改良沙堡弱琼脂培养基：一次性使用卫生用品真菌菌落总数检测的配方、原理及质控要点
- 2026-06-24 10:37:22
- 逗点生物
改良沙堡弱琼脂培养基：一次性使用卫生用品真菌菌落总数检测的配方、原理及质控要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 改良沙堡弱琼脂培养基 |
| 英文名称 | Modified Sabouraud Dextrose Agar Medium |
| 货号 | GF1321 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 真菌计数用选择性固体培养基 |
| 配方来源 | GB 15979-2024《一次性使用卫生用品卫生要求》 |
| 用途 | 用于一次性使用卫生用品中真菌菌落总数检测 |
| 典型培养对象 | 酵母菌和霉菌 |
| 储存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 葡萄糖 | 40.0 g/L | 主要碳源和能源 | 促进酵母菌和霉菌生长 |
| 蛋白胨 | 10.0 g/L | 提供肽类、氨基酸、氮源和生长因子 | 支持真菌细胞生长和恢复 |
| TTC | 0.05 g/L | 氧化还原显色指示剂 | 被有代谢活性的菌体还原后，使部分菌落呈粉红色至红色 |
| 氯霉素 | 0.05 g/L | 抗菌剂 | 抑制多数细菌，减少细菌背景干扰 |
| 琼脂 | 15.0 g/L | 凝固剂 | 形成固体平板，便于真菌菌落分离和计数 |
| 最终pH | 5.6±0.2（25 ℃） | 维持偏酸性环境 | 有利于真菌生长，并辅助抑制部分细菌 |
三、检验原理
改良沙堡弱琼脂培养基的核心是“真菌营养支持 + 细菌抑制 + 菌落显色”。葡萄糖和蛋白胨为酵母菌、霉菌提供生长所需的碳源、氮源和生长因子；pH 5.6左右的偏酸性环境适合多数真菌生长，同时可抑制部分细菌；氯霉素进一步抑制细菌背景；TTC可被具有代谢活性的菌体还原，生成红色或粉红色不溶性还原产物，使菌落更易观察。
| 作用环节 | 主要成分 | 原理 |
|---|---|---|
| 营养支持 | 葡萄糖、蛋白胨 | 为酵母菌和霉菌提供碳源、氮源和生长因子 |
| 细菌抑制 | 氯霉素、偏酸性pH | 减少细菌背景生长 |
| 显色辅助 | TTC | 经真菌代谢还原后形成粉红色或红色菌落 |
| 固体计数 | 琼脂 | 形成独立菌落，便于计数 |
| 方法适配 | 改良沙堡弱体系 | 适用于卫生用品真菌菌落总数检测 |
TTC并不是专属于细菌的显色剂，酵母菌和部分霉菌也可表现出不同程度的TTC还原反应。因此，菌落颜色深浅会受到菌种、培养时间、菌落大小和TTC稳定性的影响。计数时应结合菌落形态进行判断，而不是仅凭颜色深浅判断是否为真菌。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品65.1 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 加热煮沸至完全溶解 |
| 4. 灭菌 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 5. 混匀 | 灭菌后摇匀，防止成分分布不均 |
| 6. 冷却 | 冷却至适宜倒板温度 |
| 7. 倒板 | 无菌倾注平皿 |
| 8. 保存 | 平板凝固后倒置、避光、密封保存 |
配制时应避免长时间高温保温或反复融化。TTC对光和热较敏感，氯霉素也应避免不必要的长时间加热。平板制备后应避光保存，并在经验证的使用期限内使用。
五、样品检测与结果报告要点
一次性使用卫生用品种类较多，包括卫生巾、卫生护垫、纸尿裤、卫生湿巾、棉签、棉柔巾等。不同样品的取样、洗脱、中和和稀释方式可能不同，应按GB 15979-2024及实验室文件执行。
| 项目 | 操作要点 |
|---|---|
| 样品处理 | 按标准要求制备样液或中和剂样液 |
| 接种方式 | 按标准规定体积和方式接种 |
| 培养温度 | 按标准或实验室作业指导书执行 |
| 培养时间 | 通常需连续观察，按规定时间点计数 |
| 计数对象 | 真菌菌落，包括酵母样菌落和霉菌菌落 |
| 结果单位 | 通常以CFU/g或CFU/mL表示 |
| 报告要求 | 应注明检测方法、培养基、培养条件和结果单位 |
真菌菌落总数检测中，若平板上菌落为0，应按标准规定结合样品状态、稀释倍数和接种量报告检测结果；若菌落超过可计数范围，应按方法要求选择合适稀释度或进行复测。
六、结果观察与判读
| 观察结果 | 初步判断 | 说明 |
|---|---|---|
| 淡粉色、红色或奶油色圆形菌落 | 多为酵母样菌落 | 可按真菌菌落计数 |
| 白色菌丝并形成黑色孢子 | 典型霉菌生长 | 可按霉菌菌落计数 |
| 菌落融合或霉菌覆盖平板 | 不宜直接计数 | 应选择合适稀释度或按方法处理 |
| 细菌样小菌落较多 | 细菌抑制不足或样品背景复杂 | 需复核培养基和操作流程 |
| 空白对照有菌落 | 污染 | 检测结果无效 |
| 质控菌生长不良 | 培养基或培养条件异常 | 需复核配制、pH、灭菌和菌株状态 |
观察真菌菌落时，应注意区分酵母菌、霉菌、样品颗粒和细菌污染。酵母菌落通常圆形、湿润、凸起；霉菌菌落常呈绒毛状、粉状、丝状或带孢子结构。必要时可结合显微镜观察进行辅助判断。
七、质量控制
下列质控菌株接种后于30 ℃±1 ℃培养72 h～120 h，观察生长率和选择性。正式样品检测时，培养条件应以GB 15979-2024或实验室作业指导书为准。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 预期结果 | 评价意义 |
|---|---|---|---|
| 生长率 | 白色念珠菌 ATCC 26790 | PR≥0.7，淡粉色圆形菌落 | 验证对酵母样真菌的促生长能力 |
| 生长率 | 酿酒酵母 ATCC 9763 | PR≥0.7，红色菌落 | 验证TTC显色和酵母促生长能力 |
| 生长率 | 黑曲霉 CMCC(F) 98003 | PR≥0.7，白色菌丝，黑色孢子 | 验证对霉菌的促生长能力 |
| 选择性 | 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 | G≤1 | 验证对革兰氏阴性细菌的抑制能力 |
| 选择性 | 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 | G≤1 | 验证对革兰氏阳性细菌的抑制能力 |
| 无菌性 | 未接种培养基 | 无菌落生长 | 验证培养基无菌性 |
若白色念珠菌、酿酒酵母或黑曲霉生长率低，应排查pH、灭菌条件、TTC稳定性、氯霉素浓度、平板保存时间和菌株活性。若大肠埃希氏菌或金黄色葡萄球菌明显生长，提示氯霉素抑制效果可能不足或培养基制备存在偏差。
八、与普通沙堡弱琼脂培养基的区别
| 项目 | 改良沙堡弱琼脂培养基 | 普通沙堡弱琼脂培养基 |
|---|---|---|
| 主要用途 | 一次性使用卫生用品中真菌菌落总数检测 | 真菌分离、培养和计数 |
| 抑菌成分 | 含氯霉素 | 可不含或另加抗生素 |
| 显色成分 | 含TTC | 通常不含TTC |
| 菌落观察 | 可出现粉红色、红色等TTC还原色 | 多按自然菌落形态观察 |
| 适用依据 | GB 15979-2024相关方法 | 视检测方法而定 |
改良配方的优势在于减少细菌干扰并增强真菌菌落可见性，更适合一次性使用卫生用品样品中真菌菌落总数测定。
九、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 酵母菌落颜色浅 | TTC还原能力差、培养时间不足或TTC受光热影响 | 使用新鲜平板，按规定时间培养 |
| 真菌生长率低 | pH异常、氯霉素过量、灭菌过度或平板过干 | 复核配制和保存条件 |
| 细菌背景较多 | 氯霉素失效或样品细菌负荷高 | 检查培养基批次和操作流程 |
| 平板颜色异常 | TTC降解、过度加热或光照过强 | 避光保存，避免反复融化 |
| 霉菌覆盖平板 | 样品污染重或稀释不足 | 增加稀释度或按方法处理 |
| 平板表面水多 | 倒板温度高或保存不当 | 倒置保存，使用前适当干燥 |
| 空白对照污染 | 灭菌不足或无菌操作不当 | 复核灭菌和操作环境 |
| 结果重复性差 | 接种体积、样品洗脱、培养条件不一致 | 统一操作并设置平行样 |
十、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。干粉培养基使用后应立即密封，避免吸潮结块，并贮存于避光、干燥处。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量时佩戴口罩和手套，避免吸入粉尘 |
| 干粉保存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 配制用水 | 使用蒸馏水或去离子水 |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 避光要求 | 含TTC培养基应避光保存 |
| 平板保存 | 倒置、密封、避光，并按验证期限使用 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物和平板需灭菌后处理 |
小结
改良沙堡弱琼脂培养基用于一次性使用卫生用品中真菌菌落总数检测。葡萄糖和蛋白胨为酵母菌、霉菌提供营养，氯霉素抑制多数细菌，TTC可被有代谢活性的真菌细胞还原，使部分菌落呈淡粉色或红色，便于观察和计数，琼脂则形成稳定固体平板。
使用时应注意三点：第一，现行标准应写作GB 15979-2024《一次性使用卫生用品卫生要求》，不是GB 15979-2025；第二，TTC和氯霉素相关培养基应避免过度加热、反复融化和长时间光照；第三，真菌菌落总数结果应按标准规定的接种量、培养条件、计数规则和报告单位执行，不能仅凭单个平板或非标准培养条件作出最终判断。
