单增李斯特菌动力试验、溶血试验与CAMP试验判读要点

单核细胞增生李斯特氏菌，简称单增李斯特菌（Listeria monocytogenes），是食品微生物检验中重要的食源性致病菌。该菌为革兰氏阳性短杆菌，无芽胞，兼性厌氧，触酶阳性，氧化酶阴性，可在血琼脂上产生窄小β溶血环，并在适宜温度下表现出特征性运动。动力试验、溶血试验和CAMP试验是传统鉴定流程中的重要项目，可帮助区分单增李斯特菌与其他李斯特菌属细菌及部分形态相似菌。

需要注意，这三项试验都属于鉴别性试验，不能单独作为最终阳性结论。实际检验中，应结合选择性平板菌落、纯培养、革兰染色、触酶、糖发酵、生化反应、质谱或分子方法综合确认。

一、为什么要做动力、溶血和CAMP试验

单增李斯特菌在选择性培养基上形成的可疑菌落，需要进一步确认。由于李斯特菌属内不同种之间菌落形态相近，仅凭PALCAM、Oxford、显色培养基或TSA-YE平板上的菌落表现，容易误判。动力试验、溶血试验和CAMP试验分别从运动性、溶血能力和协同溶血特征三个角度提供鉴别信息。

动力和溶血反应受培养温度、培养时间、血液质量、菌株状态和接种方式影响明显，因此必须设置阳性和阴性对照。

二、动力试验：伞状生长和翻滚样运动

单增李斯特菌具有鞭毛，运动性受温度调控。一般在20～25℃时运动性更典型，湿片或悬滴法可见轻微旋转或“翻跟斗样”运动；37℃时鞭毛表达减少，运动性常减弱。标准检验流程中也可使用半固体动力培养基或SIM培养基进行穿刺培养，观察伞状扩散生长。

原资料中“将TSA-YE平板上的疑似菌落穿刺接种到SIM培养基中，于30℃培养24～48 h，李斯特菌有动力，呈伞状生长”的方向基本正确。更严谨的说法是：可疑菌落经纯化后，用接种针垂直穿刺接种半固体动力培养基，按标准规定温度和时间培养，单增李斯特菌可沿穿刺线向两侧扩散，形成典型伞状或倒伞状生长。

动力试验的关键是琼脂浓度和穿刺操作。琼脂过硬会限制扩散，琼脂过软则可能造成整体浑浊，不易判读；穿刺线不直或接种量过大，也会影响伞状生长观察。

三、湿片或悬滴法：观察“翻跟斗样”运动

除半固体培养基外，也可用肉汤培养物进行湿片或悬滴观察。单增李斯特菌在适宜温度培养后，可见短杆菌呈翻滚样、旋转样或快速不规则运动。这种运动不同于布朗运动，布朗运动只是颗粒原地颤动，而真正动力表现为细菌位置改变和方向运动。

湿片观察需要新鲜培养物，培养过久或温度不合适时运动性会下降。若湿片阴性，不应立即排除单增李斯特菌，可结合半固体动力培养基结果判断。

四、溶血试验：单增李斯特菌通常产生窄小β溶血环

单增李斯特菌在羊血琼脂上通常产生窄小β溶血环。由于溶血环较窄，普通划线培养有时不易观察，因此可采用刺种法增强判读。原资料中提到将7%羊血琼脂平板底面划分为20～25个小格，每格刺种一个菌落，同时刺种阳性和阴性对照，这种方法适合批量筛选多个可疑菌落。

刺种时应避免琼脂破裂，否则溶血范围会变形，影响判读。平板过湿、血液质量差、血液自溶或培养时间不足，都会造成溶血环不清晰。

五、不同李斯特菌的溶血差异

李斯特菌属中，不同种的溶血表现不同。单增李斯特菌和斯氏李斯特菌通常产生狭小透明β溶血环；英诺克李斯特菌通常不溶血；伊氏李斯特菌常产生较宽或较明显的β溶血环。但溶血强弱受菌株差异和培养条件影响，因此不能单凭溶血环大小区分种。

原资料中提醒“不要据此来区别李斯特氏各种菌，仅仅是一种溶血现象”，这一点非常重要。溶血是鉴别线索，不是最终分类依据。

六、CAMP试验：协同溶血鉴别李斯特菌

CAMP试验全称为Christie–Atkins–Munch-Petersen试验，不应写作“cAMP试验”。它不是检测环磷酸腺苷，而是检测某些细菌溶血因子之间的协同作用。李斯特菌鉴定中常用金黄色葡萄球菌和马红球菌（Rhodococcus equi）作为指示菌，观察可疑李斯特菌接近指示菌处的溶血是否增强。

典型操作是在羊血琼脂平板上平行划线接种金黄色葡萄球菌和马红球菌，然后在二者之间垂直接种可疑李斯特菌，垂直线应接近但不要接触指示菌线。培养后观察交界附近是否出现箭头状或增强的溶血区。

原资料中“靠近金黄色葡萄球菌接种点的单增李斯特菌溶血增强，斯氏李斯特菌溶血也增强，而伊氏李斯特菌在马红球菌附近溶血增强”的表述基本正确。需要补充的是，CAMP试验结果应与其他生化和分子结果综合判断，不能独立定种。

七、CAMP试验操作关键点

CAMP试验的准确性高度依赖接种距离、血平板质量和对照菌株。可疑菌与指示菌距离过远，协同作用不明显；距离过近或相互接触，则可能造成菌落融合，影响溶血形态判读。

若CAMP阳性对照不典型，整批试验结果不宜判定。若可疑菌自身溶血过强，也可能掩盖协同增强，需要结合菌落位置和对照结果分析。

八、三项试验如何组合判读

动力、溶血和CAMP试验应组合使用。单增李斯特菌通常表现为有动力、窄小β溶血、与金黄色葡萄球菌呈CAMP阳性增强、与马红球菌通常不出现伊氏李斯特菌那样强增强。英诺克李斯特菌通常有动力但不溶血，CAMP阴性；伊氏李斯特菌常有明显溶血，并与马红球菌协同增强。

表中结果为常见模式，实际检验应以标准方法和质控菌株反应为准。若结果矛盾，例如动力阳性但溶血阴性，或CAMP结果不典型，应重复纯化并采用进一步确认方法。

九、常见误判原因

李斯特菌鉴定的一个基本原则是：所有试验都应从纯培养物开始。混合菌落会导致动力、溶血和CAMP结果混乱，是常见误判来源。

十、与食品检验标准方法的关系

在食品中检测单增李斯特菌时，动力试验、溶血试验和CAMP试验通常位于选择性平板分离和纯化之后，用于可疑菌落确认。随着检测技术发展，MALDI-TOF MS、PCR和实时荧光PCR等方法逐渐用于确认，但传统动力、溶血和CAMP试验仍有教学、复核和方法确认价值。

对于培养基企业而言，这些试验也可用于评价相关培养基和试剂性能。例如半固体动力培养基应能显示典型伞状生长，羊血琼脂应支持单增李斯特菌形成窄小β溶血环，CAMP试验用血平板和指示菌应能形成清晰协同溶血反应。

结语

单增李斯特菌动力试验、溶血试验和CAMP试验是传统鉴定流程中的重要组成部分。动力试验可观察半固体培养基中的伞状扩散或湿片中的翻滚样运动；溶血试验可观察单增李斯特菌在羊血琼脂上的窄小β溶血环；CAMP试验则通过与金黄色葡萄球菌或马红球菌的协同溶血，辅助区分单增李斯特菌、伊氏李斯特菌、斯氏李斯特菌和英诺克李斯特菌。实际判读时，应设置阳性和阴性对照，控制培养温度、接种距离、血平板质量和纯培养状态。任何单项试验都不能独立确证单增李斯特菌，最终结果应结合选择性培养、生化反应、质谱或分子方法综合判定。