公共场所空气微生物检验方法：自然沉降法测定空气细菌总数

公共场所人员流动大、停留时间长，空气中微生物水平容易受到通风、清洁消毒、人员密度、湿度、温度和空调系统运行状态影响。空气微生物检测可用于评价室内空气卫生状况、公共场所卫生管理效果和通风消毒措施是否有效。在常规公共场所卫生监测中，自然沉降法是一种操作简单、成本较低的空气细菌总数检测方法。

自然沉降法的基本原理是：将营养琼脂平板在采样点打开暴露一定时间，使空气中携带细菌的尘埃粒子或飞沫自然沉降到培养基表面，经培养后计数菌落数，以每皿菌落数（CFU/皿）表示空气中可沉降细菌污染水平。该方法不直接测量单位体积空气中的细菌数，而是反映一定暴露时间内沉降到平板上的细菌数量，因此更适合用于卫生状况比较和现场常规筛查。

一、空气细菌总数检测的意义

空气细菌总数并不等同于病原菌数量，也不能直接判断是否存在某种传染病风险。它主要反映空气中可培养细菌的总体污染水平，可用于评价公共场所空气卫生、人员活动影响、清洁消毒效果和通风状况。

公共场所如候车室、商场、影院、宾馆、公共浴室、理发店、游泳馆、候诊区等，均可能需要根据监管要求或卫生管理需求开展空气微生物检测。

二、自然沉降法的基本原理

自然沉降法使用直径约90 mm的营养琼脂平板，在采样点暴露规定时间。空气中带菌粒子在重力作用下落到培养基表面，经过36℃±1℃或规定温度培养48 h后，计数生长的细菌菌落数。结果通常以CFU/皿表示。

该方法的优点是设备简单、操作方便，不需要空气采样器；不足是受气流、粒径、沉降速度、人员活动和暴露位置影响较大，不能准确换算为空气体积浓度。因此，自然沉降法结果更适合按标准规定直接以CFU/皿报告，不宜随意换算为CFU/m³。

三、培养基选择：营养琼脂是基础

空气细菌总数检测常用营养琼脂平板。营养琼脂提供一般细菌生长所需的氮源、碳源、无机盐和凝固基质，适用于空气中多数普通需氧或兼性厌氧细菌的培养。

培养基质量会直接影响检测结果。平板应无污染、无明显水滴、无裂纹、无干裂、厚度均匀，pH符合要求。使用前应检查批号、有效期、储存条件和无菌性，必要时进行促生长能力验证。

四、采样点设置：代表性比数量更重要

设置采样点时，应根据现场面积、空间结构、人员活动和空气流动情况选择有代表性的位置。旧资料中提到通常设置5个采样点：室内对角线交点为一个采样点，该交点与四个墙角连线的中点为另外4个采样点。这种布点方式适合面积较规则的室内空间，可较好覆盖中心和周边区域。

采样点不宜设置在墙角、门口、空调直吹处或临时污染源附近，否则结果可能不能代表整体空气卫生状况。对于面积较大或结构复杂的公共场所，应适当增加采样点。

五、采样前准备

采样前应准备好营养琼脂平板、无菌镊子或支架、计时器、采样记录表、温湿度计、样品袋或转运箱等。采样人员应避免在采样点附近频繁走动、说话或剧烈动作，以免人为增加空气扰动和微生物沉降。

采样平板应在采样前恢复至适宜温度，避免平板表面冷凝水影响沉降和菌落分布。平板打开和关闭动作应迅速、规范，避免手部或衣物污染平板。

六、自然沉降法操作步骤

自然沉降法操作相对简单，但细节会明显影响结果。推荐按统一流程执行，减少人员差异。

如果平板上菌落过多、蔓延严重、污染明显或平板破损，应按实验室SOP判定是否剔除，并记录原因。不得随意删除异常数据。

七、结果计算和报告

自然沉降法通常对每个采样点平板上的菌落进行计数，然后计算全部采样点的平均菌落数。报告单位为CFU/皿。

例如5个采样点菌落数分别为8、10、12、9、11 CFU/皿，则平均菌落数为10 CFU/皿。最终可报告为“空气细菌总数：10 CFU/皿，自然沉降法，暴露5 min”。

八、自然沉降法的质量控制

空气微生物检测容易受现场和操作影响，因此需要设置必要的质量控制措施。

营养琼脂平板若自身污染，会导致结果虚高；平板过湿则容易造成菌落扩散和计数困难；平板过干则可能影响细菌恢复。因此，培养基状态是空气微生物检测可靠性的基础。

九、影响检测结果的因素

因此，空气微生物检测结果应结合现场条件解释。仅凭一次检测结果，不宜对场所空气质量作过度判断；对于卫生状况评价，应结合多次监测和趋势分析。

十、自然沉降法的优点和局限

如需获得单位体积空气中的微生物浓度，可采用撞击法、过滤法或其他主动空气采样方法，并按相应标准报告为CFU/m³。自然沉降法与主动采样法数据不能简单等同。

十一、常见问题与处理

十二、检测记录应包含哪些内容

空气微生物检测记录应完整，便于结果复核和现场追溯。

记录越完整，结果解释越可靠。特别是公共场所空气检测受现场条件影响明显，若没有通风、人员和采样点信息，结果可比性会降低。

结语

公共场所空气微生物检验中，自然沉降法是一种基础、简便的空气细菌总数测定方法。其操作要点是将直径约90 mm的营养琼脂平板置于代表性采样点，按规定高度和时间暴露，培养后计数菌落，并以CFU/皿报告结果。该方法可反映一定时间内空气中可沉降细菌污染水平，适合公共场所卫生监测和管理评价。但自然沉降法受气流、人员活动、湿度、平板状态和采样位置影响较大，不能直接代表单位体积空气中的细菌浓度。实际检测应按现行标准、检测目的和现场情况制定采样方案，并做好培养基质控、采样记录、空白控制和结果复核。