洋葱伯克霍尔德菌群选择性琼脂（BCCSA）基础：配方、原理及质控要点
- 2026-06-24 11:26:48
- 逗点生物
洋葱伯克霍尔德菌群选择性琼脂（BCCSA）基础：配方、原理及质控要点
一、产品概况
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 洋葱伯克霍尔德菌群选择性琼脂基础 |
| 常用简称 | BCCSA基础 |
| 英文名称 | BCC Selective Agar Base |
| 货号 | GF654 |
| 规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 选择性、鉴别性固体培养基基础 |
| 配方来源 | 中国药典2025年版 |
| 适用标准 | 中国药典2025年版、中国药典2020年版 |
| 用途 | 用于洋葱伯克霍尔德菌群的选择性分离 |
| 配套试剂 | TJ077，含庆大霉素、万古霉素、多粘菌素B |
| 典型反应 | 洋葱伯克霍尔德菌群生长，周围培养基可变红 |
| 储存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 保质期 | 未开封产品通常为三年，具体以标签为准 |
二、配方组成、用量、作用及用途
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 在培养基中的用途 |
|---|---|---|---|
| 胰蛋白胨 | 10.0 g/L | 提供肽类、氨基酸、氮源和部分碳源 | 支持目标菌基础生长 |
| 蔗糖 | 2.0 g/L | 可利用碳源 | 参与目标菌生长和代谢反应 |
| 酵母提取物 | 1.5 g/L | 提供B族维生素、核苷酸和生长因子 | 促进菌体恢复和生长 |
| 磷酸二氢钾 | 1.54 g/L | 缓冲盐和磷源 | 维持pH相对稳定，提供磷元素 |
| 结晶紫 | 0.001 g/L | 选择性染料抑制剂 | 抑制部分革兰阳性菌，增强选择性 |
| 丙酮酸钠 | 7.0 g/L | 生长促进和保护性成分 | 促进目标菌恢复，改善选择性环境下生长 |
| 氯化钠 | 5.0 g/L | 维持渗透压 | 提供适宜离子环境 |
| 酚红 | 0.02 g/L | pH指示剂 | 显示培养基局部酸碱变化 |
| 琼脂 | 14.0 g/L | 凝固剂 | 形成固体平板，便于分离和观察菌落 |
| 最终pH | 6.2±0.2（25 ℃） | 维持适宜初始酸碱环境 | 保证目标菌生长和指示剂反应稳定 |
三、配套试剂TJ077的作用
| 配套试剂成分 | 每支TJ077含量 | 按每200 mL基础培养基加入1支折算 | 主要作用 |
|---|---|---|---|
| 庆大霉素 | 2 mg/支 | 10 mg/L | 抑制部分敏感革兰阴性菌和其他背景菌 |
| 万古霉素 | 0.5 mg/支 | 2.5 mg/L | 抑制多数革兰阳性菌 |
| 多粘菌素B | 120000 IU/支 | 600000 IU/L | 抑制部分革兰阴性背景菌 |
| 综合作用 | — | — | 与结晶紫共同提高培养基选择性 |
TJ077为选择性增补剂，不应与基础培养基一起高压灭菌。正确做法是基础培养基灭菌后冷却至约50 ℃，再无菌加入配套试剂并充分混匀。若漏加TJ077，培养基选择性会明显不足；若加入温度过高，抗生素可能失活，导致抑菌效果下降。
四、检验原理
BCCSA的核心原理是“营养支持 + 抗生素选择 + 酚红指示”。胰蛋白胨、酵母提取物、蔗糖和丙酮酸钠为洋葱伯克霍尔德菌群提供营养和恢复条件；结晶紫、庆大霉素、万古霉素和多粘菌素B共同抑制部分非目标菌；酚红用于显示培养基局部pH变化。目标菌生长后，周围培养基可出现变红等特征性反应。
| 作用环节 | 主要成分 | 原理 |
|---|---|---|
| 营养支持 | 胰蛋白胨、酵母提取物、蔗糖 | 为目标菌提供氮源、碳源、维生素和生长因子 |
| 生长促进 | 丙酮酸钠 | 促进目标菌恢复，提高选择压力下的生长表现 |
| 缓冲稳定 | 磷酸二氢钾 | 维持培养基pH相对稳定 |
| 基础选择性 | 结晶紫 | 抑制部分革兰阳性菌 |
| 抗生素选择性 | 庆大霉素、万古霉素、多粘菌素B | 抑制部分非目标菌，降低背景干扰 |
| 指示反应 | 酚红 | 根据局部pH变化显示颜色变化 |
| 固体分离 | 琼脂 | 形成单个菌落，便于挑取确认 |
原资料中“结晶紫可以抑制革兰氏阳性菌”的表述方向正确，但完整选择性主要来自结晶紫与TJ077抗生素组合，而不是结晶紫单独完成。发布时应突出“基础培养基+配套试剂”共同构成完整选择性体系。
五、使用方法
| 步骤 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 称量 | 称取本品41.06 g |
| 2. 加水 | 加入蒸馏水或去离子水1 L |
| 3. 溶解 | 搅拌加热煮沸至完全溶解 |
| 4. 灭菌 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 5. 冷却 | 灭菌后冷却至约50 ℃ |
| 6. 加入配套试剂 | 每200 mL基础培养基加入1支TJ077 |
| 7. 混匀 | 轻轻摇匀，避免产生大量气泡 |
| 8. 倒板 | 无菌倾注平皿 |
| 9. 保存 | 平板凝固后倒置、避光、密封保存，并按验证期限使用 |
配制时应确保琼脂完全溶解。加入TJ077前，培养基温度不宜过高，以免抗生素活性下降；温度过低则易导致培养基提前凝固或混合不均。制备好的平板应避光保存，并在经验证的期限内使用。
六、适用场景与分离要点
BCCSA用于洋葱伯克霍尔德菌群的选择性分离，常用于药典相关微生物检查流程中的分离培养阶段。样品经规定方法处理或增菌后，转接至BCCSA平板，通过观察菌落生长及周围培养基颜色变化筛选疑似菌落。
| 应用环节 | 主要目的 |
|---|---|
| 样品处理 | 制备适宜供试液，减少样品基质干扰 |
| 增菌培养 | 提高低数量目标菌检出概率 |
| BCCSA选择性分离 | 抑制部分背景菌，分离疑似Bcc菌落 |
| 菌落观察 | 观察生长、颜色和周围培养基变化 |
| 后续确认 | 对疑似菌落进行进一步鉴定 |
由于洋葱伯克霍尔德菌群中不同成员生长速度和反应可能存在差异，平板通常需要培养48 h～72 h观察。过早判读可能漏检生长较慢或反应较弱的菌株。
七、结果观察与判读
| 观察结果 | 初步判断 | 说明 |
|---|---|---|
| 目标菌生长，周围培养基变红 | 疑似洋葱伯克霍尔德菌群 | 符合质控菌株常见反应 |
| 菌落生长但颜色变化弱 | 可能为反应较弱或培养时间不足 | 应结合培养时间和后续确认 |
| 铜绿假单胞菌不生长 | 选择性符合预期 | 验证对部分非目标革兰阴性菌的抑制 |
| 金黄色葡萄球菌不生长 | 选择性符合预期 | 验证对革兰阳性菌的抑制 |
| 背景菌大量生长 | 选择性不足或TJ077失效/漏加 | 需复核增补剂和配制流程 |
| 空白平板有菌落 | 培养基或操作污染 | 检测结果无效 |
BCCSA上的疑似反应不能直接作为洋葱伯克霍尔德菌群确证结果。阳性或疑似阳性菌落应继续进行规定的鉴定试验，如纯化培养、形态观察、生化鉴定或其他确认方法。
八、质量控制
下列质控菌株接种待测培养基后，于30 ℃～35 ℃培养48 h～72 h，观察生长率、选择性和特征性反应。
| 质控项目 | 质控菌株及编号 | 培养条件 | 标准值 | 预期结果 |
|---|---|---|---|---|
| 生长率 | 洋葱伯克霍尔德菌 CMCC(B) 23005 | 30 ℃～35 ℃，48 h～72 h | PR：0.5～2.0 | 生长良好，周围培养基变红 |
| 生长率 | 新洋葱伯克霍尔德菌 CMCC(B) 23006 | 30 ℃～35 ℃，48 h～72 h | PR：0.5～2.0 | 生长良好，周围培养基变红 |
| 选择性 | 铜绿假单胞菌 CMCC(B) 10104 | 30 ℃～35 ℃，48 h～72 h | 不生长 | 验证对部分非目标革兰阴性菌的抑制 |
| 选择性 | 金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26003 | 30 ℃～35 ℃，48 h～72 h | 不生长 | 验证对革兰阳性菌的抑制 |
| 无菌性 | 未接种培养基 | 同条件培养 | 无菌落生长 | 验证培养基无菌性 |
| 外观检查 | 配制后平板 | 室温观察 | 凝胶均匀，颜色正常，无污染 | 验证配制质量 |
若目标质控菌生长率偏低，应检查基础培养基pH、灭菌条件、TJ077加入温度、抗生素浓度、平板干湿程度和菌株活性。若铜绿假单胞菌或金黄色葡萄球菌生长明显，应重点检查是否漏加TJ077、TJ077是否失效，以及混匀是否充分。
九、基础培养基与完整平板的区别
| 项目 | BCCSA基础 | 加入TJ077后的BCCSA平板 |
|---|---|---|
| 是否含抗生素 | 不含完整抗生素系统 | 含庆大霉素、万古霉素、多粘菌素B |
| 选择性 | 较弱 | 明显增强 |
| 是否可直接用于正式分离 | 不建议 | 可按规定用于选择性分离 |
| 主要用途 | 配制基础培养基 | 分离洋葱伯克霍尔德菌群 |
| 质控要求 | 需与增补剂配套验证 | 验证促生长和选择性 |
因此，发布和使用时应明确产品为“基础”。如果客户只使用基础培养基而不加入配套试剂，可能导致背景菌过度生长，影响洋葱伯克霍尔德菌群检出和结果判断。
十、常见问题与原因分析
| 常见问题 | 可能原因 | 解决建议 |
|---|---|---|
| 目标菌不生长或生长弱 | 抗生素加入温度过高、pH异常、平板过干或菌株状态差 | 冷却至约50 ℃后加TJ077，复核pH和菌株活性 |
| 周围培养基不变红 | 培养时间不足、菌株反应弱或指示剂异常 | 延长至规定时间并结合质控判断 |
| 铜绿假单胞菌生长 | TJ077漏加、失效或混匀不充分 | 检查配套试剂加入流程 |
| 金黄色葡萄球菌生长 | 万古霉素失效或配制错误 | 复核TJ077和加入温度 |
| 平板颜色异常 | pH偏差、过度加热或指示剂变化 | 复核称量、灭菌和pH |
| 平板凝胶不均 | 琼脂未完全溶解或增补剂混匀不足 | 加热至完全溶解，加入后充分混匀 |
| 平板表面水多 | 倒板温度高、冷却慢或保存不当 | 倒置保存，使用前适度干燥 |
| 干粉结块 | 吸潮 | 不建议继续用于正式检验 |
十一、使用与储存注意事项
本品为实验室微生物检验用培养基基础，不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘，建议佩戴口罩、手套和实验服，在通风良好环境下操作。干粉使用后应立即密封，防止吸潮结块，并于室温避光干燥处保存。
| 注意事项 | 要求 |
|---|---|
| 用途限制 | 不得用于临床检验 |
| 产品属性 | 本品为基础培养基，需配合TJ077使用 |
| 个人防护 | 称量时佩戴口罩和手套，避免吸入粉尘 |
| 干粉保存 | 室温、避光、干燥、密封保存 |
| 配制用水 | 使用蒸馏水或去离子水 |
| 灭菌条件 | 121 ℃高压灭菌15 min |
| 增补剂添加 | 冷却至约50 ℃后无菌加入TJ077 |
| 平板保存 | 倒置、避光、密封，并按验证期限使用 |
| 结果确认 | 疑似菌落需进一步鉴定确认 |
| 废弃物处理 | 接种后培养物和平板需灭菌后处理 |
小结
洋葱伯克霍尔德菌群选择性琼脂（BCCSA）基础是用于洋葱伯克霍尔德菌群选择性分离的药典培养基基础。胰蛋白胨、酵母提取物、蔗糖和丙酮酸钠提供营养和生长促进作用；磷酸二氢钾维持pH稳定；结晶紫和配套试剂TJ077中的庆大霉素、万古霉素、多粘菌素B共同提供选择性；酚红显示培养基局部pH变化；琼脂形成固体分离平板。
使用该培养基时应注意三点：第一，本品为基础培养基，必须按说明加入TJ077后才形成完整选择性平板；第二，洋葱伯克霍尔德菌群生长可能需要48 h～72 h，不宜过早判定阴性；第三，平板上的变红反应和菌落生长只能作为疑似筛选依据，最终仍需按2025年版《中国药典》或企业确认的适用标准进行后续鉴定。
