肠球菌琼脂(胆汁七叶苷叠氮钠琼脂):配方、原理及使用注意事项
- 2026-06-24 09:54:44
- 逗点生物
肠球菌琼脂(胆汁七叶苷叠氮钠琼脂):配方、原理及使用注意事项
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 肠球菌琼脂(胆汁七叶苷叠氮钠琼脂) |
| 英文名称 | Bile Aesculin Azide Agar / Bile Esculin Azide Agar |
| 货号 | GF1240 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 用途 | 用于生活饮用水中肠球菌的分离培养,也可用于食品和水样中肠球菌相关检测方法 |
| 产品类型 | 选择性鉴别固体培养基 |
| 储存 | 避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年,具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 胰蛋白胨 | 17.0 g/L | 提供肽类、氨基酸和氮源 | 支持肠球菌及相关菌生长 |
| 牛肉浸粉 | 3.0 g/L | 提供氮源、生长因子和微量营养 | 增强基础营养 |
| 酵母浸粉 | 5.0 g/L | 提供B族维生素、氨基酸和生长因子 | 促进目标菌恢复和生长 |
| 牛胆粉 | 10.0 g/L | 胆盐类选择剂 | 抑制部分非目标菌,筛选耐胆盐菌 |
| 氯化钠 | 5.0 g/L | 维持渗透压 | 提供适宜离子环境 |
| 柠檬酸钠 | 1.0 g/L | 缓冲和络合作用 | 稳定培养基体系,辅助选择性 |
| 七叶苷 | 1.0 g/L | 鉴别底物 | 被肠球菌水解后产生七叶亭 |
| 柠檬酸铁铵 | 0.5 g/L | 铁离子来源 | 与七叶苷水解产物反应形成黑色复合物 |
| 叠氮化钠 | 0.25 g/L | 选择性抑制剂 | 主要抑制革兰氏阴性菌 |
| 琼脂 | 13.5 g/L | 凝固剂 | 形成固体平板 |
| 最终pH | 7.2±0.2(25 ℃) | 维持适宜酸碱环境 | 保证目标菌生长及显色反应稳定 |
三、检验原理
肠球菌通常能在胆盐存在下生长,并具有七叶苷水解能力。七叶苷被水解后生成七叶亭,七叶亭与柠檬酸铁铵提供的铁离子反应,形成深褐色至黑色复合物,使菌落周围培养基变黑。典型肠球菌在本培养基上可形成黄褐色至棕褐色菌落,菌落周围出现黑色或深褐色变色区。
| 反应环节 | 作用机制 | 阳性表现 |
|---|---|---|
| 胆盐耐受 | 肠球菌可耐受一定胆盐环境 | 目标菌可生长 |
| 叠氮化钠选择 | 抑制多种革兰氏阴性菌 | 减少背景菌干扰 |
| 七叶苷水解 | 肠球菌水解七叶苷生成七叶亭 | 产生鉴别反应 |
| 七叶亭与铁盐反应 | 七叶亭与铁离子形成深色复合物 | 菌落周围变黑 |
需要注意,胆汁七叶苷阳性并不等于最终确认肠球菌。部分D群链球菌或其他耐受菌也可能出现类似反应,因此正式检验中仍需结合后续确认试验或标准流程进行判定。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品56.3 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 搅拌加热煮沸至完全溶解 |
| 4. 分装或倒瓶 | 按使用需要分装 |
| 5. 灭菌 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 6. 倒板 | 冷却至适宜温度后无菌倾注平板 |
| 7. 保存 | 凝固后倒置,避光、密封并按规定条件保存 |
| 8. 使用前检查 | 检查平板无污染、无明显水滴、无裂纹、颜色正常 |
制备时应避免过度加热。含七叶苷、胆盐和铁盐体系的培养基若长时间高温处理,可能出现颜色加深、沉淀增加或鉴别反应减弱等问题。倒板前应确保培养基完全溶解并混匀,避免局部成分不均影响菌落表现。
五、结果观察与判读
| 菌落表现 | 初步判断 | 说明 |
|---|---|---|
| 生长良好,黄褐色至棕褐色菌落,周围培养基变黑 | 疑似肠球菌阳性 | 具有胆盐耐受和七叶苷水解表现 |
| 菌落生长弱,变黑不明显 | 可疑或需复核 | 可能与菌株状态、培养时间或培养基性能有关 |
| 无生长或明显受抑制 | 阴性或被抑制 | 需结合样品和质控结果判断 |
| 非目标菌生长明显 | 选择性不足 | 应排查培养基选择剂、pH、灭菌和保存条件 |
| 整板颜色异常变深 | 可能制备或保存异常 | 不宜直接用于正式检验 |
培养后应观察菌落形态、颜色和周围变黑情况。典型反应可作为筛选依据,但不能代替确证。若用于生活饮用水或食品水样检测,应按对应标准方法要求进行后续鉴定和结果报告。
六、质量控制
下列质控菌株接种后于36 ℃培养24 h,观察生长和选择性表现。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 预期结果 | 评价意义 |
|---|---|---|---|
| 生长率 | 粪肠球菌 ATCC 29212 | PR≥0.7,黄褐色菌落,菌落周围变黑 | 验证目标菌促生长能力和鉴别反应 |
| 选择性 | 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 | G≤1 | 验证对革兰氏阴性菌的抑制能力 |
| 选择性 | 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 | G≤1 | 验证对部分非目标革兰氏阳性菌的抑制能力 |
| 无菌性 | 未接种平板 | 无菌落生长 | 验证培养基无菌性 |
若粪肠球菌生长不良或不变黑,可能提示培养基营养、七叶苷、铁盐、pH或灭菌条件存在问题;若大肠埃希氏菌或金黄色葡萄球菌生长明显,则可能提示选择性不足、叠氮化钠失效或配制过程异常。
七、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 目标菌生长弱 | 过度灭菌、pH异常、干粉吸潮或平板过干 | 复核pH、灭菌条件和保存状态 |
| 菌落不变黑 | 七叶苷或铁盐反应异常,培养时间不足 | 检查配制、培养时间和质控菌株 |
| 整板背景过黑 | 过度加热、铁盐反应提前发生或储存时间过长 | 控制加热时间,缩短平板储存期 |
| 非目标菌生长多 | 选择剂浓度不足或失效 | 检查称量、干粉状态和灭菌条件 |
| 平板沉淀明显 | 水质、pH、过度加热或原料批次影响 | 使用合格水源并复核配制流程 |
| 平板表面水多 | 倒板温度过高或保存冷凝水过多 | 使用前适当干燥 |
| 结果重复性差 | 接种量、培养时间、平板厚度不一致 | 统一操作条件并做质控 |
八、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基,不得用于临床诊断。由于配方中含叠氮化钠,称量和配制时应避免吸入粉尘,建议佩戴口罩和手套,在通风良好环境中操作。含叠氮化钠废液和废弃培养基应按实验室化学和生物安全要求处理,不应随意排入金属管道。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量时避免吸入粉尘,佩戴口罩和手套 |
| 干粉保存 | 避光、干燥、密封保存 |
| 开封后管理 | 使用后立即盖紧,避免吸潮结块 |
| 平板保存 | 避光、倒置、密封,按验证期限使用 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物需灭菌后处理;含叠氮化钠废液按规定处置 |
| 结果确认 | 典型菌落需结合标准流程进一步确认 |
九、小结
肠球菌琼脂(胆汁七叶苷叠氮钠琼脂)是一种用于肠球菌分离培养的选择性鉴别培养基。牛胆粉和叠氮化钠提供选择性,抑制部分非目标菌;七叶苷和柠檬酸铁铵构成鉴别体系,肠球菌水解七叶苷后与铁盐反应,使菌落周围培养基变黑。
该培养基适用于生活饮用水及食品、水样中肠球菌相关检测的分离培养环节。使用时应注意完全溶解、避免过度加热、控制灭菌条件和保存期限,并通过粪肠球菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌等质控菌株验证促生长能力、选择性和鉴别反应。正式检验结果应结合现行标准方法和后续确认试验进行判定。




