甘露醇氯化钠琼脂培养基：金黄色葡萄球菌选择性分离的配方、原理及质控要点
- 2026-06-24 11:26:20
- 逗点生物
甘露醇氯化钠琼脂培养基：金黄色葡萄球菌选择性分离的配方、原理及质控要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 甘露醇氯化钠琼脂培养基 |
| 常用名称 | 甘露醇盐琼脂培养基、MSA |
| 英文名称 | Mannitol Salt Agar |
| 货号 | GF622 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 选择性、鉴别性固体培养基 |
| 适用标准 | 中国药典2025年版、中国药典2020年版、中国药典2015年版，以及USP、EP、JP等相关药典体系 |
| 用途 | 用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养 |
| 典型反应 | 金黄色葡萄球菌通常形成黄色菌落，周围培养基可变黄并形成黄色晕圈 |
| 储存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 胰酪胨 | 5.0 g/L | 提供肽类、氨基酸和氮源 | 支持葡萄球菌生长 |
| 动物组织胃蛋白酶水解物 | 5.0 g/L | 提供氮源、碳源和生长因子 | 增强培养基营养支持能力 |
| 牛肉浸出粉 | 1.0 g/L | 提供维生素、矿物质和生长因子 | 促进菌落形成 |
| D-甘露醇 | 10.0 g/L | 可发酵糖类 | 用于判断菌株是否发酵甘露醇产酸 |
| 氯化钠 | 75.0 g/L | 高盐选择性成分 | 抑制多数非耐盐微生物，筛选耐盐葡萄球菌 |
| 酚红 | 0.025 g/L | pH指示剂 | 酸性变黄，中性至碱性呈红色或粉红色 |
| 琼脂 | 15.0 g/L | 凝固剂 | 形成固体平板，便于菌落分离和观察 |
| 最终pH | 7.4±0.2（25 ℃） | 维持适宜初始酸碱环境 | 保证菌株生长和指示剂反应稳定 |
三、检验原理
甘露醇氯化钠琼脂培养基的核心原理是“高盐选择 + 甘露醇发酵鉴别”。氯化钠形成高渗环境，抑制多数非葡萄球菌微生物；能耐受高盐环境的葡萄球菌可在培养基上生长。若菌株能发酵D-甘露醇，则产生酸性代谢产物，使酚红指示剂由红色转为黄色，菌落及周围培养基出现黄色反应。
| 反应机制 | 相关成分 | 结果表现 | 解释 |
|---|---|---|---|
| 高盐选择 | 氯化钠 | 非耐盐菌受抑制 | 筛选耐盐葡萄球菌 |
| 营养支持 | 胰酪胨、动物组织胃蛋白酶水解物、牛肉浸出粉 | 目标菌形成可见菌落 | 支持葡萄球菌生长 |
| 甘露醇发酵 | D-甘露醇 | 产酸 | 金黄色葡萄球菌常见阳性反应 |
| pH指示 | 酚红 | 酸性变黄，非酸性保持红色或粉红色 | 显示甘露醇发酵结果 |
| 固体分离 | 琼脂 | 形成单个菌落 | 便于挑取和后续确认 |
典型金黄色葡萄球菌通常能在高盐环境下生长，并发酵甘露醇产酸，使菌落及周围培养基呈黄色。但部分非金黄色葡萄球菌也可能发酵甘露醇，部分金黄色葡萄球菌反应也可能受培养条件、菌株状态或培养时间影响。因此，甘露醇盐琼脂应作为初筛培养基使用。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品111.0 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 搅拌加热至完全溶解 |
| 4. 分装 | 按需要分装于三角瓶或适宜容器 |
| 5. 灭菌 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 6. 冷却 | 冷却至适宜倒板温度 |
| 7. 倒板 | 无菌倾注平皿 |
| 8. 保存 | 平板凝固后倒置、避光、密封保存，并按验证期限使用 |
配制时应确保琼脂和高盐成分充分溶解。由于培养基氯化钠含量高，若溶解不充分可能影响平板均一性和选择性。灭菌后不宜长时间高温保温，也不建议反复融化，以免影响pH、凝胶状态和指示剂颜色。
五、适用场景与分离要点
甘露醇氯化钠琼脂培养基常用于金黄色葡萄球菌的选择性分离和初步筛选。样品或增菌液接种后，通过观察菌落生长和培养基颜色变化筛选疑似菌落，再进行后续确认。
| 应用场景 | 主要目的 |
|---|---|
| 金黄色葡萄球菌检查 | 分离疑似金黄色葡萄球菌 |
| 药典微生物检查 | 配合规定方法进行指定菌检查 |
| 样品筛查 | 从混合菌群中筛选耐盐、甘露醇发酵菌 |
| 菌株质控 | 验证金黄色葡萄球菌生长和甘露醇发酵反应 |
| 纯化培养 | 挑取疑似菌落进行后续确认 |
该培养基对非耐盐菌有较强抑制作用，但不是完全特异性培养基。若样品中存在耐盐细菌或部分其他葡萄球菌，也可能生长。因此，分离出的黄色菌落应进一步进行凝固酶、耐热核酸酶、乳胶凝集、生化鉴定或其他确认试验。
六、结果观察与判读
| 菌落或培养基表现 | 初步判断 | 说明 |
|---|---|---|
| 黄色菌落，周围培养基变黄 | 疑似甘露醇发酵阳性葡萄球菌 | 金黄色葡萄球菌常见表现 |
| 菌落生长但培养基保持红色或粉红色 | 疑似甘露醇不发酵葡萄球菌 | 常见于部分凝固酶阴性葡萄球菌 |
| 无菌落生长 | 可能被高盐抑制 | 非耐盐菌或菌量低时常见 |
| 菌落很小、颜色不明显 | 生长受抑或培养时间不足 | 应按规定时间判读 |
| 大量背景菌生长 | 选择性不足或接种量过大 | 需复核培养基和接种条件 |
| 空白平板有菌落 | 培养基或操作污染 | 检测结果无效 |
甘露醇盐琼脂的黄色反应主要说明菌株能在高盐条件下生长并发酵甘露醇，不等于已经确认金黄色葡萄球菌。正式检验中应挑取疑似菌落进行后续确认。
七、质量控制
下列质控菌株接种待测培养基后，按规定条件培养，观察生长率、选择性和特征性反应。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 培养条件 | 标准值 | 预期结果 |
|---|---|---|---|---|
| 生长率 | 金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26003 | 30 ℃～35 ℃，18 h～24 h | PR：0.5～2.0 | 黄色菌落，可有黄色晕圈 |
| 选择性 | 大肠埃希氏菌 CMCC(B) 44102 | 30 ℃～35 ℃，72 h | 不生长 | 验证高盐选择性 |
| 无菌性 | 未接种培养基 | 同条件培养 | 无菌落生长 | 验证培养基无菌性 |
| 外观检查 | 灭菌后平板 | 室温观察 | 凝胶均匀，颜色正常，无污染 | 验证配制质量 |
若金黄色葡萄球菌生长率偏低，应检查pH、高盐浓度、灭菌条件、平板干湿程度和菌株活性。若金黄色葡萄球菌生长但不变黄，应检查D-甘露醇、酚红、培养时间和菌株状态。若大肠埃希氏菌明显生长，提示选择性不足、配方偏差或质控接种量异常。
八、与其他金黄色葡萄球菌分离培养基的区别
| 培养基 | 主要特点 | 适用用途 |
|---|---|---|
| 甘露醇氯化钠琼脂 | 高盐选择，甘露醇发酵显黄色 | 金黄色葡萄球菌选择性分离和初筛 |
| Baird-Parker琼脂 | 卵黄亚碲酸盐体系，典型黑色菌落伴透明圈 | 金黄色葡萄球菌分离和计数 |
| 金黄色葡萄球菌显色培养基 | 显色底物反应，结果更直观 | 快速筛选疑似金黄色葡萄球菌 |
| 胰酪大豆胨琼脂 | 非选择性培养基 | 菌株复苏、纯培养和一般质控 |
甘露醇氯化钠琼脂操作简单、选择性明确，适合初筛；Baird-Parker琼脂和显色培养基在某些场景下鉴别特征更强。具体选择应根据标准方法、样品类型和实验室验证结果确定。
九、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 金黄色葡萄球菌不生长或生长弱 | pH异常、高盐抑制过强、平板过干或菌株状态差 | 复核pH、称量、灭菌条件和菌株活性 |
| 菌落生长但不变黄 | 甘露醇发酵弱、培养时间不足、酚红异常或菌株差异 | 按规定培养并结合后续确认 |
| 黄色晕圈不明显 | 产酸量不足、接种量低或培养时间不足 | 延长至规定时间后判读 |
| 大肠埃希氏菌生长 | 选择性不足、氯化钠称量错误或接种量异常 | 复核氯化钠浓度和质控方法 |
| 平板颜色偏黄 | pH偏低、灭菌过度或配制错误 | 复核pH和制备流程 |
| 平板颜色偏红或偏粉 | pH偏高或指示剂状态异常 | 复核pH和指示剂 |
| 平板表面析水 | 倒板温度高、冷却过慢或保存不当 | 倒置保存，使用前适度干燥 |
| 干粉结块 | 吸潮 | 不建议继续用于正式检验 |
十、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。由于本品含较高浓度氯化钠，称量和溶解时应充分混匀，避免局部浓度不均影响选择性。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量时佩戴口罩和手套，避免吸入粉尘 |
| 干粉保存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 配制用水 | 使用蒸馏水或去离子水 |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 平板保存 | 倒置、避光、密封，并按验证期限使用 |
| 结果确认 | 黄色疑似菌落需进一步确认 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物和平板需灭菌后处理 |
小结
甘露醇氯化钠琼脂培养基是一种用于金黄色葡萄球菌选择性分离和初步鉴别的固体培养基。胰酪胨、动物组织胃蛋白酶水解物和牛肉浸出粉提供营养；75.0 g/L氯化钠形成高盐选择环境；D-甘露醇和酚红用于显示甘露醇发酵产酸反应；琼脂形成固体平板。金黄色葡萄球菌通常形成黄色菌落，并可使周围培养基出现黄色晕圈。
使用该培养基时应注意三点：第一，高盐选择性有助于抑制多数非葡萄球菌，但不能保证绝对特异；第二，黄色菌落和黄色晕圈只是疑似提示，不能替代确认试验；第三，药典相关检验应按2025年版《中国药典》或企业确认的适用标准执行，并通过金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌等质控菌株验证促生长和选择性。
