菌株基本要求与检验方法：微生物检验中不可忽视的质量控制基础

在食品、药品、化妆品及环境微生物检验中，菌株和样品是影响检验结果可靠性的两个关键环节。菌株用于培养基性能测试、阳性对照、方法适用性验证和实验室质量控制；样品则是检验结果的直接来源。如果菌株来源不清、传代失控、表型漂移，或者样品在运输和保存过程中微生物数量发生变化，即使后续培养基、仪器和操作都没有明显问题，最终结果也可能失真。因此，建立规范的菌株管理和样品处理流程，是微生物实验室质量体系的重要组成部分。

一、菌株为什么必须可溯源

微生物检验中使用的质控菌株，应优先选用微生物菌种保藏专门机构或同行认可机构保存的标准菌株、参考菌株或具有明确来源的质控菌株。常见来源包括国家或行业认可的菌种保藏机构，以及具有明确编号、证书和传代信息的商业菌株资源。

所谓“可溯源”，并不只是知道菌株名称，还应能追溯到菌株编号、来源机构、购入批次、接收日期、复苏记录、传代次数、保存方式和使用记录。对于标准菌株，菌株名称、编号和典型特征应与检验方法或培养基质量控制要求一致。对于参考菌株或替代菌株，还应确认其表型、生化反应或分子鉴定结果能够满足对应实验目的。

标准菌株不是“买回来就可以一直用”。菌株在反复传代过程中可能出现活力下降、菌落形态改变、生化反应减弱、抗性变化或污染混杂。因此，实验室应建立低代次保存体系，尽量减少工作菌株反复传代，并定期进行纯度和典型性检查。

二、标准菌株、参考菌株和野生菌株的区别

实验室常用菌株大致可分为标准菌株、参考菌株和野生分离株。三者用途不同，管理要求也不同。

标准菌株适合用于法规、标准方法和培养基性能测试中规定的质控项目。参考菌株可用于补充验证，例如选择性培养基对弱阳性菌株的支持能力，或对某些易突破抑制的背景菌进行挑战。野生分离株则更接近实际样品中的微生物状态，适合用于方法适用性研究和产品开发，但不能随意替代标准方法中明确规定的标准质控菌株。

三、野生菌株应如何记录和管理

从食品、环境或人体样本中分离、纯化、鉴定而来，且未在微生物菌种保藏专门机构登记注册的菌株，通常称为原始分离株或野生菌株。此类菌株如果用于实验室内部研究、培养基开发或挑战试验，应建立完整的菌株档案。

野生菌株至少应记录以下信息：

野生菌株的价值在于更贴近实际样品，但风险在于身份和特性不如标准菌株稳定。因此，野生菌株不能只凭一次分离结果长期使用。用于关键试验前，应重新复苏、纯化和确认主要特征；用于企业内部质控时，应明确其适用范围，不能将其等同于标准菌株。

四、购入、复苏和传代过程的验证

实验室购入菌株后，应首先核对菌株名称、编号、来源、批号、证书和到货状态。复苏后应进行纯度检查和典型性验证，确认其菌落形态、生化反应、显微特征或必要的分子鉴定结果符合预期。

常见验证项目包括：

对于经常使用的菌株，建议建立主种子批和工作种子批。主种子批用于长期保存，不频繁启用；工作种子批用于日常实验，传代次数应受控。每次复苏、传代、分装、保存和使用均应记录，确保任何一次实验都能追溯到具体菌株来源和代次。

五、菌株保存的基本原则

菌株保存的核心目标是维持活力、保持遗传和表型稳定、防止污染并方便复苏。不同菌株适合的保存方式不同，常见方式包括低温冷冻保存、冻干保存、斜面短期保存、半固体保存和专用菌种保存管保存等。

保存过程中应避免频繁冻融。反复冻融会造成菌体损伤、活力下降或优势亚群变化。正确做法是将同一菌株分装成多个小管，每次使用只取一管复苏，不再反复冻融同一保存管。

六、样品接收：检验前的第一道质量关

实验室接到送检样品后，应首先核对并登记样品信息，包括样品名称、编号、批号、规格、数量、采样时间、采样地点、送检单位、保存条件、运输状态和检验项目等。样品包装应完整，标识应清晰，温度状态应符合检验要求。

如果样品信息不完整、包装破损、温度失控、样品泄漏或超过规定检验时限，应如实记录，并根据实验室程序决定是否拒收、备注接收或与委托方确认。对于微生物检验而言，样品接收状态直接影响结果解释，不能在记录不清的情况下直接进入检测流程。

样品接收的原则是：尽量保持样品原有微生物状态，防止目标微生物死亡、增殖或被背景菌掩盖。微生物检验不同于理化检验，样品中的微生物是动态变化的，保存温度、时间、氧气条件和样品基质都会影响结果。

七、样品处理：尽快检验，减少状态改变

实验室应按标准要求尽快开展检验。若不能及时检验，应采取必要措施保持样品原有状态，防止样品中目标微生物因温度、时间、水分、氧气或基质变化而发生明显改变。

一般原则包括：

冷冻食品的解冻应避免“外层升温过久、内层仍未解冻”的情况。常见通用要求是：可在不超过45℃条件下快速解冻，时间不超过15 min；也可在2℃～5℃条件下解冻，时间不超过18 h。实际操作中，应优先按相应食品类别和检验方法的规定执行。解冻完成后应立即检验，不宜反复冻融。

需要特别注意，不超过45℃快速解冻并不等于可以在接近45℃条件下长时间放置。高温或长时间解冻可能造成部分微生物死亡，也可能使耐受性较强或生长较快的微生物增殖，从而改变样品原有菌相和菌数。

八、检验过程中的文件化管理

菌株和样品管理都必须文件化。文件化不是简单填表，而是保证结果可追溯、可复核、可解释。一次完整的微生物检验记录，应能够回答以下问题：使用了哪一株菌、来自哪里、传了几代、用在哪个试验中；样品何时接收、什么状态、如何保存、何时处理、采用哪种方法检验。

当检验结果出现异常时，完整记录可以帮助实验室快速判断问题来源。例如目标菌阳性对照不生长，可能与菌株活力、培养基质量、培养条件或操作步骤有关；样品菌落数异常偏高或偏低，则需要回看样品接收温度、保存时长和处理过程是否符合要求。

结语

菌株管理和样品处理是微生物检验的基础环节。标准菌株应来源可靠、编号清楚、传代受控、验证充分；野生菌株应有完整的分离、鉴定和保存记录；样品接收后应尽快检验，并在检验前尽量保持原有微生物状态。只有菌株可靠、样品状态真实、记录完整，培养基性能测试和微生物检验结果才具有可追溯性和可信度。