木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基(XLD):沙门菌选择性分离的配方、原理及质控要点

2026-06-24 11:25:57
逗点生物
简介

木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基(XLD):沙门菌选择性分离的配方、原理及质控要点

一、产品概况

项目 内容
产品名称 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基
常用简称 XLD琼脂培养基
英文名称 Xylose Lysine Deoxycholate Agar
货号 GF619
规格 250 g/瓶
产品类型 选择性、鉴别性固体培养基
适用标准 中国药典2025年版、中国药典2020年版、中国药典2015年版,以及USP、EP、JP等相关药典体系
用途 用于沙门菌的选择性分离培养
典型反应 沙门菌多呈红色或粉红色菌落,中心可有黑色沉淀
储存 室温、避光、干燥、密封保存
保质期 未开封产品通常为三年,具体以标签为准

二、配方组成、用量、作用及用途

成分 用量 主要作用 在培养基中的用途
酵母浸出粉 3.0 g/L 提供氨基酸、维生素和生长因子 支持肠道菌和沙门菌生长
L-赖氨酸 5.0 g/L 脱羧反应底物 沙门菌可脱羧赖氨酸,使酸化区域重新回碱
木糖 3.5 g/L 可发酵糖类 多数肠道菌可利用木糖产酸,使培养基变黄
乳糖 7.5 g/L 可发酵糖类 乳糖发酵菌持续产酸,多呈黄色菌落或黄色区域
蔗糖 7.5 g/L 可发酵糖类 蔗糖发酵菌持续产酸,用于区分部分非目标菌
脱氧胆酸钠 2.5 g/L 选择性抑制剂 抑制多数革兰氏阳性菌和部分非目标菌
氯化钠 5.0 g/L 维持渗透压 提供适宜离子环境
硫代硫酸钠 6.8 g/L 硫化氢反应底物 供H₂S阳性菌还原产生硫化氢
枸橼酸铁铵 0.8 g/L 铁盐指示剂 与硫化氢反应生成黑色硫化铁
酚红 0.08 g/L pH指示剂 酸性变黄,碱性或回碱呈红色
琼脂 13.5 g/L 凝固剂 形成固体平板,便于分离和观察菌落
最终pH 7.4±0.2(25 ℃) 维持适宜酸碱环境 保证选择性、糖发酵反应和H₂S反应稳定

三、检验原理

XLD琼脂的核心是“选择性抑制 + 糖发酵鉴别 + 赖氨酸脱羧 + 硫化氢反应”。多数肠道菌最初可发酵木糖,使局部酸化并使酚红变黄;但沙门菌通常能脱羧赖氨酸,产生碱性胺类物质,使培养基由黄色重新转为红色或粉红色。若菌株还能产生硫化氢,则硫化氢与铁盐反应形成黑色硫化铁,使菌落中心出现黑色沉淀。

反应机制 相关成分 结果表现
选择性抑制 脱氧胆酸钠 抑制多数革兰氏阳性菌及部分背景菌
糖发酵产酸 木糖、乳糖、蔗糖、酚红 产酸后培养基或菌落周围变黄
赖氨酸脱羧回碱 L-赖氨酸、酚红 沙门菌可由黄转红或粉红
H₂S生成 硫代硫酸钠、枸橼酸铁铵 生成黑色硫化铁,菌落中心发黑
固体分离 琼脂 形成独立菌落,便于挑取确认

原资料中“木塘”应修正为“木糖”。此外,沙门菌在XLD上的典型表现通常不是“无色菌落有黑心”,更常见的规范表述是“红色或粉红色菌落,中心可有黑色沉淀”。如果H₂S生成较强,黑色沉淀可能覆盖菌落中心甚至使菌落整体显黑,应结合周围培养基颜色和后续确认判断。

四、使用方法

步骤 操作要点
1. 称量 称取本品55.2 g
2. 加水 加入蒸馏水或去离子水1 L
3. 溶解 搅拌加热至完全溶解
4. 注意事项 切勿高压灭菌
5. 冷却 冷却至适宜倒板温度
6. 倒板 无菌倾注平皿
7. 凝固 平板凝固后倒置备用
8. 保存 避光、密封、倒置保存,并按验证期限使用

XLD琼脂含多种糖类、酚红、脱氧胆酸盐和硫化氢指示系统,对过度加热较敏感。高压灭菌可能导致糖类降解、pH变化、颜色异常或选择性改变,因此产品说明中“切勿高压灭菌”应作为重点保留。制备时应加热至完全溶解即可,避免长时间煮沸或反复融化。

五、在沙门菌检查中的应用要点

XLD琼脂通常用于沙门菌检查流程中的分离培养阶段。样品经过预增菌和选择性增菌后,转接至XLD平板,通过菌落颜色、黑心和周围培养基颜色筛选疑似沙门菌。

应用环节 作用
样品处理 将供试品制成适宜供试液
预增菌 促进受损沙门菌恢复
选择性增菌 抑制背景菌并富集沙门菌
XLD分离培养 分离疑似沙门菌菌落
后续确认 对可疑菌落进行生化、血清学或其他确认

XLD琼脂是筛选培养基,不是最终确认培养基。对外发布或实验报告中,应避免使用“XLD阳性即为沙门菌”的表述。

六、结果观察与判读

菌落表现 初步判断 说明
红色或粉红色菌落,中心黑色 疑似沙门菌 典型H₂S阳性沙门菌表现
红色或粉红色菌落,无黑心 可能为H₂S阴性沙门菌或其他非发酵菌 需进一步确认
黄色菌落或黄色区域 多为糖发酵型肠道菌 常见于乳糖或蔗糖发酵菌
黑色沉淀很重,菌落整体发黑 强H₂S生成菌 需结合菌落边缘和后续确认
无菌落生长 可能未检出目标菌,或培养基选择性过强 需结合质控判断
革兰阳性菌明显生长 选择性不足或接种量过高 需复核培养基和接种条件

乙型副伤寒沙门氏菌等沙门菌质控株在XLD上可形成红色或粉红色菌落,并可出现黑心。菌落颜色会受菌株、培养时间、接种量和培养基状态影响,因此判读时应结合质控结果和后续确认试验。

七、质量控制

下列质控菌株接种待测培养基后,按规定条件培养,观察生长率、选择性和特征性反应。

质控项目 质控菌株及编号 培养条件 标准值 预期结果
生长率 乙型副伤寒沙门氏菌 CMCC(B) 50094 30 ℃~35 ℃,18 h~24 h PR:0.5~2.0 红色或粉红色菌落,中心可有黑色沉淀
选择性 金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26003 30 ℃~35 ℃,24 h G≤1 不生长或极弱生长
无菌性 未接种培养基 同条件培养 无菌落生长 验证培养基无菌性
外观检查 配制后平板 室温观察 凝胶均匀、颜色正常、无污染 验证配制质量

若沙门菌质控株生长率低,应检查pH、加热条件、脱氧胆酸钠浓度、平板干湿程度和菌株活性。若沙门菌不出现黑心,应检查硫代硫酸钠、枸橼酸铁铵、培养时间和菌株H₂S表型。若金黄色葡萄球菌明显生长,提示选择性不足或接种量不符合要求。

八、与其他沙门菌分离培养基的区别

培养基 类型 主要特点 用途
XLD琼脂 选择性鉴别平板 结合糖发酵、赖氨酸脱羧和H₂S反应 沙门菌选择性分离
HE琼脂 选择性鉴别平板 可观察糖发酵和H₂S反应 肠道菌和沙门菌筛选
SS琼脂 选择性分离平板 选择性较强,可观察H₂S 沙门菌、志贺菌筛选
亚硫酸铋琼脂 高选择性平板 对某些沙门菌尤其适用,菌落可呈黑色 沙门菌选择性分离
RV增菌液 选择性液体增菌培养基 低pH、高镁盐、孔雀绿 沙门菌选择性增菌

XLD琼脂属于分离培养基,通常与预增菌、选择性增菌培养基配合使用。液体增菌用于提高目标菌数量,XLD平板用于分离并观察疑似菌落。

九、常见问题与原因分析

常见问题 可能原因 解决建议
沙门菌不生长或生长弱 加热过度、pH异常、平板过干或选择性过强 严格避免高压灭菌,复核pH和配制流程
典型沙门菌无黑心 H₂S反应弱、培养时间不足、铁盐或硫代硫酸盐异常 延长至规定时间并复核配方与质控
背景菌黄色多 样品中糖发酵菌较多或选择性不足 结合增菌流程,挑取典型菌落确认
平板颜色偏黄 pH偏低、糖类降解或过度加热 控制加热时间,复核pH
平板颜色偏红过深 pH偏高或配制误差 复核称量、pH和用水
金黄色葡萄球菌生长明显 选择性不足或接种量过大 复核脱氧胆酸钠、接种量和质控方法
平板表面水多 倒板温度高或保存不当 倒置保存,使用前适当干燥
干粉结块 吸潮 不建议继续用于正式检验

十、使用与储存注意事项

本品为实验室微生物检验用培养基,不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘,建议佩戴口罩、手套和实验服,在通风良好环境下操作。干粉使用后应立即密封,防止吸潮结块,并于室温避光干燥处保存。

注意事项 要求
用途限制 不得用于临床检验
个人防护 称量时佩戴口罩和手套,避免吸入粉尘
干粉保存 室温、避光、干燥、密封保存
配制用水 使用蒸馏水或去离子水
加热要求 加热至完全溶解即可,避免长时间煮沸
灭菌提示 切勿高压灭菌
平板保存 倒置、避光、密封,并按验证期限使用
结果确认 可疑菌落需进一步确认
废弃物处理 接种后培养物和平板需灭菌后处理

小结

木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基是一种用于沙门菌选择性分离的固体培养基。酵母浸出粉提供营养,脱氧胆酸钠提供选择性,木糖、乳糖、蔗糖与酚红共同显示糖发酵反应,L-赖氨酸用于观察沙门菌回碱特征,硫代硫酸钠和枸橼酸铁铵用于检测硫化氢生成。典型沙门菌在XLD上多呈红色或粉红色菌落,中心可有黑色沉淀。

使用该培养基时应注意三点:第一,XLD琼脂为分离培养基,不是增菌培养基;第二,配制时切勿高压灭菌,应加热溶解后使用;第三,XLD上的典型菌落只能作为疑似沙门菌筛选结果,最终仍需按2025年版《中国药典》或企业确认的适用标准进行后续鉴定。