改良MSRV培养基：运动型沙门氏菌检测的配方、原理及质控要点
- 2026-06-24 10:37:22
- 逗点生物
改良MSRV培养基：运动型沙门氏菌检测的配方、原理及质控要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 改良MSRV培养基（含抗生素） |
| 英文名称 | Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis Medium，MSRV |
| 货号 | GF1310 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 半固体选择性运动增菌培养基 |
| 用途 | 用于食品和环境样品中运动型沙门氏菌的检测 |
| 参考方法 | ISO 6579-1、ISO 11133 |
| 典型阳性表现 | 接种点周围形成灰白色浑浊扩散区，并逐渐向外迁移 |
| 储存 | 常温、避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 动植物组织酶解物 | 4.6 g/L | 提供肽类、氨基酸、氮源和碳源 | 支持沙门氏菌恢复和生长 |
| 酸水解酪蛋白 | 4.6 g/L | 提供氨基酸和可利用氮源 | 促进目标菌在选择性环境中增殖 |
| 氯化钠 | 7.3 g/L | 维持渗透压 | 提供适宜离子环境 |
| 磷酸二氢钾 | 1.5 g/L | 缓冲盐和磷源 | 稳定培养基pH |
| 无水氯化镁 | 10.9 g/L | 提高渗透压和选择压力 | 参与Rappaport-Vassiliadis体系选择性 |
| 孔雀绿草酸盐 | 0.04 g/L | 选择性抑制剂 | 抑制部分非目标菌生长 |
| 琼脂 | 2.7 g/L | 半固体凝固剂 | 形成低琼脂半固体环境，利于观察运动扩散 |
| 新生霉素钠 | 0.01 g/L | 选择性抗生素 | 抑制部分非沙门氏菌背景菌 |
| pH | 5.1～5.4（25 ℃） | 酸性选择环境 | 抑制部分非目标菌，利于沙门氏菌选择性增殖 |
三、检验原理
MSRV培养基利用运动型沙门氏菌在半固体培养基中迁移扩散的特性进行选择性检测。样品经前增菌后接种于MSRV平板表面，若存在运动型沙门氏菌，目标菌可在选择性环境中增殖，并沿半固体琼脂向接种点外周迁移，形成灰白色浑浊扩散区。再从扩散区边缘挑取培养物转接至XLD等选择性分离培养基，可进一步观察典型沙门氏菌菌落。
| 检测环节 | 主要作用 | 典型表现 |
|---|---|---|
| 前增菌后接种 | 将样品中受损或低数量沙门氏菌恢复后接种 | 接种点位于MSRV平板表面 |
| 选择性增菌 | 氯化镁、孔雀绿和新生霉素抑制部分背景菌 | 非目标菌受抑或仅局部生长 |
| 运动性扩散 | 运动型沙门氏菌沿半固体培养基迁移 | 接种点周围出现灰白色浑浊区 |
| 转接分离 | 从扩散区边缘转接至选择性平板 | XLD上可出现典型疑似沙门氏菌菌落 |
| 后续确认 | 结合标准方法做生化或血清学确认 | 得出最终检测结果 |
MSRV培养基的关键在于“运动性选择”。若只在接种点出现局部生长而无扩散浑浊区，通常不能作为运动型沙门氏菌阳性表现。若出现典型扩散区，也不能直接报告沙门氏菌阳性，还需转接分离和确认。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品31.6 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 搅拌加热煮沸至完全溶解 |
| 4. 冷却 | 冷却至约50 ℃ |
| 5. 倾注平板 | 无菌倾注平板，形成较薄且均匀的半固体层 |
| 6. 凝固 | 平板静置凝固，避免剧烈震动 |
| 7. 使用 | 按ISO方法或实验室作业指导书接种 |
| 8. 培养 | 41.5 ℃±1 ℃需氧培养，观察24 h和48 h结果 |
本品标注为“含抗生素”，配方中已含新生霉素钠。由于新生霉素钠等抗生素可能受高温影响，说明书未要求高压灭菌时，不应擅自增加121 ℃高压灭菌步骤。若使用的是不含抗生素的MSRV基础培养基，则应按对应说明书先处理基础培养基，再在冷却后加入无菌新生霉素添加剂。两类产品不可混淆。
五、结果观察与判读
MSRV平板应于41.5 ℃±1 ℃需氧培养，通常观察2×（24±3）h。即培养24 h后检查一次；若未出现典型扩散区，可继续培养至48 h左右再观察。
| 观察结果 | 初步判断 | 说明 |
|---|---|---|
| 接种点周围出现灰白色浑浊扩散区，并向外迁移 | 疑似运动型沙门氏菌阳性 | 应从扩散区边缘转接选择性分离平板 |
| 浑浊区几乎蔓延至整个平板 | 典型强阳性表现 | 需进一步分离确认 |
| 仅接种点处生长，无扩散浑浊区 | 多为非目标菌或运动性不足 | 通常不作为MSRV阳性 |
| 平板完全无生长 | 可能样品阴性或培养基/前处理异常 | 应结合质控判断 |
| 平板背景菌大量生长 | 选择性不足或样品背景复杂 | 需复核培养基性能和样品处理 |
| 平板过硬，无扩散 | 琼脂浓度、冷却或保存异常 | 影响运动性判读 |
从MSRV阳性扩散区转接XLD琼脂后，疑似沙门氏菌常形成红色或淡红色菌落，部分菌落中心黑色。最终结果仍需依据标准规定的确认流程判定。
六、质量控制
下列质控菌株接种后于41.5 ℃±1 ℃需氧培养2×（24±3）h，观察运动扩散、选择性和转接结果。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 预期结果 | 评价意义 |
|---|---|---|---|
| 生长与运动扩散 | 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC 14028 | 接种点周围出现灰白色浑浊区并向外扩散；24 h～48 h后浑浊区可几乎蔓延至整个平板 | 验证目标菌生长和运动性扩散能力 |
| 生长与运动扩散 | 肠炎沙门氏菌 CMCC(B) 50335 | 出现典型灰白色浑浊扩散区 | 验证对不同沙门氏菌的适用性 |
| 选择性 | 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 | 仅可能在接种点处生长，无浑浊扩散区 | 验证非目标肠杆菌不产生典型扩散 |
| 选择性 | 粪肠球菌 ATCC 29212 | 不生长 | 验证对革兰氏阳性菌的抑制作用 |
| 无菌性 | 未接种平板 | 无生长、无浑浊扩散 | 验证培养基无菌性 |
若沙门氏菌质控菌株无扩散或扩散弱，应检查培养温度、平板半固体状态、琼脂浓度、pH、新生霉素活性、平板厚度和菌株运动性。若大肠埃希氏菌出现明显扩散，说明选择性或判读可能存在问题。
七、与RVS肉汤和选择性分离平板的关系
沙门氏菌检测流程中常见的选择性增菌或分离培养基包括RVS肉汤、MKTTn肉汤、MSRV培养基、XLD琼脂等。它们功能不同，不能简单互相替代。
| 培养基 | 类型 | 主要用途 |
|---|---|---|
| BPW缓冲蛋白胨水 | 非选择性前增菌 | 恢复受损沙门氏菌 |
| RVS肉汤 | 液体选择性增菌 | 促进沙门氏菌选择性增殖 |
| MSRV培养基 | 半固体运动选择性增菌 | 利用运动性检测运动型沙门氏菌 |
| MKTTn肉汤 | 液体选择性增菌 | 沙门氏菌选择性增菌 |
| XLD琼脂 | 选择性分离平板 | 分离疑似沙门氏菌菌落 |
| 生化/血清学确认 | 确认步骤 | 最终确认沙门氏菌 |
MSRV的优势是可通过运动扩散直观筛选运动型沙门氏菌，但其局限是对非运动型或运动性弱的沙门氏菌不适合。正式检测应按ISO 6579-1规定流程执行，不宜只凭MSRV单一结果判定。
八、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 沙门氏菌不扩散 | 平板过硬、培养温度不合适、菌株运动性弱或抗生素受损 | 复核琼脂浓度、温度和质控菌株 |
| 平板无生长 | 培养基选择性过强、pH异常或样品前处理失败 | 检查pH、配制流程和前增菌步骤 |
| 大肠埃希氏菌出现扩散 | 选择性不足或判读误差 | 复核新生霉素、孔雀绿和培养条件 |
| 粪肠球菌生长 | 选择性不足或配制错误 | 检查培养基批次和保存条件 |
| 平板表面过湿 | 倾注或保存不当 | 使用前适当干燥 |
| 平板过软或不成形 | 琼脂含量不足或配制比例错误 | 核对称量和加水量 |
| 颜色异常 | 孔雀绿受光或配制异常 | 避光保存并复核配制 |
| 结果重复性差 | 平板厚度、接种量、培养温度不一致 | 统一操作并做好记录 |
九、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。干粉培养基使用后应立即密封，避免吸潮结块，并贮存于避光、干燥处。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量时佩戴口罩和手套，避免吸入粉尘 |
| 干粉保存 | 避光、干燥、密封保存 |
| 配制用水 | 使用蒸馏水或去离子水 |
| 灭菌说明 | 含抗生素成品按说明煮沸溶解，不擅自高压灭菌 |
| 平板状态 | 应为半固体，不能过硬或过软 |
| 培养条件 | 41.5 ℃±1 ℃需氧培养 |
| 结果确认 | MSRV阳性扩散区需转接分离并确认 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物和平板需灭菌后处理 |
小结
改良MSRV培养基是一种用于食品和环境样品中运动型沙门氏菌检测的半固体选择性培养基。动植物组织酶解物和酸水解酪蛋白提供营养，氯化镁、孔雀绿和新生霉素钠形成选择性环境，低琼脂含量使运动型沙门氏菌能够从接种点向外迁移，形成灰白色浑浊扩散区。
使用该培养基时应把握三点：第一，本品为含抗生素MSRV成品，应按说明煮沸溶解后冷却倒板，不应擅自高压灭菌；第二，MSRV用于检测运动型沙门氏菌，不适用于非运动型沙门氏菌；第三，出现典型扩散区后仍需转接XLD等选择性分离平板，并按ISO 6579-1等标准方法进行后续确认，不能仅凭MSRV扩散现象直接报告最终阳性。
