含6.5%氯化钠脑心浸液肉汤：用于生活饮用水肠球菌耐盐性确认的高盐BHI培养基
- 2026-06-23 17:21:01
- 逗点生物
含6.5%氯化钠脑心浸液肉汤：用于生活饮用水肠球菌耐盐性确认的高盐BHI培养基
一、产品用途与基本信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 含6.5%氯化钠脑心浸液肉汤培养基 |
| 英文名称 | Brain Heart Infusion Broth With 6.5% Sodium Chloride |
| 产品货号 | GF1226 |
| 产品规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 高盐BHI肉汤、肠球菌耐盐性确认培养基 |
| 主要用途 | 用于生活饮用水中肠球菌的纯培养和耐盐性确认 |
| 参考标准 | GB/T 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标》 |
| 使用量 | 84.5 g/L |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 质控培养条件 | 35 ℃±0.5 ℃培养48 h±2 h |
| 典型质控表现 | 粪肠球菌肉汤浑浊，浑浊度2 |
| 最终pH | 7.2±0.2（25 ℃） |
| 保质期 | 未开封三年 |
| 应用限制 | 不得用于临床检验；不能单独作为肠球菌最终确认依据 |
二、配方组成、用量及作用
| 成分 | 用量（g/L） | 主要作用 | 用途说明 |
|---|---|---|---|
| 牛心粉 | 5.0 | 提供动物组织来源营养、氨基酸、矿物质和生长因子 | 改善疑似肠球菌在确认培养中的恢复和生长 |
| 胰蛋白胨 | 10.0 | 提供氮源、氨基酸和短肽 | 支持细菌基础代谢和增殖 |
| 葡萄糖 | 2.0 | 可利用碳源和能量来源 | 为目标菌生长提供能量 |
| 氯化钠 | 65.0 | 提供6.5%高盐环境 | 用于观察疑似肠球菌耐盐生长能力，并抑制部分盐敏感非目标菌 |
| 无水磷酸氢二钠 | 2.5 | 缓冲剂和磷源 | 维持培养基pH稳定，减少培养过程中酸碱波动 |
| 最终pH | 7.2±0.2 | 控制酸碱环境 | 保证高盐条件下肠球菌确认培养稳定 |
三、培养基原理
含6.5%氯化钠脑心浸液肉汤的核心是“富营养支持 + 高盐耐受观察”。牛心粉、胰蛋白胨和葡萄糖为疑似肠球菌提供较丰富的营养，使菌体在高盐压力下仍有足够营养条件恢复和增殖。无水磷酸氢二钠维持pH稳定，减少代谢产物引起的酸碱变化。
6.5%氯化钠是该培养基最重要的功能成分。肠球菌通常具有较强耐盐能力，可在高盐BHI肉汤中生长并使肉汤浑浊；而许多盐敏感菌或非肠球菌D群链球菌在该条件下生长受到抑制。因此，高盐BHI肉汤常用于肠球菌确认流程中的耐盐性试验。
需要注意的是，该培养基对肠球菌具有确认意义，但不是绝对特异性培养基。部分耐盐细菌也可能生长，部分受损肠球菌也可能因菌体状态不佳而生长较弱。因此，结果应结合CATC琼脂、胆汁七叶苷琼脂、生化反应或标准规定的其他确认步骤综合判断。
四、使用方法
称取本品84.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，按实验需要分装后，于121 ℃高压灭菌15 min，冷却备用。
配制时应充分溶解高浓度氯化钠和其他成分，避免分装前浓度不均。灭菌后培养基应澄清或均一，无污染、无明显沉淀、无异常颜色和异味。使用时通常挑取经选择性平板分离或纯化后的疑似肠球菌菌落，接种至本培养基中，于35 ℃±0.5 ℃培养48 h±2 h，观察肉汤浑浊情况。
由于该培养基用于确认培养，接种菌应尽量来自纯培养物，避免混入其他耐盐菌导致误判。若用于质控，应按规定菌株、接种量和培养条件执行。
五、质量控制
| 质控指标 | 质控菌株及编号 | 培养条件 | 质控评定标准 | 结果说明 |
|---|---|---|---|---|
| 生长率 | 粪肠球菌 ATCC 29212 | 35 ℃±0.5 ℃培养48 h±2 h | 肉汤浑浊，浑浊度2 | 验证培养基对肠球菌在6.5%氯化钠条件下的生长支持能力 |
| 外观检查 | 灭菌后培养基 | 室温观察 | 液体均一，无污染、无明显异常沉淀 | 评价配制和灭菌状态 |
| pH检查 | 灭菌冷却后培养基 | 25 ℃ | 7.2±0.2 | 保证高盐确认培养环境稳定 |
| 无菌检查 | 未接种培养基 | 按实验室内控执行 | 不应出现浑浊、菌膜或沉淀性生长 | 验证制备过程无菌性 |
注：本培养基质控温度为35 ℃±0.5 ℃，与普通BHIB产品中用于纯培养的温度条件不同。使用时应按对应产品说明和标准流程执行。
六、结果观察与判读
含6.5%氯化钠脑心浸液肉汤为液体培养基，主要观察接种后肉汤是否出现浑浊。粪肠球菌ATCC 29212在规定条件下应生长良好，肉汤浑浊度达到2。若疑似菌株在该培养基中生长并使肉汤浑浊，提示其具有6.5%氯化钠耐受能力；若培养后仍澄清，则提示该菌株可能不耐高盐或菌体活性不足。
| 观察结果 | 可能含义 | 判读提示 |
|---|---|---|
| 肉汤明显浑浊 | 疑似菌可耐受6.5%氯化钠并生长 | 支持肠球菌确认判断，但需结合其他试验 |
| 肉汤澄清 | 未见明显生长或菌体不耐高盐 | 不支持高盐耐受，需复核菌株活性 |
| 管底少量沉淀 | 可能为菌体沉积或成分沉降 | 可轻轻混匀后观察 |
| 表面菌膜 | 可能混入需氧或耐盐杂菌 | 需重新纯化并复试 |
| 空白对照浑浊 | 培养基污染 | 本次试验不宜判读 |
肉汤浑浊只能说明有菌生长，不能单独证明该菌为肠球菌。对于水样检测，必须结合GB/T 5750.12-2023规定的分离、计数和确认流程综合判定。
七、与普通BHIB的区别
普通脑心浸液肉汤和含6.5%氯化钠脑心浸液肉汤都属于BHI类培养基，但用途不同。普通BHIB主要用于疑似菌株的富营养纯培养；含6.5%氯化钠BHIB则用于观察疑似肠球菌能否在高盐条件下生长。
| 培养基 | 氯化钠含量 | 主要用途 | 判读重点 |
|---|---|---|---|
| 脑心浸液肉汤（BHIB） | 5.0 g/L | 肠球菌纯培养、恢复培养 | 是否生长浑浊 |
| 含6.5%氯化钠脑心浸液肉汤 | 65.0 g/L | 肠球菌耐盐性确认 | 高盐条件下是否生长 |
| CATC琼脂 | 含选择性和显色体系 | 水样肠球菌计数 | 红色菌落 |
| 胆汁七叶苷琼脂（BEA） | 含胆盐、七叶苷和铁盐 | 肠球菌选择性分离和显黑鉴别 | 褐色至黑色反应 |
因此，含6.5%氯化钠BHIB不能替代CATC琼脂进行水样计数，也不能替代BEA进行七叶苷水解鉴别；它主要用于肠球菌确认流程中的耐盐性观察。
八、为什么肠球菌能耐受6.5%氯化钠
肠球菌对环境胁迫的耐受能力较强，能够在较高盐浓度、一定温度范围和胆盐环境中存活或生长。6.5%氯化钠会造成较高渗透压，对许多细菌形成生理压力，使其生长受抑；肠球菌则可通过调节细胞内外渗透压、积累兼容溶质等方式适应高盐环境。
正是由于这种耐盐特性，6.5% NaCl BHI肉汤常被用于肠球菌与部分非肠球菌D群链球菌的鉴别。生活饮用水检测中，将疑似菌株接种至高盐BHIB观察生长，可作为确认流程中的重要参考。
九、常见问题与原因分析
若粪肠球菌质控菌株生长不良，应检查培养基配制浓度、氯化钠称量是否准确、pH是否符合要求、灭菌条件是否过度、培养温度是否准确、菌株是否新鲜以及接种量是否合适。高盐培养基对菌体状态要求较高，老化或受损菌株可能出现生长弱。
若疑似肠球菌在普通BHIB中生长良好，但在6.5%氯化钠BHIB中不生长，应考虑该菌可能不具备高盐耐受性，也可能是接种菌量不足、菌株状态不佳或培养条件偏离。必要时可重新纯化后复试。
若空白对照浑浊，说明培养基污染或分装操作存在问题，应废弃该批培养基。若培养基灭菌后出现明显沉淀或结晶，应检查氯化钠是否完全溶解、分装前是否混匀、水质是否合格以及冷却过程中是否出现析晶。高盐培养基在低温条件下可能更容易出现结晶或析出，应结合质控结果判断是否可用。
十、应用边界与注意事项
含6.5%氯化钠脑心浸液肉汤用于疑似肠球菌的纯培养确认，不适合直接接种未经分离的水样。由于培养基营养丰富，若混入耐盐杂菌，也可能出现浑浊生长。因此，接种前应确保菌落已纯化，必要时先在普通营养培养基或BHIB中恢复，再进行耐盐确认。
该培养基不用于临床检验，也不能单独作为肠球菌最终阳性判定依据。生活饮用水检测应按GB/T 5750.12-2023规定，结合选择性分离、典型菌落、耐盐性、胆汁七叶苷反应或其他确认项目综合判断。
十一、贮存、废物处理与注意事项
本品应置于避光、干燥处保存，使用后立即旋紧瓶盖，避免吸潮、结块和成分分布不均。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩和手套，并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。
配制后的含6.5%氯化钠BHIB应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、pH异常、明显沉淀、结晶、异味或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌肉汤、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。
参考标准与资料
GB/T 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标》。
含6.5%氯化钠脑心浸液肉汤产品说明。
BHI Broth with 6.5% NaCl、肠球菌耐盐性确认和生活饮用水肠球菌检测相关资料。
