猪肉中硝基呋喃类代谢物检测的固相萃取方法（Copure® HLB）

2019-07-31 14:28:08

逗点生物

简介：《GB/T 20752-2006 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定》

一、样品提取

(1) 样品称取脱脂
称取均质后的待测样品 2.00 g( 精确到 0.01 g)，置于50 mL离心管中加入10 mL甲醇/水混合物(2:1, v/v)，振荡混匀 10 min，4000 r/min 离心 10 min，吸取清液弃掉，离心管中试样备用。
(2) 水解衍生化
向上述离心管中加入 20 mL 0.2 mol/L 盐酸，振荡混匀 10min，后加入0.4 mL 0.05 mol/L 2-硝基苯甲醛(0.075 g 2-硝基苯甲醛溶于 10 mL 二甲亚砜 )，涡旋混匀 1 min，置于37 ℃恒温振荡器水浴中避光反应 16 h。将上述衍生液，放置至室温，加入 5 mL 0.1 mol/L 磷酸氢二钾溶液，用 1mol/L NaOH 调节 pH 到约 7.4，4000 r/min 离心 10 min，上清液 ( 对脂肪含量多的试样，可加入 5 mL 正己烷，振荡2 min，4000 r/min离心5 min吸取并弃掉正己烷)待净化。

二、SPE 柱净化

实验材料： Copure® HLB，60 mg/3 mL

(1) 活化：依次用 5 mL 甲醇、10 mL 水活化。
(2) 上样和洗脱：取上述备用液控制流速小于 2 mL/min 过柱。待样液全部通过后用 10 mL 水淋洗上样柱，弃去全部流出液并真空抽干，最后用 5 mL 乙酸乙酯洗脱柱子上的待测成分。
(3) 重新溶解：收集洗脱液，于 40 ℃氮气吹干，准确加入 1 mL 乙腈 / 水溶液 (1:2, v/v) 溶液溶解残余物混匀，0.22 µm 滤膜过滤，供高效液相色谱测定。

三、仪器条件

设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：275 nm
流动相：A：乙腈 B：0.01 mol/L 乙酸铵（0.77 g 乙酸铵
用水定容至 1 L，甲酸调 pH=3.5）
洗脱方式：梯度洗脱，见表 1

表 1 流动相梯度洗脱程序