紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基:耐胆盐革兰阴性菌分离培养的配方、原理及质控要点

2026-06-24 10:38:10
逗点生物
简介

紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基:耐胆盐革兰阴性菌分离培养的配方、原理及质控要点

一、产品概况

项目 内容
产品名称 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基
英文名称 Violet Red Bile Glucose Agar,VRBG Agar
货号 GF615
规格 250 g/瓶
产品类型 选择性分离固体培养基
适用标准 中国药典2025年版、中国药典2020年版、中国药典2015年版,以及USP、EP、JP等相关药典体系
用途 用于耐胆盐革兰阴性菌的分离培养
典型阳性表现 葡萄糖发酵菌形成紫红色菌落,可伴胆盐沉淀环
储存 室温、避光、干燥、密封保存
保质期 未开封产品通常为三年,具体以标签为准

二、配方组成、用量、作用及用途

成分 用量 主要作用 在培养基中的用途
酵母浸出粉 3.0 g/L 提供维生素、氨基酸和生长因子 支持目标菌恢复和生长
明胶胰酶水解物 7.0 g/L 提供肽类、氨基酸、氮源和部分碳源 促进耐胆盐革兰阴性菌形成菌落
脱氧胆酸钠 1.5 g/L 选择性抑制剂 抑制多数革兰氏阳性菌和胆盐不耐受菌
葡萄糖 10.0 g/L 可发酵糖类和能源 用于鉴别葡萄糖发酵反应
氯化钠 5.0 g/L 维持渗透压 提供适宜离子环境
中性红 0.03 g/L pH指示剂 葡萄糖发酵产酸时菌落呈红色至紫红色
结晶紫 0.002 g/L 选择性染料抑制剂 抑制多数革兰氏阳性菌,增强选择性
琼脂 15.0 g/L 凝固剂 形成固体平板,便于分离和观察菌落
最终pH 7.4±0.2(25 ℃) 维持适宜酸碱环境 保证选择性和指示剂反应稳定

三、检验原理

紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基的核心原理是利用胆盐和结晶紫抑制非目标菌,同时通过葡萄糖发酵产酸反应显示目标菌落。耐胆盐革兰阴性菌在培养基上生长后,若能发酵葡萄糖,会产生酸性代谢产物,使中性红指示剂显色,菌落呈红色至紫红色。酸性环境还可引起菌落周围胆盐沉淀,形成沉淀环。

作用环节 主要成分 原理
营养支持 酵母浸出粉、明胶胰酶水解物 为目标菌生长提供氮源、维生素和生长因子
选择性抑制 脱氧胆酸钠、结晶紫 抑制多数革兰氏阳性菌和胆盐不耐受菌
糖发酵鉴别 葡萄糖、中性红 葡萄糖发酵产酸后菌落呈红色至紫红色
沉淀环形成 胆盐、中性红酸性反应区 产酸区域可形成胆盐沉淀环
固体分离 琼脂 形成独立菌落,便于观察和挑取

原资料中“脱氧胆酸钠和结晶紫特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪肠球菌”的方向基本正确,但更完整的表述应为:二者共同抑制多数革兰氏阳性菌及部分胆盐不耐受菌。该培养基并不保证完全抑制所有非目标菌,因此可疑菌落仍需进一步确认。

四、使用方法

步骤 操作要点
1. 称量 称取本品41.5 g
2. 加水 加入蒸馏水或去离子水1 L
3. 溶解 搅拌加热煮沸至完全溶解
4. 冷却 冷却至适宜倒板温度
5. 倒板 无菌倾注平皿
6. 凝固 平板凝固后备用
7. 保存 倒置、避光、密封保存,并按验证期限使用

本品说明中明确“不可高压灭菌”。含胆盐、结晶紫、中性红和葡萄糖的培养基对过度加热较敏感,高压灭菌可能影响选择性、指示剂颜色、pH和葡萄糖反应效果。因此配制时应煮沸溶解即可,不应擅自改为121 ℃高压灭菌。

五、在药典检查中的应用要点

紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基通常用于耐胆盐革兰阴性菌检查流程中的分离培养阶段。样品经处理和选择性增菌后,转接至VRBG琼脂平板,观察疑似菌落并进一步确认。

应用环节 作用
样品处理 将供试品制成适宜供试液
选择性增菌 富集耐胆盐革兰阴性菌
VRBG分离培养 分离疑似耐胆盐革兰阴性菌菌落
菌落观察 根据颜色、沉淀环和生长状态筛选可疑菌落
后续确认 按药典或实验室方法进行确认

VRBG琼脂用于分离培养,不是液体增菌培养基,也不是最终鉴定培养基。若样品本身含防腐剂、表面活性剂或抑菌成分,应通过方法适用性试验证明样品处理和检测流程能够有效回收目标菌。

六、结果观察与判读

菌落表现 初步判断 说明
紫红色菌落,可伴胆盐沉淀环 疑似葡萄糖发酵型耐胆盐革兰阴性菌 大肠埃希氏菌常见此类表现
无色或浅色菌落 可能为不发酵或弱发酵葡萄糖的革兰阴性菌 铜绿假单胞菌可表现为无色菌落
无菌落生长 可能未检出目标菌,或培养基/样品处理异常 需结合质控和对照判断
革兰阳性菌明显生长 选择性不足 需复核培养基配制和保存
菌落融合或背景菌多 样品菌量高或选择性不足 应选择合适稀释或重新分离
空白对照有菌落 污染 检测结果无效

出现紫红色菌落和胆盐沉淀环可作为疑似阳性特征,但不能直接作为最终结论。对于无色菌落,若检测目标为耐胆盐革兰阴性菌,也应结合标准要求判断是否需要挑取确认。

七、质量控制

下列质控菌株接种待测培养基后,按规定条件培养,观察生长率、选择性和菌落特征。

质控项目 质控菌株及编号 培养条件 标准值 预期结果
生长率 铜绿假单胞菌 CMCC(B) 10104 30 ℃~35 ℃,24 h PR:0.5~2.0 无色菌落
生长率 大肠埃希氏菌 CMCC(B) 44102 30 ℃~35 ℃,24 h PR:0.5~2.0 紫红色菌落,可有胆盐沉淀环
选择性 金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26003 30 ℃~35 ℃,48 h 不生长 验证对革兰氏阳性菌的抑制能力
无菌性 未接种培养基 同条件培养 无菌落生长 验证培养基无菌性

若大肠埃希氏菌不呈紫红色或胆盐沉淀不明显,应检查pH、中性红、葡萄糖、加热条件和平板保存状态。若铜绿假单胞菌生长率偏低,应检查胆盐和结晶紫抑制是否过强。若金黄色葡萄球菌生长明显,提示选择性不足或配制过程异常。

八、与肠道菌增菌液体培养基的区别

项目 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 肠道菌增菌液体培养基
培养基形态 固体琼脂平板 液体增菌培养基
主要用途 分离培养疑似耐胆盐革兰阴性菌 选择性增菌耐胆盐革兰阴性菌
关键成分 胆盐、结晶紫、中性红、葡萄糖 牛胆盐、亮绿、葡萄糖、磷酸盐
结果观察 菌落颜色、沉淀环、生长情况 肉汤浑浊或澄清
是否用于最终确认 否,需进一步确认 否,需转接分离和确认

两者常在药典检查流程中配合使用:液体培养基用于富集目标菌,VRBG琼脂用于分离疑似菌落。实验室不应将二者的用途和判读方式混淆。

九、常见问题与原因分析

常见问题 可能原因 解决建议
目标菌生长率低 过度加热、高压灭菌、pH异常或选择剂过强 严格按说明煮沸溶解,不高压灭菌
大肠埃希氏菌颜色浅 pH偏高、中性红失效或葡萄糖反应不足 复核pH和培养基批次
胆盐沉淀环不明显 产酸量不足、培养时间不足或培养基状态异常 按规定培养并复核配制
金黄色葡萄球菌生长 结晶紫或胆盐选择性不足 检查配制、加热和保存条件
平板颜色异常 过度加热、光照或pH偏差 避光保存,避免反复加热
平板表面水多 倒板温度高或保存不当 倒置保存,使用前适当干燥
菌落融合 接种量过大或样品菌量高 调整接种量或选择合适稀释
空白对照污染 无菌操作或平皿污染 复核倒板环境和器具

十、使用与储存注意事项

本品为实验室微生物检验用培养基,不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘,建议佩戴口罩、手套和实验服,在通风良好环境下操作。干粉使用后应立即密封,防止吸潮结块,并于室温避光干燥处保存。

注意事项 要求
用途限制 不得用于临床检验
个人防护 称量时佩戴口罩和手套,避免吸入粉尘
干粉保存 室温、避光、干燥、密封保存
配制用水 使用蒸馏水或去离子水
加热要求 煮沸至完全溶解即可
灭菌提示 不可高压灭菌
平板保存 倒置、避光、密封,并按验证期限使用
结果确认 可疑菌落需进一步确认
废弃物处理 接种后培养物和平板需灭菌后处理

小结

紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基是一种用于耐胆盐革兰阴性菌分离培养的选择性鉴别培养基。酵母浸出粉和明胶胰酶水解物提供营养,脱氧胆酸钠和结晶紫抑制多数革兰氏阳性菌,葡萄糖和中性红用于显示糖发酵产酸反应,琼脂形成固体平板。大肠埃希氏菌等葡萄糖发酵菌通常形成紫红色菌落,可伴胆盐沉淀环;铜绿假单胞菌等非发酵菌可形成无色菌落。

使用该培养基时应注意三点:第一,本品不可高压灭菌,应按说明煮沸溶解后使用;第二,VRBG琼脂用于分离培养,不是增菌液体培养基,也不是最终确认培养基;第三,药典相关检查应按2025年版《中国药典》或企业确认的适用标准执行,并通过铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌等质控菌株验证促生长、鉴别性和选择性。