曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）：大肠埃希氏菌初筛分离的配方、原理及质控要点
- 2026-06-24 11:26:48
- 逗点生物
曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）：大肠埃希氏菌初筛分离的配方、原理及质控要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 曙红亚甲蓝琼脂培养基 |
| 常用简称 | EMB |
| 英文名称 | Eosin-Methylene Blue Agar |
| 货号 | GF645 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 弱选择性、鉴别性固体培养基 |
| 配方来源 | 《中国药典》2010年版相关配方体系 |
| 适用标准 | 中国药典2025年版、中国药典2020年版、中国药典2015年版，以及USP、EP、JP等相关药典体系 |
| 用途 | 用于革兰阴性肠道菌的弱选择性分离与乳糖发酵鉴别，尤其用于大肠埃希氏菌初步筛选 |
| 典型反应 | 大肠埃希氏菌呈紫黑色菌落，可有金属光泽 |
| 储存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 胨 | 10.0 g/L | 提供肽类、氨基酸、氮源和部分碳源 | 支持肠道菌生长 |
| 牛肉浸出粉 | 3.0 g/L | 提供维生素、矿物质和生长因子 | 增强培养基促生长能力 |
| 氯化钠 | 5.0 g/L | 维持渗透压 | 提供适宜离子环境 |
| 乳糖 | 10.0 g/L | 可发酵糖类 | 用于区分乳糖发酵菌和非乳糖发酵菌 |
| 曙红钠 | 0.4 g/L | 酸性染料、指示成分和弱抑菌剂 | 与亚甲蓝共同参与显色，并抑制部分革兰氏阳性菌 |
| 亚甲蓝 | 0.065 g/L | 碱性染料、指示成分和弱抑菌剂 | 与曙红钠共同显示乳糖发酵反应，并增强选择性 |
| 琼脂 | 14.0 g/L | 凝固剂 | 形成固体平板，便于菌落分离和观察 |
| 最终pH | 7.2±0.2（25 ℃） | 维持适宜酸碱环境 | 保证菌株生长、染料显色和选择性稳定 |
EMB琼脂的核心原理是“弱选择性抑制 + 乳糖发酵显色”。曙红钠和亚甲蓝对多数革兰氏阳性菌有一定抑制作用，使革兰阴性肠道菌更容易被分离；乳糖发酵菌产酸后，局部pH下降，曙红钠和亚甲蓝与菌落及酸性代谢产物发生相互作用，使菌落呈紫色、蓝黑色或紫黑色。强产酸菌株可使染料沉积明显，形成绿色或金属样光泽。
| 反应机制 | 相关成分 | 典型表现 | 解释 |
|---|---|---|---|
| 营养支持 | 胨、牛肉浸出粉 | 菌落生长良好 | 为细菌提供基础营养 |
| 弱选择性抑制 | 曙红钠、亚甲蓝 | 多数革兰氏阳性菌受抑制 | 降低背景菌干扰 |
| 乳糖发酵 | 乳糖 | 产酸 | 鉴别乳糖发酵能力 |
| 染料显色 | 曙红钠、亚甲蓝 | 菌落呈紫色、蓝黑色或紫黑色 | 显示酸性代谢产物 |
| 强产酸反应 | 乳糖、染料系统 | 可出现金属光泽 | 常见于大肠埃希氏菌 |
| 固体分离 | 琼脂 | 形成单个菌落 | 便于挑取和后续确认 |
原资料中关于染料带电结合的解释较复杂，发布时建议简化为：曙红钠和亚甲蓝既具有弱选择性抑菌作用，又可作为乳糖发酵的显色系统；乳糖发酵产酸越强，染料沉积越明显，菌落颜色越深，强产酸菌株可出现金属光泽。
四、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品42.5 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 搅拌加热至完全溶解 |
| 4. 分装 | 按需要分装于三角瓶或其他适宜容器 |
| 5. 灭菌 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 6. 冷却 | 冷却至适宜倒板温度 |
| 7. 倒板 | 无菌倾注平皿 |
| 8. 保存 | 平板凝固后倒置、避光、密封保存，并按验证期限使用 |
EMB含有曙红钠和亚甲蓝，配制和保存时应避免长时间强光照射。灭菌后不宜长时间高温保温，也不建议反复融化，以免影响pH、凝胶状态和染料显色效果。
五、适用场景与分离要点
EMB琼脂常用于大肠埃希氏菌及其他革兰阴性肠道菌的初步筛选和分离培养。样品或增菌液接种后，通过观察菌落颜色和金属光泽筛选疑似菌落，再进行后续确认。
| 应用场景 | 主要目的 |
|---|---|
| 大肠埃希氏菌初筛 | 观察紫黑色菌落和金属光泽 |
| 肠道菌分离 | 抑制部分革兰氏阳性菌，分离革兰阴性肠道菌 |
| 乳糖发酵鉴别 | 区分乳糖发酵菌与非乳糖发酵菌 |
| 药典微生物检查 | 配合指定菌检查流程进行分离筛选 |
| 质控菌验证 | 验证促生长、鉴别性和选择性 |
需要强调的是，EMB为弱选择性培养基，对革兰氏阳性菌的抑制能力不如某些强选择性培养基。若样品背景菌复杂，应结合药典流程、选择性增菌或其他分离培养基共同判断。
六、结果观察与判读
| 菌落表现 | 初步判断 | 说明 |
|---|---|---|
| 紫黑色菌落，有金属光泽 | 疑似大肠埃希氏菌 | 强乳糖发酵产酸的典型表现 |
| 紫色或深色菌落，无明显金属光泽 | 可能为乳糖发酵菌 | 需进一步确认 |
| 无色或半透明菌落 | 疑似非乳糖发酵菌 | 沙门氏菌等可呈此类表现 |
| 生长弱或菌落很小 | 可能受染料抑制或菌株状态差 | 需结合质控和培养条件判断 |
| 金黄色葡萄球菌明显生长 | 选择性不足或接种量过大 | 需复核配制和质控方法 |
| 空白平板有菌落 | 培养基或操作污染 | 检测结果无效 |
大肠埃希氏菌在EMB上的紫黑色金属光泽是重要筛选特征，但并非绝对特异。部分其他肠杆菌也可能出现较深颜色或类似光泽，因此疑似菌落仍需结合革兰染色、生化鉴定或药典规定方法确认。
七、质量控制
下列质控菌株接种待测培养基后，于30 ℃～35 ℃培养24 h，观察生长率、选择性和特征性反应。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 培养条件 | 标准值 | 预期结果 |
|---|---|---|---|---|
| 生长率 | 大肠埃希氏菌 CMCC(B) 44102 | 30 ℃～35 ℃，24 h | PR≥0.7 | 紫黑色菌落，可有金属光泽 |
| 生长率 | 乙型副伤寒沙门氏菌 CMCC(B) 50094 | 30 ℃～35 ℃，24 h | PR≥0.7 | 无色或半透明菌落 |
| 选择性 | 金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26003 | 30 ℃～35 ℃，24 h | 抑制 | 不生长或明显受抑制 |
| 无菌性 | 未接种培养基 | 同条件培养 | 无菌落生长 | 验证培养基无菌性 |
| 外观检查 | 灭菌后平板 | 室温观察 | 凝胶均匀、颜色正常、无污染 | 验证配制质量 |
原资料中“乙型副伤寒沙门菌”建议规范为“乙型副伤寒沙门氏菌”。若大肠埃希氏菌不出现紫黑色或金属光泽，应检查乳糖、染料、pH、培养时间、平板干湿程度和菌株活性。若金黄色葡萄球菌明显生长，说明选择性可能不足或接种量不符合要求。
八、与麦康凯琼脂培养基的区别
| 项目 | EMB琼脂培养基 | 麦康凯琼脂培养基 |
|---|---|---|
| 选择性成分 | 曙红钠、亚甲蓝 | 胆盐类成分、结晶紫 |
| 鉴别糖类 | 乳糖 | 乳糖 |
| 指示系统 | 曙红钠和亚甲蓝 | 中性红 |
| 大肠埃希氏菌典型表现 | 紫黑色菌落，可有金属光泽 | 粉红至红色菌落，可有胆盐沉淀圈 |
| 非乳糖发酵菌表现 | 无色或半透明菌落 | 无色或浅色菌落 |
| 选择性强度 | 弱选择性 | 通常选择性更明确 |
EMB和麦康凯琼脂都可用于肠道菌分离和乳糖发酵鉴别，但显色体系不同。EMB更突出大肠埃希氏菌强乳糖发酵后的金属光泽特征；麦康凯琼脂则通过中性红和胆盐沉淀圈显示乳糖发酵反应。
九、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 大肠埃希氏菌无金属光泽 | 产酸不足、培养时间不足、pH异常或平板过湿 | 按规定培养并复核pH和质控菌状态 |
| 菌落颜色偏浅 | 染料浓度、培养时间或菌株差异影响 | 结合质控结果综合判读 |
| 平板整体颜色异常 | 灭菌过度、pH偏差或染料受光影响 | 控制灭菌条件并避光保存 |
| 金黄色葡萄球菌生长明显 | 选择性不足或接种量过高 | 复核配制、染料和质控接种量 |
| 无色菌落过多 | 样品背景中非乳糖发酵菌较多 | 挑取典型菌落进一步确认 |
| 平板表面水多 | 倒板温度高、冷却慢或保存不当 | 倒置保存，使用前适当干燥 |
| 空白平板污染 | 灭菌或倒板过程污染 | 复核无菌操作 |
| 干粉结块 | 吸潮 | 不建议继续用于正式检验 |
十、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。干粉使用后应立即密封，防止吸潮结块，并于室温避光干燥处保存。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 个人防护 | 称量时佩戴口罩和手套，避免吸入粉尘 |
| 干粉保存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 配制用水 | 使用蒸馏水或去离子水 |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 避光要求 | 含曙红钠和亚甲蓝，应避免强光长时间照射 |
| 平板保存 | 倒置、避光、密封，并按验证期限使用 |
| 结果确认 | 疑似菌落需进一步确认 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物和平板需灭菌后处理 |
小结
曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）是一种用于革兰阴性肠道菌分离和乳糖发酵鉴别的弱选择性固体培养基。胨和牛肉浸出粉提供营养，氯化钠维持渗透压，乳糖用于发酵鉴别，曙红钠和亚甲蓝同时发挥弱抑菌和显色作用，琼脂形成固体平板。大肠埃希氏菌通常呈紫黑色菌落，并可出现金属光泽；乙型副伤寒沙门氏菌等非乳糖发酵菌通常呈无色或半透明菌落。
使用该培养基时应注意三点：第一，EMB属于弱选择性培养基，不是完全选择性培养基；第二，紫黑色金属光泽只是大肠埃希氏菌疑似特征，不能替代确认试验；第三，药典相关检验应按2025年版《中国药典》或企业确认的适用标准执行，并通过大肠埃希氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等质控菌株验证促生长、鉴别性和选择性。
