TTC营养琼脂：配方、显色原理及细菌总数测定要点

一、产品概况

成分	用量	主要作用	在培养基中的用途
蛋白胨	10.0 g/L	提供肽类、氨基酸、氮源和部分碳源	支持多数细菌生长
牛肉粉	3.0 g/L	提供氮源、维生素、生长因子和微量营养	增强培养基营养，促进菌落形成
氯化钠	5.0 g/L	维持渗透压	提供适宜离子环境
TTC	0.4 g/L	氧化还原显色指示剂	被细菌还原后形成红色菌落，便于计数
琼脂	15.0 g/L	凝固剂	形成固体平板，便于菌落分离和计数
最终pH	7.3±0.2（25 ℃）	维持接近中性的培养环境	保证多数细菌正常生长和显色反应稳定

TTC全称为2,3,5-三苯基四氮唑氯化物，是一种常用氧化还原指示剂。多数具有代谢活性的细菌可通过脱氢酶等还原系统将无色或浅色的TTC还原为红色三苯甲臜类物质，使菌落呈红色或粉红色。由于红色菌落与培养基背景反差明显，计数时更容易识别。

TTC并非所有细菌都能同等程度还原，因此不同菌株的红色深浅可能不同。若菌落颜色较浅，不应单纯据此判断为阴性或不生长，应结合菌落大小、形态、培养时间和质控结果综合判断。

TTC对光照和过度加热较敏感，配制和保存过程中应尽量避光。灭菌温度和时间应严格按说明书执行，不建议擅自改为121 ℃长时间灭菌，也不建议反复融化已配制的培养基，以免影响显色能力和促生长性能。

质控条件中为36 ℃培养24 h观察。实际样品检测时，应根据检测方法或实验室作业指导书规定的培养温度和时间执行。

用于细菌总数测定时，应选择菌落分散、数量适宜、无明显蔓延的平板进行计数。若红色菌落与背景反差明显，可直接计数；若菌落颜色较浅，应在合适光线下观察，必要时结合普通营养琼脂或方法要求进行复核。

下列质控菌株接种后于36 ℃培养24 h，观察生长率和菌落显色情况。

质控项目	质控菌株及编号	预期结果	评价意义
生长率	鼠伤寒沙门氏菌 ATCC 14028	PR≥0.7，红色菌落	验证对肠杆菌科细菌的促生长和显色能力
生长率	大肠埃希氏菌 ATCC 25922	PR≥0.7，红色菌落	验证培养基促生长能力
生长率	粪肠球菌 ATCC 29212	PR≥0.7，红色菌落	验证对革兰氏阳性球菌的支持能力
生长率	铜绿假单胞菌 ATCC 27853	PR≥0.7，红色菌落	验证对非发酵革兰氏阴性菌的支持能力
无菌性	未接种培养基	无菌落生长	验证培养基无菌性

若质控菌株生长率低，应排查干粉状态、配制用水、pH、灭菌温度、平板干燥程度和菌株活性。若质控菌株生长良好但不显红色或显色明显偏弱，应重点检查TTC稳定性、灭菌条件、避光保存和培养时间。

本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。干粉培养基使用后应立即密封，避免吸潮结块，并贮存于避光、干燥处。

TTC营养琼脂是在营养琼脂基础上加入TTC的细菌总数测定培养基。蛋白胨和牛肉粉提供基础营养，氯化钠维持渗透压，琼脂形成固体平板，TTC作为氧化还原显色指示剂，可被多数细菌还原，使菌落呈红色至粉红色，便于观察和计数。

使用该培养基时，应特别注意TTC的光敏性和热敏性，严格按说明书进行115 ℃高压灭菌15 min，避免过度加热和反复融化。结果判读时，应选择菌落分散、颜色清晰、数量适宜的平板进行计数，并通过鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、粪肠球菌和铜绿假单胞菌等质控菌株验证培养基的促生长能力和显色性能。