脑心浸液肉汤（BHIB）培养基：用于生活饮用水肠球菌纯培养的富营养肉汤

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、培养基原理

BHIB的核心是“富营养支持 + 缓冲稳定 + 非选择性恢复培养”。牛心粉和胰蛋白胨为细菌提供氨基酸、短肽、矿物质和生长因子，帮助疑似肠球菌在纯培养阶段快速恢复和增殖。葡萄糖作为可利用碳源，为细菌代谢提供能量。氯化钠维持适宜渗透压，无水磷酸氢二钠则维持培养基pH稳定，使细菌在培养过程中不易因酸碱波动受到影响。

由于BHIB营养丰富且不含选择性抑菌剂，它能支持多种细菌生长。因此，BHIB适合用于疑似肠球菌菌落挑取后的纯培养，不适合直接用于水样中肠球菌的选择性计数或分离。若样品中含有混合菌群，直接接种BHIB可能导致多种细菌共同生长，无法进行肠球菌判定。

四、使用方法

称取本品24.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，按实验需要分装后，于121 ℃高压灭菌15 min，冷却备用。

配制后的培养基应澄清或均一，无污染、无明显沉淀、无异常颜色和异味。使用时通常挑取经选择性平板筛选或经初步确认的疑似肠球菌菌落，接种至BHIB中进行纯培养。质控时按产品说明，于45 ℃±0.5 ℃培养48 h±2 h，观察肉汤浑浊情况。

接种操作应严格无菌进行。若用于确认流程，应确保接种来源为单个典型菌落或已纯化菌株，避免混合菌进入肉汤影响后续判读。

五、质量控制

注：该培养基质控温度为45 ℃±0.5 ℃，是针对生活饮用水肠球菌检测流程设置的培养条件；若用于其他一般细菌培养，应按对应标准或实验室验证条件执行。

六、结果观察与判读

BHIB为液体培养基，结果主要观察肉汤是否浑浊、有无沉淀、菌膜、絮状物或其他生长表现。粪肠球菌质控菌株在规定条件下应表现为明显浑浊，浑浊度达到2。若接种后肉汤澄清，说明未见明显生长或菌体生长不足；若未接种空白管出现浑浊，则提示培养基污染或操作污染。

需要强调的是，BHIB中肉汤浑浊只能说明有微生物生长，不能单独证明该菌为肠球菌。肠球菌的确认应结合标准规定的选择性分离、形态观察、生化反应或其他确认方法。

七、与CATC琼脂、BEA的关系

在生活饮用水肠球菌检测中，不同培养基承担不同任务。CATC琼脂用于选择性计数或初筛，BEA用于胆汁七叶苷反应鉴别，BHIB则用于纯培养和恢复培养。三者功能不同，不能互相替代。

因此，BHIB更适合作为确认流程中的营养恢复培养基，而不是水样直接检测的选择性平板。

八、常见问题与原因分析

若粪肠球菌质控菌株生长不良，应检查培养基配制浓度、pH、灭菌条件、培养温度、培养时间、菌株活性和接种量。45 ℃±0.5 ℃培养条件对温控要求较高，温度偏高可能抑制目标菌，温度偏低则可能影响标准方法一致性。

若培养基灭菌后出现明显沉淀、颜色异常或异味，应检查干粉是否吸潮结块、水质是否合格、加热是否过度、灭菌条件是否异常。轻微颜色差异需结合质控结果判断；若质控不合格，应停止使用。

若未接种管出现浑浊，说明分装、灭菌或操作过程中存在污染，应废弃该批培养基并重新配制。若接种后出现明显异味、菌膜或异常沉淀，也应考虑是否混入非目标菌，需要进一步纯化和鉴定。

九、应用边界与注意事项

BHIB为富营养非选择性培养基，可支持多种细菌生长。用于肠球菌检测时，应以纯化后的疑似菌落为接种对象，不宜直接接种未经分离的水样或混合培养物。若用于生活饮用水检测，应严格按照GB/T 5750.12-2023规定的流程、培养条件和判读要求执行。

该培养基不用于临床检验，也不能单独作为肠球菌阳性判定依据。对于关键样品，应结合选择性平板结果、胆汁七叶苷反应、耐受试验和必要的生化或分子鉴定综合判断。

十、贮存、废物处理与注意事项

本品应置于避光、干燥处保存，使用后立即旋紧瓶盖，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩和手套，并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的BHIB应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、pH异常、明显沉淀、异味或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌肉汤、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB/T 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标》。

脑心浸液肉汤（Brain Heart Infusion Broth）培养基相关资料。

生活饮用水肠球菌检测、纯培养和确认培养相关资料。