TB培养基：适用于大肠杆菌高密度培养和蛋白表达的营养型肉汤培养基
- 2026-06-25 14:14:09
- 逗点生物
TB培养基：适用于大肠杆菌高密度培养和蛋白表达的营养型肉汤培养基
产品信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | TB培养基 |
| 英文名称 | Terrific Broth |
| 产品货号 | GF1203 |
| 包装规格 | 250 g/瓶 |
| 配制比例 | 干粉 50.9 g/L，另加甘油 4 mL/L |
| 灭菌条件 | 121℃高压灭菌 20 min |
| 产品用途 | 用于大肠杆菌工程菌培养，尤其适用于重组蛋白表达相关实验 |
| 参考来源 | 《分子克隆实验指南》相关配方 |
配方组成与作用
| 成分 | 用量 | 主要作用 | 对培养基用途的贡献 |
|---|---|---|---|
| 胰蛋白胨 | 12.0 g/L | 提供肽类、氨基酸、氮源和部分碳源 | 支持大肠杆菌及工程菌株生长 |
| 酵母提取物 | 24.0 g/L | 提供维生素、核苷酸、矿物质和生长因子 | 提高营养供给，促进菌体增殖和表达体系运行 |
| 磷酸二氢钾 | 2.31 g/L | 与磷酸氢二钾共同构成磷酸盐缓冲体系 | 稳定培养基 pH，降低培养过程中的酸碱波动 |
| 磷酸氢二钾 | 12.54 g/L | 提供磷酸盐缓冲能力和离子强度 | 支持高密度培养条件下的 pH 稳定性 |
| 甘油 | 4 mL/L，配制时另加 | 可利用碳源 | 支持菌体高密度生长，常用于蛋白表达培养 |
| 最终 pH（25℃） | 7.2±0.2 | 维持接近中性的培养环境 | 适合常用大肠杆菌表达菌株培养 |
TB培养基的应用特点
TB培养基的核心特点是营养丰富、缓冲能力较强，适合用于需要较高菌体量的大肠杆菌培养。对于重组蛋白表达实验，较高的菌体密度有时可提高目标蛋白总产量，因此 TB 常用于 BL21 系列及其他表达宿主的培养。不过，培养基营养越高并不一定代表表达效果越好；目标蛋白是否可溶、是否形成包涵体、是否对宿主有毒性，以及诱导温度、诱导剂浓度和诱导时机，都会显著影响最终结果。
TB培养基本身不是选择性培养基，不含抗生素、诱导剂或特殊抑制剂。用于含表达载体的工程菌培养时，应根据载体抗性标记，在灭菌冷却后的培养基中无菌加入相应抗生素，例如氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素或四环素等。IPTG、阿拉伯糖等诱导剂也应根据实验方案在合适的菌体生长阶段加入，不应随培养基一起高压灭菌。
与 LB、2×YT 和 SB 相比，TB 的重要差异在于含有磷酸盐缓冲体系和甘油。磷酸盐有助于维持培养过程中的 pH 稳定，甘油则作为较温和的碳源参与菌体生长。对于需要高密度培养的蛋白表达实验，TB 是常见选择；但对于已经建立在 LB 或其他培养基条件下的成熟工艺，不建议随意更换培养基，否则可能导致表达量、可溶性比例、菌体状态或重复性发生变化。
使用方法
称取 TB培养基干粉 50.9 g，加入约 900 mL 蒸馏水或去离子水中，再加入甘油 4 mL，搅拌加热煮沸至完全溶解后定容至 1 L。根据实验需要分装于三角瓶、培养瓶或试管中，121℃高压灭菌 20 min。灭菌结束后冷却备用。
用于大肠杆菌表达培养时，可接种新鲜单菌落或种子液，常规培养温度为 35～37℃。由于 TB 支持较高菌体密度，培养过程中应注意装液量和通气条件，三角瓶装液量不宜过高，否则可能因供氧不足影响菌体生长和蛋白表达。诱导表达时，应根据菌株、载体和目标蛋白性质，合理控制 OD 值、诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间。
质量控制
产品可采用大肠埃希氏菌 ATCC 25922、大肠杆菌 DH5α 和大肠杆菌 HB101 作为质控菌株，在 36±1℃培养 12～18 h 后观察生长情况。合格培养基应支持质控菌株良好生长，肉汤出现明显浑浊，浑浊度达到规定要求。
| 质控菌株 | 培养条件 | 质控评定指标 |
|---|---|---|
| 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 | 36±1℃，12～18 h | 肉汤浑浊，浑浊度 2 |
| 大肠杆菌 DH5α | 36±1℃，12～18 h | 肉汤浑浊，浑浊度 2 |
| 大肠杆菌 HB101 | 36±1℃，12～18 h | 肉汤浑浊，浑浊度 2 |
储存条件与注意事项
本品应置于室温、避光、干燥处保存，使用后立即旋紧瓶盖，防止吸潮结块。未开封产品有效期为 3 年。若干粉出现明显结块、受潮、变色或其他异常情况，不建议继续使用，以免影响称量准确性、溶解性、pH 和培养效果。
配制 TB 培养基时应注意另加甘油，不能只称取干粉后直接定容灭菌，否则培养基组成不完整，可能影响高密度培养效果。若后续需要加入抗生素或诱导剂，应待培养基灭菌冷却后无菌加入，避免高温造成成分失活。
本产品仅供科研、教学、工业检测及相关实验室用途，不得用于临床诊断。实验结束后的带菌培养物、移液吸头、培养瓶、离心管等污染物，应按实验室生物安全要求处理，通常可于 121℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃处理。
小结
TB培养基是一种适用于大肠杆菌高密度培养和重组蛋白表达的高营养肉汤培养基。其干粉配方由 12.0 g/L 胰蛋白胨、24.0 g/L 酵母提取物、2.31 g/L 磷酸二氢钾和 12.54 g/L 磷酸氢二钾组成，配制时另加 4 mL/L 甘油，最终 pH 为 7.2±0.2。相比普通 LB，TB 具有更丰富的营养供给和更强的缓冲能力，适用于对菌体量和培养稳定性要求较高的大肠杆菌蛋白表达实验。
