营养琼脂培养基（NA）：一般细菌培养的配方、原理及质控要点
- 2026-06-24 11:26:48
- 逗点生物
营养琼脂培养基（NA）：一般细菌培养的配方、原理及质控要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 营养琼脂培养基 |
| 常用简称 | NA |
| 英文名称 | Nutrient Agar |
| 货号 | GF631 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 非选择性通用固体培养基 |
| 适用标准 | 中国药典2025年版、中国药典2020年版、中国药典2015年版，以及USP、EP、JP等相关药典体系 |
| 用途 | 用于一般细菌培养 |
| 典型用途 | 细菌复苏、纯培养、菌落观察、促生长性能检查 |
| 储存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 胨 | 10.0 g/L | 提供肽类、氨基酸、氮源和部分碳源 | 支持一般细菌生长 |
| 牛肉浸出粉 | 3.0 g/L | 提供维生素、矿物质、生长因子和含氮营养 | 增强培养基促生长能力 |
| 氯化钠 | 5.0 g/L | 维持渗透压 | 提供适宜离子环境 |
| 琼脂 | 14.0 g/L | 凝固剂 | 形成固体平板或斜面，便于菌落形成和观察 |
| 最终pH | 7.2±0.2（25 ℃） | 维持近中性培养环境 | 适合多数常见细菌生长 |
三、检验原理
营养琼脂培养基的核心作用是“提供基础营养并形成固体生长表面”。胨和牛肉浸出粉提供细菌所需氮源、氨基酸、肽类、维生素和矿物质；氯化钠维持适宜渗透压；琼脂形成稳定凝胶，使细菌在表面形成可见菌落，便于分离、纯化和观察。
| 作用环节 | 主要成分 | 原理 |
|---|---|---|
| 氮源供应 | 胨、牛肉浸出粉 | 提供氨基酸、肽类和含氮营养 |
| 生长因子供应 | 牛肉浸出粉 | 提供维生素、矿物质和其他生长促进物质 |
| 渗透压维持 | 氯化钠 | 维持细胞内外渗透压平衡 |
| 固体培养 | 琼脂 | 形成平板或斜面，便于菌落观察和纯化 |
| 近中性环境 | pH 7.2±0.2 | 适合多数常见细菌生长 |
由于NA不含选择性抑制剂，混合样品中的多种细菌都可能生长。因此，它更适合用于菌株复苏、纯培养、总菌生长观察和培养基促生长能力验证，不适合作为特定病原菌的确认培养基。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品32.0 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 搅拌加热煮沸至完全溶解 |
| 4. 分装 | 根据需要分装于三角瓶、试管或其他适宜容器 |
| 5. 灭菌 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 6. 冷却 | 冷却至适宜倒板温度 |
| 7. 倒板或制斜面 | 可制成平板、斜面或其他固体培养形式 |
| 8. 保存 | 凝固后倒置、避光、密封保存，并按验证期限使用 |
配制时应确保琼脂完全溶解，否则会导致凝胶不均、表面粗糙或菌落分布异常。灭菌后不宜长时间高温保温，也不建议反复融化，以免影响凝胶强度、pH和促生长性能。
五、适用场景
营养琼脂培养基用途广泛，是实验室常用的基础固体培养基。它可用于一般细菌培养、菌株复苏后的纯化、菌落形态观察、平板划线分离和培养基性能测试。
| 应用场景 | 主要目的 |
|---|---|
| 一般细菌培养 | 支持常见非苛养细菌形成菌落 |
| 菌株纯化 | 通过划线获得单个菌落 |
| 菌落形态观察 | 观察菌落大小、边缘、透明度和色素 |
| 质控菌培养 | 验证培养基促生长能力 |
| 工作菌株制备 | 获得新鲜纯培养物 |
| 教学和基础实验 | 用于常规细菌培养操作训练 |
若检测目标为沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌等特定菌种，NA可作为非选择性培养或复苏用培养基，但最终确认仍需结合选择性培养基、生化试验或标准方法。
六、结果观察与判读
| 菌落表现 | 初步说明 | 注意事项 |
|---|---|---|
| 菌落生长良好 | 培养基促生长性能正常 | 应结合质控菌株判断 |
| 菌落稀少或小 | 可能接种量低、菌株状态差或培养基性能下降 | 需复核菌株和培养条件 |
| 菌落融合 | 接种量过大或划线不充分 | 应调整稀释度或划线方法 |
| 菌落色素明显 | 可能为菌株自身色素表现 | 不能仅凭色素确认菌种 |
| 空白平板有菌落 | 培养基或操作污染 | 检测结果无效 |
| 平板表面水多 | 倒板或保存条件不当 | 可能影响菌落分散和计数 |
NA上的菌落形态只能作为观察和纯化依据。金黄色葡萄球菌可出现黄色色素，铜绿假单胞菌可出现绿色色素，但这些表现受菌株、培养时间、温度和培养基状态影响，不能单独作为鉴定结论。
七、质量控制
下列质控菌株接种待测培养基后，于30 ℃～35 ℃培养24 h，观察生长率和菌落特征。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 培养条件 | 标准值 | 预期结果 |
|---|---|---|---|---|
| 生长率 | 金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26003 | 30 ℃～35 ℃，24 h | PR≥0.7 | 生长良好，可有黄色色素 |
| 生长率 | 大肠埃希氏菌 CMCC(B) 44102 | 30 ℃～35 ℃，24 h | PR≥0.7 | 生长良好，无色至灰白色较大菌落 |
| 生长率 | 铜绿假单胞菌 CMCC(B) 10104 | 30 ℃～35 ℃，24 h | PR≥0.7 | 生长良好，可有绿色色素 |
| 生长率 | 枯草芽胞杆菌 CMCC(B) 63501 | 30 ℃～35 ℃，24 h | PR≥0.7 | 生长良好，白色不规则菌落 |
| 生长率 | 乙型副伤寒沙门氏菌 CMCC(B) 50094 | 30 ℃～35 ℃，24 h | PR≥0.7 | 生长良好，无色至灰白色较大菌落 |
| 无菌性 | 未接种培养基 | 同条件培养 | 无菌落生长 | 验证培养基无菌性 |
原资料中“乙型副伤寒沙门菌”建议规范为“乙型副伤寒沙门氏菌”；“枯草芽孢杆菌”在药典和部分标准体系中也常写作“枯草芽胞杆菌”，发布时可与产品质控文件保持一致。
八、与营养肉汤培养基的区别
| 项目 | 营养琼脂培养基（NA） | 营养肉汤培养基（NB） |
|---|---|---|
| 培养基形态 | 固体平板或斜面 | 液体肉汤 |
| 是否含琼脂 | 含琼脂 | 不含琼脂 |
| 主要用途 | 一般细菌培养、纯化、菌落观察 | 一般细菌增菌、活化、菌液制备 |
| 结果观察 | 菌落数量、大小、形态、色素 | 肉汤浑浊、沉淀、菌膜 |
| 是否便于获得单菌落 | 便于 | 不便于 |
| 是否适合增菌 | 可培养但不如肉汤适合增菌 | 适合液体增菌 |
营养琼脂和营养肉汤配方基础相近，但用途不同。NA适合形成菌落，NB适合液体增菌。实际工作中常先用NB复苏或增菌，再转接NA平板分离纯化。
九、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 质控菌生长弱 | 菌株活性差、接种量不足、pH异常或灭菌过度 | 复核菌株、接种量、pH和灭菌条件 |
| 平板不凝或偏软 | 琼脂未称准、未充分溶解或反复加热 | 复核称量和溶解过程 |
| 平板表面粗糙 | 琼脂未完全溶解或冷却过程异常 | 加热煮沸至完全溶解后倒板 |
| 空白平板污染 | 灭菌不足或倒板污染 | 复核灭菌、平皿和操作环境 |
| 菌落融合 | 接种量过大或划线不充分 | 调整接种量或稀释度 |
| 色素不明显 | 培养时间不足、温度不合适或菌株差异 | 按规定条件培养并结合质控判断 |
| 平板表面水多 | 倒板温度高、冷凝水多或保存不当 | 倒置保存，使用前适度干燥 |
| 干粉结块 | 吸潮 | 不建议继续用于正式检验 |
十、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。干粉使用后应立即密封，防止吸潮结块，并于室温避光干燥处保存。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量时佩戴口罩和手套，避免吸入粉尘 |
| 干粉保存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 配制用水 | 使用蒸馏水或去离子水 |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 平板保存 | 倒置、避光、密封，并按验证期限使用 |
| 结果观察 | 观察菌落数量、大小、形态和色素 |
| 结果确认 | 如需鉴定，应结合后续试验 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物和平板需灭菌后处理 |
小结
营养琼脂培养基（NA）是一种经典的非选择性通用固体培养基，主要用于一般细菌培养、菌株纯化和菌落观察。胨提供氮源、肽类和氨基酸，牛肉浸出粉提供维生素、矿物质和生长因子，氯化钠维持渗透压，琼脂形成固体培养表面，最终pH为7.2±0.2，适合多数常见细菌生长。
使用该培养基时应注意三点：第一，它是固体培养基，可用于观察菌落，但不具备选择性和鉴别性；第二，菌落颜色或形态只能作为初步观察，不能单独作为菌种确认依据；第三，药典相关检验应按2025年版《中国药典》或企业确认的适用标准执行，并通过金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌和乙型副伤寒沙门氏菌等质控菌株验证促生长能力。
