

注：不同菌株在TGC培养基中的生长位置与其氧需求有关。需氧菌常在上层生长，厌氧菌多在氧气层以下生长，兼性厌氧菌可在不同深度出现生长。

六、结果观察与应用提示

TGC培养基培养后，可通过浑浊、颗粒状沉淀、条状生长、表层生长、产气或培养基变化观察微生物生长情况。由于该培养基可支持多种微生物，任何明显生长都应视为需要进一步调查的结果。无菌检查中出现疑似生长时，不能仅凭培养基外观直接判定污染菌种，应进行转种、纯化和鉴定。

七、为什么粉红色超过1/3要加热恢复

TGC培养基中的刃天青对氧敏感，氧化后呈粉红色。正常保存过程中，培养基上层接触空气，可能出现少量粉红色，这是氧进入培养基表层的表现。如果粉红色层超过培养基高度的1/3，说明培养基氧化程度较高，可能影响厌氧菌生长。

水浴加热可驱除部分溶解氧，并帮助培养基恢复还原状态。恢复后应迅速冷却并立即使用，避免再次吸氧。该操作仅可进行一次，因为反复加热可能影响培养基营养成分、还原体系和微生物生长性能。若全管粉红，说明培养基还原能力明显不足，不应再用于无菌检查。

八、与普通硫乙醇酸盐培养基的关系

TGC培养基与流体硫乙醇酸盐培养基在原理上相近，都依靠硫乙醇酸盐和刃天青形成还原体系，并通过少量琼脂减缓氧扩散。不同药典或标准中的配方细节、pH范围、培养条件和质控菌株可能略有差异，应以所采用标准和产品说明为准。

因此，TGC培养基在无菌检查中通常作为广谱细菌培养体系的一部分使用，不能简单替代所有无菌检查培养基。

九、常见问题与原因分析

若培养基灭菌后全管粉红，可能是分装容器密封不良、加热溶解过程过度充氧、还原剂失效、保存时间过长或储存条件不当。全管粉红的培养基不应继续用于无菌检查。

若厌氧质控菌生长不良，应检查粉红色层是否过高、是否按规定恢复、培养基是否反复加热、硫乙醇酸钠是否失效、琼脂浓度是否异常、培养温度是否正确以及厌氧菌株活性是否正常。对于产气荚膜梭菌和生孢梭菌，培养基的还原状态十分关键。

若需氧菌质控菌生长不良，应检查培养基营养成分、pH、灭菌条件和菌株活性。若所有菌株均生长不良，应优先排查配制浓度、灭菌过度、水质、干粉吸潮和批次性能。

若未接种对照出现浑浊，说明培养基污染或分装过程不合格，应停止使用该批培养基并重新制备。

十、无菌检查中的应用边界

TGC培养基用于无菌检查中的微生物培养，但无菌检查本身是一套严格的法规方法，包括样品量、接种量、培养基适用性检查、方法适用性试验、培养时间、培养温度和结果判定。培养基合格只是其中一个环节。

对于含防腐剂、抗菌成分、重金属或其他抑菌成分的样品，应进行方法适用性确认，必要时通过稀释、过滤、冲洗、中和或其他经验证方法消除抑菌作用。TGC培养基中的硫乙醇酸钠和L-胱氨酸可减轻部分抑制因素影响，但不能替代完整的方法适用性验证。

十一、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和还原体系性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度、光照和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的TGC培养基应避光、密闭保存，并定期检查粉红色层高度。若出现全管粉红、反复加热、污染、pH异常、明显沉淀、干缩或质控不合格，应停止使用。检测后的带菌培养基、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

日本标准/药典无菌检查相关方法。

FDA Bacteriological Analytical Manual（BAM）：Fluid Thioglycollate Medium相关资料。

药品和生物制品无菌检查、流体硫乙醇酸盐培养基及氧化还原指示体系相关资料。