玫瑰红钠琼脂培养基：霉菌和酵母菌总数测定的配方、原理及质控要点
- 2026-06-24 10:37:45
- 逗点生物
玫瑰红钠琼脂培养基：霉菌和酵母菌总数测定的配方、原理及质控要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 玫瑰红钠琼脂培养基 |
| 英文名称 | Rose Bengal Agar |
| 货号 | GF612 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 真菌计数用选择性固体培养基 |
| 适用标准 | 中国药典2025年版、中国药典2020年版、中国药典2015年版，以及USP、EP、JP等相关药典体系 |
| 用途 | 用于测定霉菌和酵母菌总数 |
| 典型培养对象 | 白色念珠菌、黑曲霉等霉菌和酵母菌 |
| 储存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 胨 | 5.0 g/L | 提供肽类、氨基酸、氮源和部分碳源 | 支持霉菌和酵母菌生长 |
| 葡萄糖 | 10.0 g/L | 主要碳源和能源 | 促进真菌增殖和菌落形成 |
| 磷酸二氢钾 | 1.0 g/L | 缓冲盐和磷源 | 稳定培养基pH，维持适宜生长环境 |
| 硫酸镁 | 0.5 g/L | 提供镁离子和硫酸根 | 作为微量元素，参与真菌代谢；原资料写0.05 g/L，建议复核 |
| 玫瑰红钠 | 0.0133 g/L | 选择性抑菌剂和菌落扩展限制剂 | 抑制部分细菌，减缓快速生长霉菌蔓延 |
| 琼脂 | 14.0 g/L | 凝固剂 | 形成固体平板，便于菌落分离和计数 |
| 最终pH | 建议核对，常见同类配方约为6.0±0.2（25 ℃） | 维持适宜酸碱环境 | 影响真菌生长、细菌抑制和玫瑰红钠作用 |
三、检验原理
玫瑰红钠琼脂培养基的核心作用是“营养支持 + 细菌抑制 + 真菌菌落扩展控制”。胨和葡萄糖为霉菌、酵母菌提供基础营养和能量；磷酸二氢钾维持缓冲环境；硫酸镁提供真菌代谢所需镁离子；玫瑰红钠可抑制部分细菌，并减缓某些霉菌因生长过快造成的蔓延；琼脂形成固体平板，便于菌落分离、观察和计数。
| 作用环节 | 主要成分 | 原理 |
|---|---|---|
| 营养支持 | 胨、葡萄糖 | 为霉菌和酵母菌提供氮源、碳源和能源 |
| 缓冲与代谢支持 | 磷酸二氢钾、硫酸镁 | 维持pH和离子环境，支持细胞代谢 |
| 抑制细菌 | 玫瑰红钠、培养基环境 | 降低部分细菌背景干扰 |
| 限制蔓延 | 玫瑰红钠 | 减缓部分快速生长霉菌菌落扩展 |
| 固体计数 | 琼脂 | 形成独立菌落，便于计数 |
玫瑰红钠可使部分酵母样菌落呈粉红色，便于观察。但菌落颜色会受菌种、培养时间、光照和培养基状态影响，因此计数时应结合菌落形态、培养条件和质控结果综合判断。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品30.5 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 搅拌加热至完全溶解 |
| 4. 分装 | 按实验需要分装或准备倒板 |
| 5. 灭菌 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 6. 冷却 | 冷却至适宜倒板温度 |
| 7. 倒板 | 无菌倾注平皿 |
| 8. 保存 | 平板凝固后倒置、避光、密封保存 |
玫瑰红钠对光较敏感，培养基配制、灭菌后冷却、平板保存和培养过程中均应尽量避免长时间强光照射。灭菌后不宜长时间保温，也不建议反复融化，以免培养基颜色、pH和选择性发生变化。
五、适用场景与计数要点
玫瑰红钠琼脂培养基主要用于霉菌和酵母菌总数测定，也可用于真菌分离和培养。由于玫瑰红钠能够限制部分霉菌的扩展，该培养基适合菌落容易蔓延、影响计数的样品。
| 应用场景 | 主要目的 |
|---|---|
| 霉菌和酵母菌总数测定 | 计算样品中可培养真菌数量 |
| 真菌分离培养 | 从样品中分离可疑真菌菌落 |
| 药典微生物限度检查 | 配合药典方法进行真菌计数 |
| 菌种质控 | 检查白色念珠菌、黑曲霉等质控菌株生长 |
| 菌落形态观察 | 观察酵母样菌落和霉菌菌丝、孢子特征 |
用于计数时，应选择菌落分散、数量适宜的平板。若霉菌蔓延严重、菌落融合或覆盖平板，应选择合适稀释度重新计数，或按标准方法规定处理。
六、结果观察与判读
| 观察结果 | 初步判断 | 说明 |
|---|---|---|
| 粉红色、乳白色或奶油色圆形菌落 | 酵母样菌落 | 可按方法要求计数或挑取确认 |
| 白色菌丝并形成黑色孢子 | 黑曲霉等霉菌生长 | 可按霉菌菌落计数 |
| 菌落分散、边界清楚 | 适合计数 | 应结合稀释倍数计算结果 |
| 菌落融合或霉菌蔓延 | 不宜直接计数 | 需选择更合适稀释度 |
| 细菌样小菌落较多 | 抑菌效果不足或样品背景复杂 | 应复核培养基、样品处理和培养条件 |
| 空白对照有菌落 | 污染 | 检测结果无效 |
| 质控菌生长弱 | 培养基或培养条件异常 | 需复核pH、光照、灭菌和菌株状态 |
真菌菌落形态差异较大。酵母菌通常圆形、湿润、凸起；霉菌菌落常呈绒毛状、粉状或丝状，培养后期可能形成不同颜色孢子。必要时可结合显微镜观察进行确认。
七、质量控制
下列质控菌株接种待测培养基后，按规定培养条件观察生长率和特征性反应。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 培养条件 | 预期结果 | 评价意义 |
|---|---|---|---|---|
| 生长率 | 白色念珠菌 CMCC(F) 98001 | 20 ℃～25 ℃，48 h | PR：0.5～2.0，粉红色菌落 | 验证对酵母样真菌的促生长能力和玫瑰红钠显色背景 |
| 生长率 | 黑曲霉 CMCC(F) 98003 | 20 ℃～25 ℃，3 d～5 d | 生长良好，白色菌丝，黑色孢子 | 验证对霉菌的促生长能力 |
| 无菌性 | 未接种培养基 | 同条件培养 | 无菌落生长 | 验证培养基无菌性 |
| 外观检查 | 灭菌后平板 | 室温观察 | 凝胶均匀，颜色正常，无异常沉淀或污染 | 验证配制质量 |
若白色念珠菌生长率低或菌落颜色异常，应检查玫瑰红钠稳定性、光照、pH、灭菌时间和平板保存状态。若黑曲霉生长差或不形成典型孢子，应检查培养时间、菌株活性、平板干湿程度和培养温度。
八、与SDA和玫瑰红氯霉素琼脂的区别
| 培养基 | 主要特点 | 适用场景 |
|---|---|---|
| 玫瑰红钠琼脂培养基 | 含玫瑰红钠，可限制部分霉菌扩展 | 药典真菌计数、分离和培养 |
| 沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA） | 高葡萄糖、偏酸性，选择性较弱 | 真菌培养、分离和计数 |
| 玫瑰红氯霉素琼脂 | 含玫瑰红和氯霉素，细菌抑制更强 | 食品、环境等样品真菌计数 |
| DRBC培养基 | 含氯硝胺、玫瑰红和氯霉素，限制扩散更强 | 易受扩散型霉菌干扰的样品 |
玫瑰红钠琼脂培养基适合需要限制霉菌蔓延并进行真菌计数的药典检验场景。若样品细菌背景较高，可能需要按方法选择含抗生素的培养基。
九、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 酵母菌落颜色浅 | 菌种差异、玫瑰红钠浓度或光照影响 | 结合形态和质控判断，不仅凭颜色判定 |
| 真菌生长率低 | pH异常、玫瑰红钠受强光影响、灭菌过度或平板过干 | 复核pH、避光保存并控制灭菌条件 |
| 霉菌仍严重蔓延 | 样品污染高、稀释不足或培养时间过长 | 选择合适稀释度并按规定时间计数 |
| 细菌背景多 | 培养基抑菌能力有限或样品细菌负荷高 | 选择含抗生素培养基或复核样品处理 |
| 平板颜色异常 | 光照、过度加热或玫瑰红钠降解 | 避光保存，避免反复融化 |
| 平板表面水多 | 倒板温度高或保存不当 | 倒置保存，使用前适当干燥 |
| 空白对照污染 | 灭菌不足或无菌操作问题 | 复核灭菌和操作环境 |
| 配方总量不一致 | 硫酸镁用量或pH信息录入错误 | 发布前核对药典原文、标签和质检单 |
十、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。干粉使用后应立即密封，防止吸潮结块，并于室温避光干燥处保存。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量时佩戴口罩和手套，避免吸入粉尘 |
| 干粉保存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 配制用水 | 使用蒸馏水或去离子水 |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 避光要求 | 含玫瑰红钠培养基应避光保存和培养 |
| 平板保存 | 倒置、密封、避光，并按验证期限使用 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物和平板需灭菌后处理 |
小结
玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌和酵母菌总数测定。胨和葡萄糖为真菌提供营养，磷酸二氢钾和硫酸镁维持适宜代谢环境，玫瑰红钠抑制部分细菌并限制某些霉菌蔓延，琼脂形成固体平板，便于菌落观察和计数。
使用该培养基时应注意三点：第一，玫瑰红钠具有光敏性，培养基制备、保存和培养过程应避光；第二，玫瑰红钠琼脂可限制部分霉菌扩展，但不是强选择性抗菌培养基，细菌背景高的样品可能需要其他含抗生素培养基；第三，原资料中硫酸镁用量和最终pH信息存在疑点，正式发布前应按中国药典2025年版、产品标签或质检单补充确认。
