胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(TBX)琼脂培养基:配方、显色原理及大肠埃希氏菌计数要点

2026-06-24 10:04:02
逗点生物
简介

胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(TBX)琼脂培养基:配方、显色原理及大肠埃希氏菌计数要点

一、产品概况

项目 内容
产品名称 胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(TBX)琼脂培养基
英文名称 Tryptone Bile X-glucuronide Agar
货号 GF1249
规格 1000 mL用量,32.8 g/瓶
产品类型 选择性显色固体培养基
用途 用于食品中大肠埃希氏菌的计数和初步鉴别
参考标准 GB 4789.38-2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数》
典型结果 大肠埃希氏菌形成蓝绿色菌落
储存 避光、干燥、密封保存
保质期 未开封产品通常为三年,具体以标签为准

二、配方组成、用量、作用及用途

成分 用量 主要作用 在培养基中的用途
胰蛋白胨 20.0 g/L 提供肽类、氨基酸、氮源和碳源 支持大肠埃希氏菌及相关肠杆菌生长
3号胆盐 1.5 g/L 选择性抑制剂 抑制多数革兰氏阳性菌,减少背景菌干扰
BCIG环己胺盐 0.075 g/L X-β-D-葡萄糖醛酸苷显色底物 被β-葡萄糖醛酸苷酶水解后生成蓝绿色显色产物
琼脂 11.2 g/L 凝固剂 形成固体平板,便于菌落分离和计数
最终pH 7.2±0.2(25 ℃) 维持适宜酸碱环境 保证目标菌生长和显色反应稳定

三、检验原理

大多数大肠埃希氏菌可产生β-葡萄糖醛酸苷酶。该酶可水解培养基中的BCIG显色底物,释放出吲哚类显色基团,经氧化后在菌落处形成蓝绿色不溶性产物,使大肠埃希氏菌菌落呈蓝绿色。

3号胆盐可抑制多数革兰氏阳性菌,尤其可减少肠球菌等背景菌对平板计数的干扰。胰蛋白胨为目标菌提供充足营养,使其在选择性条件下形成清晰菌落。

反应环节 作用机制 典型表现
营养支持 胰蛋白胨提供生长所需营养 目标菌形成可见菌落
选择性抑制 胆盐抑制部分非目标菌 背景菌减少
显色底物水解 β-葡萄糖醛酸苷酶水解BCIG 释放显色基团
显色沉积 显色产物在菌落处沉积 菌落呈蓝绿色
特异性区分 非产酶菌通常不显蓝绿色 形成白色或无色菌落

蓝绿色菌落可作为大肠埃希氏菌的典型筛选特征,但不应脱离标准方法直接作为最终结论。特别是在食品样品背景菌复杂、菌落颜色不典型或结果接近限值时,应按标准要求进行复核或确认。

四、使用方法

步骤 操作要点
1. 称量 称取本品32.8 g
2. 加水 加入蒸馏水或去离子水1 L
3. 溶解 搅拌加热煮沸至完全溶解
4. 分装 按实验需要分装
5. 灭菌 121 ℃高压灭菌15 min
6. 冷却 灭菌后冷却至适宜倒板温度
7. 倒板 无菌倾注灭菌平皿
8. 保存 平板凝固后倒置、避光、密封保存
9. 使用前检查 检查平板无污染、无裂纹、无明显冷凝水,颜色正常

显色底物对光照和过度加热较敏感,配制后应避免长时间高温保温或反复融化。倒板时应充分混匀,使显色底物和胆盐分布均一,否则可能造成显色强度不一致或选择性不稳定。

五、结果观察与判读

质控条件中为36 ℃培养24 h观察。食品样品检测时,应严格执行所采用标准方法规定的培养温度、时间和计数规则。

菌落表现 初步判断 说明
蓝绿色菌落 典型大肠埃希氏菌可疑菌落 可按方法要求计数或进一步确认
白色或无色菌落 非典型或非目标菌 通常不作为典型大肠埃希氏菌计数
蓝绿色很浅 可疑菌落 可能与培养时间、菌株状态或底物反应强度有关
背景菌大量生长 选择性不足或样品背景复杂 应复核培养基性能和样品稀释度
菌落过多融合 不宜计数 选择更高稀释度或按方法处理
空白对照有菌落 污染 检测结果无效,需复核

计数时应选择菌落分散、颜色清晰、数量适宜的平板。若蓝绿色菌落边界不清或与背景菌混杂,应谨慎判读,必要时挑取可疑菌落进行确认。

六、质量控制

下列质控菌株接种后于36 ℃培养24 h,观察生长率、选择性和特异性表现。

质控项目 质控菌株及编号 预期结果 评价意义
生长率 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 PR≥0.7,蓝绿色菌落 验证目标菌促生长能力和显色反应
选择性 粪肠球菌 ATCC 29212 G≤1 验证胆盐对革兰氏阳性菌的抑制能力
特异性 阴沟肠杆菌 ATCC 23355 生长良好,白色菌落 验证非目标菌与目标菌的显色差异
无菌性 未接种培养基 无菌落生长 验证培养基无菌性

若大肠埃希氏菌质控菌株生长率低或不显蓝绿色,应排查干粉保存、显色底物稳定性、pH、灭菌条件和平板保存时间。若粪肠球菌生长明显,说明选择性可能不足;若阴沟肠杆菌出现蓝绿色,应复核特异性和显色体系。

七、与传统大肠埃希氏菌检测培养基的区别

传统大肠埃希氏菌检测常利用乳糖发酵、产气、吲哚或荧光底物等特征。TBX琼脂则主要利用β-葡萄糖醛酸苷酶显色反应,使目标菌落呈蓝绿色,具有直观、便于计数的特点。

培养基或方法 主要判读依据 特点
TBX琼脂 β-葡萄糖醛酸苷酶显色,蓝绿色菌落 直观、便于计数
EC-MUG类培养基 MUG荧光和产气等反应 适合部分确认或MPN体系
乳糖发酵类培养基 产酸、产气或颜色变化 传统方法,可能受其他乳糖发酵菌干扰
生化确认试验 吲哚、氧化酶、IMViC等 用于进一步确认

TBX琼脂的优势在于显色直观,但其本质仍是选择性显色培养基。对于特殊样品、特殊菌株或法规检验,应以标准方法规定为准。

八、常见问题与原因分析

常见问题 可能原因 解决建议
大肠埃希氏菌不显蓝绿色 显色底物失效、培养不足、菌株β-葡萄糖醛酸苷酶阴性 使用质控菌株复核,按规定时间培养
蓝绿色偏浅 培养时间不足、菌落小或平板保存时间过长 延长至规定时间或使用新鲜平板
非目标菌出现蓝绿色 背景菌有类似酶活性或判读误差 挑取可疑菌落进一步确认
粪肠球菌未被抑制 胆盐选择性不足或配制异常 检查称量、灭菌和干粉状态
平板背景变色 过度加热、光照或底物降解 避光保存,避免反复融化
菌落扩散或融合 接种量过大或平板表面过湿 调整稀释度,使用前适当干燥
质控菌生长率低 pH异常、灭菌过度、平板过干或干粉吸潮 复核配制和保存条件
计数重复性差 接种体积、稀释、培养条件不一致 统一操作并设置平行样

九、使用与储存注意事项

本品为实验室微生物检验用培养基,不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘,建议佩戴口罩、手套和实验服,在通风良好环境下操作。干粉培养基使用后应立即密封,避免吸潮结块,并贮存于避光、干燥处。

注意事项 要求
用途限制 不得用于临床检验
个人防护 称量时佩戴口罩和手套,避免吸入粉尘
干粉保存 避光、干燥、密封保存
配制用水 使用蒸馏水或去离子水
灭菌条件 121 ℃高压灭菌15 min
避光要求 含显色底物培养基应尽量避光保存
平板保存 倒置、密封、避光,并按验证期限使用
结果确认 蓝绿色菌落为典型筛选结果,必要时按标准确认
废弃物处理 接种后培养物和平板需灭菌后处理

小结

胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(TBX)琼脂培养基是一种用于食品中大肠埃希氏菌计数的选择性显色培养基。胰蛋白胨提供营养,3号胆盐抑制部分非目标菌,BCIG环己胺盐作为显色底物,被大肠埃希氏菌的β-葡萄糖醛酸苷酶水解后形成蓝绿色菌落,便于计数和初步鉴别。

使用该培养基时,应注意显色底物的稳定性,避免过度加热和长时间光照。质量控制应验证大肠埃希氏菌的生长率和显色反应、粪肠球菌的抑制效果,以及阴沟肠杆菌等非目标菌的特异性表现。正式食品检验应结合GB 4789.38-2025等现行标准方法执行,不能仅凭单个显色菌落脱离标准流程作出最终结论。