胆汁七叶苷琼脂培养基（BEA）：用于肠球菌选择性分离与七叶苷水解鉴别

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

BEA的核心是“胆盐选择性 + 七叶苷水解显黑”。胆盐可抑制多种胆盐敏感菌，为肠球菌等耐胆盐细菌提供相对选择性环境。蛋白胨则提供基础营养，使目标菌能够形成可观察菌落。

七叶苷是该培养基中的鉴别底物。肠球菌等七叶苷阳性菌可产生相关水解酶，将七叶苷水解为七叶素和葡萄糖。七叶素与培养基中的铁离子反应，形成深褐色至黑色复合物，因此阳性菌落周围常出现褐色或黑色变化。该反应常用于肠球菌和D群链球菌的推定鉴别。

需要注意的是，七叶苷水解并非肠球菌独有反应，部分非肠球菌也可能出现类似显黑现象。因此，BEA可用于疑似筛选和选择性分离，但对关键样品或阳性结果，应结合革兰氏染色、触酶试验、耐盐试验、胆汁耐受、生化鉴定或分子方法等进一步确认。

四、使用方法

称取本品44.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装后于121 ℃高压灭菌15 min。灭菌后冷却至适宜温度，倾注无菌平板或按检测方法制备相应培养形式。

配制时应充分加热溶解，确保胆盐、七叶苷、柠檬酸铁和琼脂分散均匀。制备后的培养基应颜色均一、无污染、无明显异常沉淀、无裂纹和明显水膜。培养基受光照、潮湿或高温影响可能导致指示反应和选择性下降，因此干粉应避光、干燥保存，开封后及时旋紧瓶盖。

五、质量控制

注：原资料中粪肠球菌“PR≤0.5”不符合目标菌生长率评价逻辑，建议修正为“PR≥0.5”。若企业内控采用更高要求，也可统一为“PR≥0.7”。

六、结果观察与判读

肠球菌在BEA上通常表现为菌落生长良好，并在菌落周围形成褐色至黑色反应。阳性结果应观察菌落本身及周围培养基是否出现明显黑化，而不是只看菌落颜色。培养时间过短时黑化可能不明显，培养时间过长或接种量过大时，平板背景可能整体变暗，影响判读。

若用于生活饮用水肠球菌检测，应按GB/T 5750.12-2023规定的样品处理、培养条件、计数和确认流程进行操作。

七、与CATC琼脂的区别

BEA和CATC琼脂均可用于肠球菌检测，但侧重点不同。CATC琼脂更侧重选择性计数和红色菌落观察，BEA更侧重胆盐耐受和七叶苷水解显黑反应，常用于选择性分离和推定鉴别。

因此，BEA适合用于观察肠球菌胆盐耐受和七叶苷水解能力，但仍需结合其他确认试验完成判定。

八、常见问题与原因分析

若粪肠球菌质控菌株生长率不足，应检查培养基配制浓度、pH、灭菌条件、胆盐质量、培养温度和时间、菌株活性以及平板保存状态。胆盐浓度异常、pH偏离或平板过干均可能影响目标菌生长。

若粪肠球菌生长但黑化不明显，应检查七叶苷和柠檬酸铁是否有效、培养时间是否足够、培养基是否过度加热或长期储存、接种量是否过低。若黑化过强或整板变黑，则可能与接种量过大、培养时间过长或样品中七叶苷阳性菌过多有关。

若金黄色葡萄球菌未受抑制，应检查胆盐是否失效、培养基是否过度稀释、接种量是否过大或培养时间是否过长。由于BEA选择性主要依赖胆盐，选择性并非绝对，背景菌量过高时可能出现突破生长。

若培养基出现结块，不应继续使用。结块通常提示吸潮或储存不当，可能导致成分分布不均、pH变化和选择性下降。

九、应用边界与安全提示

BEA可用于肠球菌的选择性分离和推定鉴别，但不能单独确认肠球菌。水样、食品或环境样品中可能存在其他耐胆盐、七叶苷阳性细菌，因此阳性反应应结合菌落形态、革兰氏染色、触酶试验、生化鉴定或标准规定的确认步骤综合判断。

本品不得用于临床检验。检测生活饮用水时，应严格按照GB/T 5750.12-2023执行样品采集、滤膜或接种方法、培养条件、结果计算和确认流程。若用于SN标准相关样品，应按对应行业标准规定执行。

十、贮存、废物处理与注意事项

本品应置于室温、避光、干燥处保存，使用后立即旋紧瓶盖，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩和手套，并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

如产品出现明显次影响，保质时间可能缩短。

如产品出现明显结块、颜色异常或异味，不宜继续使用。制备后的BEA平板应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、pH异常、平板干裂、水膜过多、显黑异常或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌平板、滤膜、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

SN/T 1933.2-2007。

GB/T 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标》。

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