牛津琼脂（OXA）基础：用于李斯特菌选择性分离的七叶苷显黑培养基
- 2026-06-23 15:10:05
- 逗点生物
牛津琼脂（OXA）基础：用于李斯特菌选择性分离的七叶苷显黑培养基
一、产品用途与基本信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 牛津琼脂（OXA）基础 |
| 英文名称 | Oxford Agar |
| 产品货号 | GF1219 |
| 产品规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 李斯特菌选择性分离培养基基础 |
| 主要用途 | 用于李斯特菌的分离培养 |
| 参考方法 | ISO 11290系列方法 |
| 基础培养基使用量 | 58.5 g/L |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 添加剂加入方式 | 冷却至约50 ℃后，每100 mL基础培养基加入1支TJ078 |
| 推荐培养条件 | 37 ℃培养48 h |
| 典型菌落 | 灰色至黑色菌落，带黑色晕圈 |
| 最终pH | 7.0±0.2（25 ℃） |
| 保质期 | 未开封三年 |
| 应用限制 | 仅用于分离初筛，不能单独作为最终确认依据 |
二、基础配方组成、用量及作用
| 成分 | 用量（g/L） | 主要作用 | 用途说明 |
|---|---|---|---|
| 蛋白胨 | 23.0 | 提供氮源、氨基酸、短肽和部分碳源 | 支持李斯特菌恢复、生长和菌落形成 |
| 可溶性淀粉 | 1.0 | 营养辅助和吸附性成分 | 可吸附部分抑制性代谢物，改善目标菌生长环境 |
| 氯化钠 | 5.0 | 维持渗透压稳定 | 保持细胞正常生理状态 |
| 七叶苷 | 1.0 | 鉴别底物 | 被李斯特菌水解后生成七叶素，与铁离子反应形成黑色物质 |
| 柠檬酸铁铵 | 0.5 | 铁离子来源和显黑反应成分 | 与七叶苷水解产物反应形成黑色复合物 |
| 氯化锂 | 15.0 | 选择性抑菌剂 | 抑制部分非李斯特菌背景菌，提高培养基选择性 |
| 琼脂 | 13.0 | 凝固剂 | 形成稳定平板，便于菌落分离和观察 |
| 最终pH | 7.0±0.2 | 控制酸碱环境 | 保证李斯特菌生长、选择性和显黑反应稳定 |
三、配套试剂TJ078及选择性作用
| TJ078成分 | 每100 mL基础培养基加入量 | 主要作用 | 用途说明 |
|---|---|---|---|
| 多黏菌素E/黏菌素 | 2.5 mg | 抑制部分革兰氏阴性菌 | 降低肠杆菌科等伴随菌干扰 |
| 放线菌酮 | 40 mg | 抑制真菌 | 控制酵母和霉菌污染 |
| 吖啶黄素 | 0.5 mg | 抑制部分非目标菌 | 增强对背景菌的选择性 |
| 头孢替坦 | 0.2 mg | 抑制部分细菌过度生长 | 提高李斯特菌分离效率 |
| 磷霉素 | 1.0 mg | 抑制部分竞争性细菌 | 与其他选择剂共同限制杂菌 |
| OXA基础 | 100 mL | 提供营养、显黑体系和氯化锂选择性 | 与TJ078共同构成完整牛津琼脂 |
四、检验原理
牛津琼脂的核心是“营养支持 + 七叶苷水解显黑 + 多重选择性抑菌”。蛋白胨为李斯特菌提供生长所需的氨基酸、短肽和营养物质，可溶性淀粉可改善培养环境，氯化钠维持渗透压稳定。
李斯特菌可水解七叶苷，生成七叶素，即6,7-二羟基香豆素。该产物与柠檬酸铁铵提供的铁离子反应，形成黑色至棕黑色复合物，使菌落及其周围培养基出现黑色变化。因此，李斯特菌在牛津琼脂上通常形成灰色至黑色菌落，并带黑色晕圈。
选择性方面，基础培养基中的氯化锂可抑制部分非目标菌，配套试剂中的多黏菌素E、吖啶黄素、头孢替坦、磷霉素和放线菌酮进一步抑制革兰氏阴性菌、部分革兰氏阳性背景菌和真菌。需要注意的是，七叶苷水解显黑并非李斯特菌独有反应，少数非目标菌也可能产生类似黑化现象，因此牛津琼脂只能作为分离和初筛培养基，不能作为最终确认培养基。
五、使用方法
称取本品58.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装后于121 ℃高压灭菌15 min。灭菌结束后冷却至约50 ℃，每100 mL基础培养基加入1支配套试剂TJ078，充分混匀后倾注无菌平板备用。
选择性添加剂不宜与基础培养基一同高压灭菌，以免抗菌成分活性下降。加入TJ078时培养基温度应控制在约50 ℃；温度过高可能影响抗菌剂稳定性，温度过低则容易凝固或混匀不均。倒板前应轻轻混匀，避免产生大量气泡。制备后的平板应表面平整、颜色均匀、无污染、无明显水膜和裂纹。
六、质量控制
| 质控指标 | 质控菌株及编号 | 培养条件 | 质控评定标准 | 结果说明 |
|---|---|---|---|---|
| 生长率 | 单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC 19114 | 37 ℃培养48 h | 灰色至黑色菌落，带黑色晕圈 | 验证培养基对目标菌的生长支持能力和七叶苷显黑反应 |
| 生长率 | 单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC 19115 | 37 ℃培养48 h | 灰色至黑色菌落，带黑色晕圈 | 验证另一株目标菌的典型表现 |
| 选择性 | 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 | 37 ℃培养48 h | G≤1 | 验证对部分革兰氏阴性非目标菌的抑制能力 |
| 选择性 | 粪肠球菌 ATCC 29212 | 37 ℃培养48 h | G≤1 | 验证对部分非目标革兰氏阳性菌的抑制能力 |
| 外观检查 | 配制后平板 | 室温观察 | 平板均一，无污染、无明显沉淀、无裂纹 | 评价配制、加剂和倒板状态 |
| pH检查 | 配制后培养基 | 25 ℃ | 7.0±0.2 | 保证目标菌生长和显黑反应稳定 |
注：质控评价应使用加入TJ078后的完整牛津琼脂进行。若仅使用基础培养基，选择性和典型表现均可能不符合完整培养基要求。
七、结果观察与判读
李斯特菌在牛津琼脂上通常形成灰色至黑色菌落，菌落周围可见黑色晕圈。培养24 h时部分菌落可能较小或黑化不明显，培养至48 h后典型特征更清晰。观察时应注意区分典型菌落、非典型菌落和背景黑化现象。
| 观察情况 | 可能含义 | 建议 |
|---|---|---|
| 灰色至黑色菌落，带黑色晕圈 | 疑似李斯特菌 | 挑取典型菌落进行纯化和确认 |
| 平板整体发黑 | 接种量过大、菌落融合或非目标菌干扰 | 选择合适稀释度或重新分离 |
| 目标菌生长弱 | 添加剂过量、平板过干或菌株活性差 | 检查TJ078加入量、平板状态和培养条件 |
| 杂菌较多 | 选择性不足或添加剂失效 | 检查配套试剂保存、加入温度和有效期 |
| 无典型菌落 | 未检出或增菌/分离失败 | 结合增菌培养和其他平板结果判断 |
牛津琼脂的黑色反应具有初筛意义，但不能直接判定为单核细胞增生李斯特氏菌。对疑似菌落应继续进行纯化、运动性观察、溶血试验、生化鉴定、显色培养基复核或分子确认等。
八、与Fraser肉汤、PALCAM琼脂和显色培养基的关系
牛津琼脂通常用于李斯特菌检测流程中的选择性分离环节。Fraser肉汤用于选择性增菌，牛津琼脂和PALCAM琼脂用于分离初筛，显色培养基可用于进一步提高菌落识别效率。
| 培养基 | 状态 | 主要用途 | 典型判读 |
|---|---|---|---|
| Fraser肉汤 | 液体 | 李斯特菌选择性增菌 | 培养基变黑，后续转平板 |
| 牛津琼脂 | 固体平板 | 李斯特菌选择性分离 | 灰色至黑色菌落，带黑色晕圈 |
| PALCAM琼脂 | 固体平板 | 李斯特菌选择性分离 | 灰绿色至黑色菌落，周围黑色晕环 |
| 李斯特菌显色培养基 | 固体平板 | 分离和初步鉴别 | 根据显色底物形成特征颜色菌落 |
因此，牛津琼脂不能替代Fraser增菌，也不能替代最终确认试验。它在流程中的价值是从复杂背景菌中分离出疑似李斯特菌菌落。
九、常见问题与原因分析
若单核细胞增生李斯特氏菌质控菌株生长不良，应检查基础培养基配制浓度、灭菌条件、pH、TJ078是否正确加入、添加剂是否过期或受热、平板是否过干，以及菌株活性是否正常。抗菌剂浓度过高或混匀不均，可能影响目标菌生长。
若大肠埃希氏菌或粪肠球菌选择性不合格，应检查氯化锂和TJ078中抗菌成分是否有效，添加剂加入量是否正确，培养时间是否过长，非目标菌接种量是否过高，以及平板保存是否不当。选择性培养基的抑制能力有限，背景菌过多时可能出现突破生长。
若平板黑化过强或背景发黑，应检查接种量、样品背景菌、培养时间和七叶苷/铁盐反应状态。若未接种平板出现明显变色或污染，应停止使用并重新制备。若菌落黑圈不明显，可能与培养时间不足、培养温度偏离、七叶苷反应弱或目标菌状态不佳有关。
十、应用边界与安全提示
牛津琼脂用于李斯特菌分离培养，不用于临床检验，不用于药敏试验，也不能单独确认单核细胞增生李斯特氏菌。食品样品中可能存在其他七叶苷阳性菌或耐受选择剂的背景菌，因此最终结果必须按ISO 11290系列方法或实验室确认流程进行综合判断。
配套试剂TJ078含多种抗菌剂和放线菌酮，操作时应避免吸入粉尘、皮肤接触和误食。称量和配制时建议佩戴口罩、手套和护目镜，并在通风良好的环境中操作。含抗菌剂的废弃培养基和带菌平板应按实验室生物安全和化学品管理要求处理。
十一、贮存、废物处理与注意事项
本品干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。
制备后的牛津琼脂平板应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、pH异常、明显沉淀、平板干裂、水膜过多、颜色异常或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌平板、培养物和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。
参考标准与资料
ISO 11290-1:2017《食品链微生物学 单核细胞增生李斯特菌和李斯特菌属检测和计数的水平方法 第1部分：检测方法》。
ISO 11290-2:2017《食品链微生物学 单核细胞增生李斯特菌和李斯特菌属检测和计数的水平方法 第2部分：计数方法》。
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