LBS琼脂：乳酸杆菌分离培养的配方、原理及使用要点
- 2026-06-24 10:23:00
- 逗点生物
LBS琼脂：乳酸杆菌分离培养的配方、原理及使用要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | LBS琼脂 |
| 英文名称 | LBS Agar |
| 货号 | GF1268 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 选择性固体培养基 |
| 用途 | 用于乳酸杆菌的分离培养 |
| 典型菌落 | 乳酸杆菌通常形成白色、凸起菌落 |
| 储存 | 避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 酵母浸粉 | 5.0 g/L | 提供B族维生素、氨基酸和生长因子 | 促进乳酸杆菌生长 |
| 胰酪蛋白胨 | 10.0 g/L | 提供肽类、氨基酸和氮源 | 支持目标菌基础生长 |
| 磷酸二氢钾 | 6.0 g/L | 提供磷源和缓冲能力 | 帮助维持培养基pH稳定 |
| 硫酸亚铁 | 0.034 g/L | 提供铁元素 | 参与微生物部分酶系代谢 |
| 硫酸镁 | 0.575 g/L | 提供镁离子 | 作为多种酶反应辅助因子 |
| 葡萄糖 | 20.0 g/L | 主要碳源和能源 | 促进乳酸杆菌产酸和生长 |
| 乙酸钠 | 25.0 g/L | 选择性成分和缓冲相关成分 | 抑制部分非目标菌，利于乳酸杆菌分离 |
| 柠檬酸钠 | 2.0 g/L | 络合剂和缓冲辅助成分 | 改善培养基选择性和离子环境 |
| 硫酸锰 | 0.12 g/L | 提供锰离子 | 促进乳酸菌相关代谢和生长 |
| 琼脂 | 15.0 g/L | 凝固剂 | 形成固体平板 |
| 吐温-80 | 1.0 g/L | 表面活性剂和脂肪酸来源 | 为乳酸杆菌提供油酸等生长促进因子 |
| 冰乙酸 | 1.3 mL/L | 调节酸度和增强选择性 | 降低pH，抑制部分杂菌 |
| 最终pH | 5.5±0.2（25 ℃） | 维持酸性环境 | 有利于乳酸杆菌选择性分离 |
三、检验原理
LBS琼脂通过“营养支持 + 酸性选择 + 乙酸盐抑制 + 生长因子补充”实现对乳酸杆菌的分离培养。胰酪蛋白胨和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖为目标菌提供可发酵碳源；乙酸钠和冰乙酸形成选择性酸性环境，可抑制许多非目标细菌；无机盐为乳酸杆菌代谢提供必要离子；吐温-80提供乳酸杆菌生长所需的脂肪酸类物质。
| 作用环节 | 主要成分 | 原理 |
|---|---|---|
| 营养支持 | 胰酪蛋白胨、酵母浸粉、葡萄糖 | 为乳酸杆菌提供氮源、碳源和生长因子 |
| 酸性选择 | 冰乙酸、最终pH 5.5±0.2 | 抑制部分不耐酸杂菌 |
| 乙酸盐选择 | 乙酸钠 | 进一步抑制部分背景菌 |
| 离子和酶活支持 | 镁盐、锰盐、铁盐、磷酸盐 | 维持乳酸菌代谢所需环境 |
| 脂肪酸补充 | 吐温-80 | 促进乳酸杆菌生长 |
| 固体分离 | 琼脂 | 形成菌落，便于挑取纯化 |
原资料中提到“磷酸氢二钾”和“柠檬酸铵”，但配方表中实际为磷酸二氢钾和柠檬酸钠。发布产品资料时应以实际配方表为准，避免配方与原理不一致。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品84.0 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 加入冰乙酸 | 加入冰乙酸1.3 mL |
| 4. 溶解 | 搅拌加热煮沸至完全溶解 |
| 5. 当日使用 | 当日使用时，按说明无需高压灭菌 |
| 6. 次日使用 | 次日使用时，118 ℃高压灭菌15 min |
| 7. 倒板 | 冷却至适宜温度后倾注无菌平皿 |
| 8. 保存 | 平板凝固后倒置、避光、密封保存，并尽快使用 |
LBS琼脂含有乙酸和多种选择性成分，过度高温处理可能改变pH、选择性和促生长能力。因此，当日使用通常按说明采用煮沸溶解后倒板；若需次日使用，则按说明进行118 ℃高压灭菌15 min。实际生产和检验中，应严格执行产品说明书或经验证的实验室作业指导书。
五、培养与结果观察
乳酸杆菌通常生长较慢，对培养温度、气体条件和样品来源较敏感。部分乳酸杆菌在微需氧、厌氧或CO₂环境下生长更好，因此培养条件应根据检测目的、样品类型和实验室方法确定。
| 观察项目 | 典型表现 | 说明 |
|---|---|---|
| 目标菌生长 | 白色、乳白色或灰白色菌落 | 不同菌株形态可能不同 |
| 菌落形态 | 圆形、凸起、边缘较整齐 | 可作为初筛参考 |
| 背景菌少 | 选择性良好 | 说明酸性和乙酸盐抑制有效 |
| 背景菌多 | 选择性不足 | 需检查pH、冰乙酸加入量和培养条件 |
| 目标菌生长弱 | 可能条件不适或平板过度处理 | 需复核培养气氛、温度和培养基状态 |
在LBS琼脂上出现白色凸起菌落，只能说明其符合乳酸杆菌疑似菌落表现。正式鉴定仍需结合革兰阳性杆菌形态、无芽胞、触酶反应、糖发酵谱或分子鉴定等结果。
六、质量控制
下列质控菌株接种后于36 ℃培养24 h，观察结果如下。部分乳酸杆菌生长可能较慢，如24 h生长不足，可根据产品说明或实验室验证适当延长培养时间。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 预期结果 | 评价意义 |
|---|---|---|---|
| 特异性/促生长 | 嗜酸乳杆菌 CICC 6005 | 生长良好，白色凸起菌落 | 验证培养基对乳酸杆菌的支持能力 |
| 特异性/促生长 | 植物乳杆菌 ATCC 8014 | 生长良好，白色凸起菌落 | 验证培养基对不同乳酸杆菌的适用性 |
| 无菌性 | 未接种平板 | 无菌落生长 | 验证培养基无菌性 |
| 选择性验证 | 按实验室需要选择非目标菌 | 应被抑制或明显生长受限 | 验证培养基选择性 |
若质控菌株生长不良，应重点排查pH、冰乙酸加入量、加热时间、灭菌条件、平板干燥程度和菌株活性。若非目标菌大量生长，可能提示pH偏高、乙酸量不足或培养基选择性下降。
七、与MRS琼脂的区别
LBS琼脂和MRS琼脂都可用于乳酸菌相关培养，但两者用途和选择性不同。MRS琼脂营养更丰富，常用于乳酸菌分离、计数和培养；LBS琼脂酸性和乙酸盐选择性更明显，更偏向乳酸杆菌分离。
| 项目 | LBS琼脂 | MRS琼脂 |
|---|---|---|
| 主要用途 | 乳酸杆菌选择性分离 | 乳酸菌分离、计数和培养 |
| 选择性来源 | 低pH、冰乙酸、乙酸钠等 | 乙酸盐、柠檬酸盐及营养体系 |
| pH | 约5.5 | 通常约6.2左右，视产品而定 |
| 对非目标菌抑制 | 较强 | 相对温和 |
| 适合对象 | 更偏乳酸杆菌 | 乳酸杆菌、部分乳酸球菌等 |
因此，若目标是尽可能恢复多类乳酸菌，MRS类培养基更常用；若目标是从复杂样品中提高乳酸杆菌分离比例，LBS琼脂更有选择优势。
八、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 乳酸杆菌生长弱 | pH过低、加热过度、菌株状态差或培养气氛不适 | 复核pH和培养条件 |
| 背景菌较多 | 冰乙酸加入不足、pH偏高或平板保存过久 | 校正pH并使用新鲜平板 |
| 平板颜色或气味异常 | 加热过度、乙酸挥发或储存不当 | 控制加热时间并密封保存 |
| 平板凝胶不均 | 琼脂未完全溶解 | 加热至完全溶解并充分混匀 |
| 计数或分离重复性差 | 平板厚度、培养时间、气体条件不一致 | 统一操作条件 |
| 菌落过小 | 培养时间不足或目标菌生长慢 | 延长培养至规定时间 |
| 平板表面水多 | 倒板温度或保存条件不当 | 使用前适当干燥 |
| 干粉结块 | 吸潮 | 不建议继续使用 |
九、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。冰乙酸具有刺激性和腐蚀性，加入时应注意防护，避免接触皮肤和眼睛。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量干粉和加入冰乙酸时佩戴口罩、手套和护目镜 |
| 干粉保存 | 避光、干燥、密封保存 |
| 冰乙酸操作 | 在通风良好环境下加入，避免飞溅 |
| 当日使用 | 按说明煮沸溶解后可直接使用 |
| 次日使用 | 按说明118 ℃高压灭菌15 min |
| 平板保存 | 倒置、避光、密封，并尽快使用 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物和平板需灭菌后处理 |
小结
LBS琼脂是一种用于乳酸杆菌分离培养的选择性固体培养基。其配方以胰酪蛋白胨、酵母浸粉和葡萄糖提供基础营养，以乙酸钠、冰乙酸和酸性pH形成选择性环境，以镁、锰、铁等无机盐和吐温-80促进乳酸杆菌生长。典型乳酸杆菌可形成白色、凸起菌落。
使用时应特别注意冰乙酸加入量、最终pH、加热和灭菌条件。当日使用通常无需高压灭菌；若次日使用，应按说明进行118 ℃高压灭菌15 min。LBS琼脂可提高乳酸杆菌在复杂样品中的分离概率，但疑似菌落仍需结合后续鉴定确认，不能仅凭菌落形态作出最终判断。
