Letheen肉汤：含季铵盐或阳离子表面活性剂样品中细菌增菌的配方、原理及使用要点
- 2026-06-24 10:37:22
- 逗点生物
Letheen肉汤：含季铵盐或阳离子表面活性剂样品中细菌增菌的配方、原理及使用要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | Letheen肉汤 |
| 英文名称 | Letheen Broth |
| 货号 | GF1800 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 含中和剂的非选择性液体增菌培养基 |
| 用途 | 用于含季铵盐化合物或阳离子表面活性剂产品中的细菌增菌培养 |
| 典型应用 | 化妆品、消毒相关产品、清洁用品、表面采样液等含抑菌残留样品的微生物检测 |
| 核心中和剂 | 卵磷脂、吐温80 |
| 储存 | 避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 牛肉浸粉 | 3.0 g/L | 提供氮源、维生素、矿物质和生长因子 | 支持细菌基础生长；该用量与称取量存在差异，发布前建议核对 |
| 䏡胨/蛋白胨 | 10.0 g/L | 提供肽类、氨基酸和氮源 | 促进多种细菌增殖 |
| 吐温80 | 5.0 g/L | 非离子表面活性剂和中和剂 | 中和酚类、六氯酚、福尔马林等，帮助乳化和分散样品 |
| 卵磷脂 | 0.7 g/L | 中和剂和表面活性成分 | 中和季铵盐类化合物，降低抑菌残留影响 |
| 氯化钠 | 5.0 g/L | 维持渗透压 | 提供适宜离子环境 |
| 最终pH | 7.0±0.2（25 ℃） | 维持近中性培养环境 | 适合多数细菌恢复和增菌 |
三、检验原理
Letheen肉汤的核心作用是“营养恢复 + 抑菌残留中和”。牛肉浸粉和蛋白胨为细菌提供氮源、碳源、维生素和生长因子；氯化钠维持渗透压；卵磷脂和吐温80用于中和样品中的抑菌成分，并帮助分散乳浊液或疏水性样品，使受损细菌更容易恢复生长。
| 作用环节 | 主要成分 | 原理 |
|---|---|---|
| 营养支持 | 牛肉浸粉、蛋白胨 | 提供细菌恢复和增殖所需营养 |
| 渗透压维持 | 氯化钠 | 保持适宜离子强度 |
| 季铵盐中和 | 卵磷脂 | 中和季铵盐类消毒剂或阳离子表面活性剂残留 |
| 酚类和福尔马林中和 | 吐温80 | 中和酚类、六氯酚、福尔马林等抑菌物质 |
| 乳化分散 | 吐温80、卵磷脂 | 改善含油脂或乳浊样品的分散性 |
| 增菌培养 | 液体培养基体系 | 使受损或低数量细菌恢复并增殖 |
需要注意，中和剂的作用有一定范围。Letheen肉汤特别适用于季铵盐、阳离子表面活性剂和部分防腐抑菌成分的中和，但并不代表可以中和所有消毒剂。如果样品中含氯制剂、碘类、醛类高浓度消毒剂或其他复杂防腐体系，应通过中和剂适用性试验验证。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品25.7 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 搅拌加热至完全溶解 |
| 4. 分装 | 按检测需要分装于试管、三角瓶或采样容器 |
| 5. 灭菌 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 6. 冷却 | 冷却后备用 |
| 7. 接种样品 | 按检测方法加入样品或样品稀释液 |
| 8. 培养观察 | 于规定温度和时间培养，观察浑浊度或转接结果 |
配制时应确保卵磷脂和吐温80充分分散。由于培养基中含表面活性剂，灭菌后可能出现轻微乳浊或泡沫，通常不影响使用；若出现明显沉淀、分层、异味或污染，应停止使用并复核配制流程。
五、适用样品与检测思路
Letheen肉汤适合用于含抑菌残留的样品增菌，尤其适合含季铵盐或阳离子表面活性剂的产品。其目的不是选择性分离某一种细菌，而是帮助样品中的受损细菌恢复生长，提高污染菌检出概率。
| 样品类型 | 应用目的 |
|---|---|
| 含季铵盐消毒剂样品 | 中和季铵盐残留，观察细菌是否存活 |
| 化妆品和清洁用品 | 中和防腐或抑菌成分，进行细菌增菌 |
| 含表面活性剂产品 | 改善样品分散性，降低抑菌干扰 |
| 生产环境表面采样液 | 中和采样区域残留消毒剂 |
| 卫生用品或包装材料浸提液 | 提高低水平细菌污染检出率 |
若用于方法适用性验证，应同时设置样品中和对照、阳性质控、阴性对照和空白对照，确认Letheen肉汤既能中和样品抑菌作用，又不会对目标菌产生额外抑制。
六、结果观察与判读
Letheen肉汤为液体培养基，结果通常通过肉汤浑浊、沉淀、表面菌膜或转接平板后的菌落生长进行判断。仅凭浑浊不能直接确认菌种，必要时应进行分离纯化和鉴定。
| 观察结果 | 初步判断 | 说明 |
|---|---|---|
| 肉汤明显浑浊 | 有微生物生长可能 | 需转接平板或进一步鉴定 |
| 肉汤澄清 | 未见明显生长 | 应结合培养时间和质控判断 |
| 底部沉淀增多 | 可能有细菌生长或样品沉淀 | 需与空白对照比较 |
| 表面菌膜 | 可能有需氧菌或污染菌生长 | 需转接确认 |
| 空白对照浑浊 | 培养基或操作污染 | 检测结果无效 |
| 阳性质控不浑浊 | 培养基促生长或中和能力异常 | 应复核培养基和菌株状态 |
在含防腐剂或消毒剂样品中，若阳性对照菌不能恢复生长，说明中和体系可能不足或样品抑菌性过强，应调整中和剂体系或稀释方案，并进行方法确认。
七、质量控制
下列质控菌株接种后于35 ℃～37 ℃培养40 h～48 h，观察肉汤浑浊情况。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 预期结果 | 评价意义 |
|---|---|---|---|
| 生长率/促生长 | 伤寒沙门氏菌 CMCC(B) 50071 | 肉汤浑浊，浑浊度2 | 验证对肠杆菌科细菌的促生长能力 |
| 生长率/促生长 | 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 | 肉汤浑浊，浑浊度2 | 验证培养基基础营养和恢复能力 |
| 生长率/促生长 | 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 | 肉汤浑浊，浑浊度2 | 验证对革兰氏阳性菌的支持能力 |
| 无菌性 | 未接种培养基 | 澄清，无微生物生长 | 验证培养基无菌性 |
若质控菌株生长不良，应排查pH、灭菌条件、干粉吸潮、配制用水、表面活性剂分散状态和菌株活性。若空白对照浑浊，应检查灭菌、分装、培养容器和无菌操作。
八、Letheen肉汤与D/E中和肉汤的区别
Letheen肉汤和D/E中和肉汤都属于含中和剂培养基，但中和范围不同。Letheen肉汤主要依靠卵磷脂和吐温80中和季铵盐、酚类、六氯酚、福尔马林等；D/E中和肉汤通常含更多种中和剂，适用范围更广。
| 项目 | Letheen肉汤 | D/E中和肉汤 |
|---|---|---|
| 主要中和剂 | 卵磷脂、吐温80 | 卵磷脂、吐温80、硫代硫酸盐、亚硫酸盐等多种中和剂 |
| 重点中和对象 | 季铵盐、酚类、六氯酚、福尔马林等 | 氯、碘、醛类、季铵盐、酚类等更广范围 |
| 培养基特点 | 配方相对简单，适合常见防腐和消毒残留 | 中和谱更广，适合复杂消毒剂残留 |
| 适用场景 | 含季铵盐或阳离子表面活性剂产品增菌 | 消毒剂中和验证、环境采样、复杂抑菌体系 |
选择哪种中和培养基，应根据样品中可能存在的抑菌物质决定。若不确定样品抑菌体系，应先进行中和剂有效性和无毒性验证。
九、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 阳性质控不生长 | 灭菌过度、pH异常、干粉吸潮或菌株状态差 | 复核培养基和菌株活性 |
| 样品接种后无生长 | 样品抑菌性过强或中和剂不足 | 做中和剂适用性验证 |
| 空白对照浑浊 | 培养基污染或无菌操作不当 | 复核灭菌和分装流程 |
| 肉汤乳浊难判读 | 吐温80、卵磷脂或样品本身造成浊度 | 设置样品空白对照，必要时转接平板 |
| 灭菌后分层 | 卵磷脂分散不均或冷却过程异常 | 灭菌后充分摇匀 |
| 泡沫较多 | 吐温80表面活性作用 | 避免剧烈振荡，不影响使用时可接受 |
| 结果重复性差 | 样品分散不均、接种量或培养条件不一致 | 加强样品均质和操作标准化 |
| 配方称量疑问 | 配方合计与称取量不一致 | 核对产品标签、批记录和质检文件 |
十、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。干粉培养基使用后应立即密封，避免吸潮结块，并贮存于避光、干燥处。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量时佩戴口罩和手套，避免吸入粉尘 |
| 干粉保存 | 避光、干燥、密封保存 |
| 配制用水 | 使用蒸馏水或去离子水 |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 培养条件 | 35 ℃～37 ℃培养40 h～48 h，按方法执行 |
| 废弃物处理 | 检测后带菌物品121 ℃高压灭菌30 min后处理 |
| 结果确认 | 阳性浑浊肉汤需进一步分离或鉴定 |
小结
Letheen肉汤是一种含中和剂的细菌增菌培养基，适用于含季铵盐化合物或阳离子表面活性剂产品中的细菌增菌培养。牛肉浸粉和蛋白胨提供基础营养，氯化钠维持渗透压，卵磷脂主要中和季铵盐，吐温80可中和酚类、六氯酚、福尔马林等抑菌物质，并改善样品分散性。
使用该培养基时，应重点关注样品中抑菌残留是否被有效中和。对于含复杂防腐剂或消毒剂体系的产品，建议开展中和剂有效性和无毒性验证。资料中配方合计量与使用称取量存在差异，正式发布前应核对原始配方和质检文件，确保配方表、称量用量和产品标签一致。
