沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）：药典真菌计数培养基的配方、原理及质控要点
- 2026-06-24 10:37:45
- 逗点生物
沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）：药典真菌计数培养基的配方、原理及质控要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA） |
| 英文名称 | Sabouraud Dextrose Agar |
| 货号 | GF607 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 非选择性真菌培养用固体培养基 |
| 适用标准 | 中国药典2025年版、中国药典2020年版、中国药典2015年版，以及USP、EP、JP等相关药典体系 |
| 用途 | 用于测定霉菌和酵母菌总数 |
| 典型培养对象 | 白色念珠菌、酿酒酵母、黑曲霉等真菌 |
| 储存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 | 10.0 g/L | 提供肽类、氨基酸、氮源、部分碳源和生长因子 | 支持霉菌和酵母菌生长 |
| 葡萄糖 | 40.0 g/L | 主要可利用碳源和能源 | 促进真菌增殖和菌落形成 |
| 琼脂 | 15.0 g/L | 凝固剂 | 形成固体平板，便于菌落分离、观察和计数 |
| 最终pH | 5.6±0.2（25 ℃） | 维持偏酸性环境 | 有利于真菌生长，并抑制部分细菌干扰 |
三、检验原理
SDA的核心作用是为真菌提供高糖、偏酸性、营养适中的固体生长环境。动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物提供真菌细胞合成所需的氮源、氨基酸和生长因子；葡萄糖作为主要碳源，为霉菌和酵母菌代谢提供能量；琼脂形成固体表面，使单个真菌细胞、孢子或菌丝片段能够形成可见菌落，便于计数。
| 作用环节 | 主要成分 | 原理 |
|---|---|---|
| 氮源供应 | 蛋白胨类混合物 | 提供肽类和氨基酸，支持菌体合成 |
| 碳源供应 | 葡萄糖 | 为真菌生长和繁殖提供能量 |
| 酸性环境 | pH 5.6±0.2 | 有利于真菌生长，减少部分细菌干扰 |
| 固体分离 | 琼脂 | 形成独立菌落，便于计数和纯化 |
| 菌落观察 | 平板培养 | 可观察酵母菌落、霉菌菌丝和孢子特征 |
SDA不是强选择性培养基，不能完全抑制细菌生长。若样品中细菌背景较高，或方法要求进一步抑制细菌，可根据标准选择含氯霉素、庆大霉素等抗生素的沙氏葡萄糖琼脂培养基。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品65.0 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 搅拌加热煮沸至完全溶解 |
| 4. 分装 | 按实验需要分装或准备倒板 |
| 5. 灭菌 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 6. 冷却 | 冷却至适宜倒板温度 |
| 7. 倒板 | 无菌倾注平皿 |
| 8. 保存 | 平板凝固后倒置、避光、密封保存 |
配制时应避免长时间过度加热，以减少葡萄糖热降解和培养基颜色加深。灭菌后如需倒板，应在适宜温度下操作，避免温度过高产生大量冷凝水，也避免温度过低导致琼脂提前凝固。
五、适用场景与计数要点
SDA常用于药典微生物限度检查中的霉菌和酵母菌总数测定，也可用于真菌菌种活化、分离培养、纯化和形态观察。用于计数时，应选择菌落分散、数量适宜的平板，并按规定培养温度、时间和报告单位计算结果。
| 应用场景 | 主要目的 |
|---|---|
| 霉菌和酵母菌总数测定 | 计算样品中可培养真菌数量 |
| 真菌分离培养 | 从样品中分离可疑真菌菌落 |
| 菌种纯化 | 获得单一真菌培养物 |
| 形态观察 | 观察酵母菌落、霉菌菌丝和孢子 |
| 培养基适用性检查 | 验证培养基对规定质控菌株的促生长能力 |
计数时应注意区分真菌菌落、细菌污染和样品颗粒。酵母菌落通常呈乳白色、奶油色、圆形、湿润或凸起；霉菌菌落常呈绒毛状、粉状、丝状，后期可形成不同颜色孢子。
六、结果观察与判读
| 观察结果 | 初步判断 | 说明 |
|---|---|---|
| 乳白色、奶油色圆形菌落 | 酵母样菌落 | 可按方法要求计数或挑取确认 |
| 白色菌丝并形成黑色孢子 | 黑曲霉等霉菌生长 | 可按霉菌菌落计数 |
| 菌落分散、数量适宜 | 可用于计数 | 应结合稀释倍数计算结果 |
| 菌落过多或融合 | 不宜直接计数 | 应选择更高稀释度或复测 |
| 霉菌覆盖平板 | 影响计数 | 按方法要求处理或重新检测 |
| 空白对照有菌落 | 污染 | 检测结果无效 |
| 质控菌生长不良 | 培养基或培养条件异常 | 需复核配制、pH、灭菌和菌株状态 |
SDA平板上真菌生长速度差异较大。酵母菌通常较快形成可见菌落，霉菌可能需要更长时间才能形成典型菌丝和孢子结构。结果判读应以药典或实验室作业指导书规定的培养时间为准。
七、质量控制
下列质控菌株接种待测培养基后，按规定培养条件观察生长率和特征性反应。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 培养条件 | 预期结果 | 评价意义 |
|---|---|---|---|---|
| 生长率 | 白色念珠菌 CMCC(F) 98001 | 20 ℃～25 ℃，48 h | 生长率0.5～2.0，乳白色菌落 | 验证对酵母样真菌的促生长能力 |
| 生长率 | 黑曲霉 CMCC(F) 98003 | 20 ℃～25 ℃，3 d～5 d | 生长良好，白色菌丝，黑色孢子 | 验证对霉菌的促生长能力 |
| 无菌性 | 未接种培养基 | 同条件培养 | 无菌落生长 | 验证培养基无菌性 |
| 外观检查 | 灭菌后平板 | 室温观察 | 凝胶均匀，颜色正常，无异常沉淀或污染 | 验证配制质量 |
若白色念珠菌菌落生长弱或黑曲霉不形成典型菌丝和孢子，应检查干粉保存状态、pH、灭菌条件、平板干燥程度、培养温度、培养时间和菌株活性。若空白对照有菌落，应复核灭菌和无菌操作。
八、SDA与SDB的区别
| 项目 | 沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA） | 沙氏葡萄糖液体培养基（SDB） |
|---|---|---|
| 形态 | 固体琼脂培养基 | 液体培养基 |
| 是否含琼脂 | 含15.0 g/L琼脂 | 不含琼脂 |
| 主要用途 | 真菌分离、培养和菌落计数 | 真菌培养、增菌、菌种活化 |
| 结果观察 | 菌落数量、菌落形态、菌丝和孢子 | 肉汤混浊、菌丝团、菌膜或沉淀 |
| 是否适合直接计数 | 适合 | 不适合直接平板计数 |
实际应用中，SDB可用于真菌增菌或菌种活化，SDA可用于分离培养和菌落计数。产品发布和实验室培训中应明确二者差异，避免将液体培养基和固体培养基混用。
九、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 白色念珠菌生长弱 | pH异常、平板过干、灭菌过度或菌株状态差 | 复核pH、培养条件和菌株活性 |
| 黑曲霉不形成孢子 | 培养时间不足、孢子悬液活性差或培养条件不适 | 延长至规定时间并检查菌株 |
| 平板颜色加深 | 葡萄糖过度加热或灭菌后保温过久 | 控制加热和冷却时间 |
| 平板表面水多 | 倒板温度过高或保存不当 | 倒置保存，使用前适当干燥 |
| 菌落融合 | 样品菌量高或稀释不足 | 选择更高稀释度 |
| 细菌背景较多 | SDA选择性弱或样品细菌负荷高 | 按方法选择含抗生素培养基 |
| 空白对照污染 | 灭菌不足或无菌操作问题 | 复核灭菌和操作环境 |
| 干粉结块 | 吸潮 | 不建议继续使用 |
十、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。干粉培养基使用后应立即密封，防止吸潮结块，并于室温避光干燥处保存。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量时佩戴口罩和手套，避免吸入粉尘 |
| 干粉保存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 配制用水 | 使用蒸馏水或去离子水 |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 平板保存 | 倒置、避光、密封，并按验证期限使用 |
| 培养条件 | 按药典或实验室作业指导书执行 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物和平板需灭菌后处理 |
小结
沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）是药典体系中常用的霉菌和酵母菌总数测定培养基。其配方由动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物、葡萄糖和琼脂组成，最终pH为5.6±0.2。蛋白胨类混合物提供氮源和生长因子，葡萄糖提供碳源，琼脂形成固体平板，便于真菌菌落观察和计数。
使用时应明确SDA与SDB的区别：SDA为固体培养基，适合真菌分离和菌落计数；SDB为液体培养基，适合真菌培养和增菌。药典相关检验应按2025年版《中国药典》或企业确认的适用标准执行，并通过白色念珠菌、黑曲霉等质控菌株验证培养基的促生长能力和无菌性。
