DRBC培养基：饲料中霉菌总数测定的配方、原理及质控要点
- 2026-06-24 10:37:22
- 逗点生物
DRBC培养基：饲料中霉菌总数测定的配方、原理及质控要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | DRBC培养基 |
| 英文名称 | Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol Agar / DRBC Medium |
| 货号 | GF1309 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 霉菌和酵母计数用选择性固体培养基 |
| 配方来源 | GB/T 13092-2025 |
| 用途 | 用于饲料中霉菌总数的测定 |
| 典型特点 | 限制扩散型霉菌蔓延，便于霉菌菌落计数 |
| 储存 | 避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 蛋白胨 | 5.0 g/L | 提供肽类、氨基酸、氮源和生长因子 | 支持霉菌、酵母生长 |
| 葡萄糖 | 10.0 g/L | 易利用碳源和能源 | 促进霉菌和酵母形成菌落 |
| 磷酸二氢钾 | 1.0 g/L | 缓冲盐和磷源 | 维持培养基pH相对稳定 |
| 氯硝胺 | 0.002 g/L | 限制扩散型真菌生长 | 抑制毛霉、根霉等蔓延，利于计数 |
| 七水硫酸镁 | 0.5 g/L | 提供镁离子 | 作为多种酶反应辅助因子，促进细胞生长 |
| 孟加拉红 | 0.025 g/L | 抑制剂和菌落大小限制剂 | 抑制部分细菌并限制快速生长霉菌菌落扩展 |
| 氯霉素 | 0.1 g/L | 抗菌剂 | 抑制细菌，减少背景干扰 |
| 琼脂 | 15.0 g/L | 凝固剂 | 形成固体平板，便于菌落分离和计数 |
| 最终pH | 5.6±0.2（25 ℃） | 维持偏酸性环境 | 有利于霉菌和酵母生长，同时抑制部分细菌 |
三、检验原理
DRBC培养基的核心是“营养支持 + 菌落扩展控制 + 细菌抑制”。蛋白胨和葡萄糖提供霉菌、酵母生长所需的基础营养；磷酸盐和镁盐维持适宜的离子环境；氯硝胺可限制扩散型霉菌蔓延；孟加拉红可抑制部分细菌并限制快速生长型霉菌菌落大小；氯霉素进一步抑制细菌，减少饲料样品中细菌背景对霉菌计数的干扰。
| 作用环节 | 主要成分 | 原理 |
|---|---|---|
| 营养支持 | 蛋白胨、葡萄糖 | 为霉菌和酵母提供氮源、碳源和能源 |
| 缓冲和无机盐 | 磷酸二氢钾、七水硫酸镁 | 维持pH和细胞代谢所需离子环境 |
| 限制蔓延 | 氯硝胺、孟加拉红 | 减缓扩散型和快速生长霉菌的菌落扩展 |
| 抑制细菌 | 氯霉素、孟加拉红、偏酸性pH | 减少细菌背景生长 |
| 固体计数 | 琼脂 | 形成独立菌落，便于计数 |
原资料中“氯硝胺和低pH值能抑制扩散型真菌蔓延”的方向基本正确，但更准确地说，DRBC培养基主要依靠氯硝胺和孟加拉红限制菌落扩展；pH 5.6属于偏酸性环境，有助于抑制部分细菌，但不是DRBC限制蔓延的唯一因素。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品31.6 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 搅拌加热至完全溶解 |
| 4. 分装 | 按实验需要分装 |
| 5. 灭菌 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 6. 冷却 | 冷却至适宜倒板温度 |
| 7. 倒板 | 无菌倾注平板 |
| 8. 保存 | 平板凝固后倒置、避光、密封保存 |
含孟加拉红的培养基对光较敏感，制备、保存和使用过程中应尽量避光。灭菌后不宜长时间高温保温，也不建议反复融化，以免影响孟加拉红、氯霉素和氯硝胺的稳定性及培养基性能。
五、样品检测与计数要点
DRBC培养基用于饲料中霉菌总数测定时，应按GB/T 13092-2025或实验室经验证的作业指导书进行样品制备、稀释、接种、培养和计数。由于饲料样品成分复杂，粉尘、颗粒和本底色可能影响菌落观察，操作中应特别注意样品均质、稀释和接种均匀性。
| 项目 | 操作要点 |
|---|---|
| 样品对象 | 配合饲料、浓缩饲料、饲料原料及相关样品 |
| 接种方式 | 按标准或实验室方法执行 |
| 培养温度 | 常用28 ℃左右，允许偏差按标准或内控文件执行 |
| 培养时间 | 常用5 d |
| 计数对象 | 霉菌菌落，必要时区分酵母样菌落 |
| 结果单位 | 通常按CFU/g或标准规定单位报告 |
DRBC培养基可降低毛霉、根霉等扩散型霉菌对平板的覆盖风险，使其他生长较慢的霉菌更容易被检出。但若样品霉菌数量过高，仍可能出现菌落融合或覆盖，应选择合适稀释度进行计数。
六、结果观察与判读
| 观察结果 | 初步判断 | 说明 |
|---|---|---|
| 霉菌菌落分散、形态清楚 | 可用于计数 | 选择合适菌落数范围的平板 |
| 菌落过多或互相融合 | 不宜直接计数 | 应选择更高稀释度 |
| 扩散型霉菌覆盖平板 | 影响计数 | 记录情况并按方法要求处理 |
| 酵母样菌落明显 | 可记录或按方法要求处理 | 酵母通常圆形、湿润、凸起 |
| 细菌大量生长 | 选择性不足或抗菌剂失效 | 复核培养基和操作流程 |
| 空白对照有菌落 | 污染 | 检测结果无效 |
| 平板颜色异常加深 | 孟加拉红受光或过度加热影响 | 不建议继续用于正式检测 |
霉菌计数时应注意区分菌落与饲料颗粒。霉菌菌落通常具有菌丝、绒毛状、粉状或孢子结构；饲料颗粒则多无生长边缘和扩展结构。必要时可借助低倍显微镜观察。
七、质量控制
下列质控菌株点种待测培养基，28 ℃培养5 d，观察生长率、菌落形态和选择性。温度允许偏差应按标准或实验室内控文件执行。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 预期结果 | 评价意义 |
|---|---|---|---|
| 生长率 | 黑曲霉 ATCC 16404 | PR≥0.7，白色菌丝，黑色孢子 | 验证对霉菌的促生长能力 |
| 生长率 | 白色念珠菌 ATCC 10231 | PR≥0.7，奶油色、圆形凸起菌落 | 验证对酵母样真菌的促生长能力 |
| 生长率 | 酿酒酵母 ATCC 9763 | PR≥0.7，紫红色、圆形凸起菌落 | 验证对酵母的促生长能力和孟加拉红显色背景 |
| 选择性 | 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 | G≤1 | 验证对革兰氏阴性细菌的抑制能力 |
| 选择性 | 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 | G≤1 | 验证对革兰氏阳性细菌的抑制能力 |
| 无菌性 | 未接种培养基 | 无菌落生长 | 验证培养基无菌性 |
若霉菌或酵母质控菌生长率低，应检查pH、灭菌条件、平板保存、孟加拉红光照、氯硝胺和氯霉素稳定性。若大肠埃希氏菌或金黄色葡萄球菌明显生长，说明细菌抑制效果可能不足，应复核抗菌剂和配制流程。
八、DRBC培养基与其他霉菌计数培养基的区别
| 培养基类型 | 主要特点 | 适用场景 |
|---|---|---|
| DRBC培养基 | 含氯硝胺、孟加拉红和氯霉素，可限制扩散型霉菌 | 饲料、食品等霉菌和酵母计数 |
| 孟加拉红培养基 | 通过孟加拉红和抗菌剂抑制细菌、限制菌落扩展 | 常规霉菌酵母计数 |
| DG18培养基 | 降低水分活度，适合低水分食品中的耐干性真菌 | 干燥食品、谷物、坚果等 |
| PDA培养基 | 营养较丰富，选择性弱 | 霉菌培养、纯化和形态观察 |
DRBC培养基更适合存在扩散型霉菌干扰的样品。若样品为低水分、高糖或耐干性真菌风险较高的样品，可根据检测目的选择DG18等其他培养基。
九、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 霉菌菌落过大、蔓延明显 | 氯硝胺或孟加拉红失效，培养时间过长 | 使用新鲜培养基并控制培养时间 |
| 真菌生长率低 | pH异常、过度加热、平板过干或抑制剂过强 | 复核配制和保存条件 |
| 细菌背景多 | 氯霉素失效或污染严重 | 检查培养基批次和样品稀释 |
| 平板颜色变深 | 孟加拉红受光照或高温影响 | 避光保存，避免反复融化 |
| 菌落颜色异常 | 培养基老化或光照影响 | 使用新鲜平板复测 |
| 饲料颗粒影响计数 | 样品均质或沉降不充分 | 规范样品制备和接种操作 |
| 平板表面水多 | 倒板温度高或保存不当 | 使用前适当干燥 |
| 空白对照污染 | 灭菌或无菌操作问题 | 复核灭菌和操作环境 |
十、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。干粉使用后应立即密封，防止吸潮结块，并贮存于避光、干燥处。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量时佩戴口罩和手套，避免吸入粉尘 |
| 干粉保存 | 避光、干燥、密封保存 |
| 配制用水 | 使用蒸馏水或去离子水 |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 避光要求 | 含孟加拉红培养基应避光保存 |
| 平板保存 | 倒置、避光、密封，并按验证期限使用 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物和平板需灭菌后处理 |
小结
DRBC培养基是一种用于饲料中霉菌总数测定的选择性固体培养基。蛋白胨和葡萄糖为霉菌、酵母提供基础营养；磷酸二氢钾和七水硫酸镁维持适宜代谢环境；氯硝胺和孟加拉红限制扩散型霉菌和快速生长霉菌的菌落扩展；氯霉素抑制细菌背景；琼脂形成固体平板，便于计数。
使用时应特别注意孟加拉红的光敏性，培养基配制和保存应避光。正式检测应按GB/T 13092-2025等现行标准执行，选择菌落分散、数量适宜的平板计数，并通过黑曲霉、白色念珠菌、酿酒酵母、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌等质控菌株验证培养基的促生长和选择性。
