志贺菌血清学鉴定：O抗原分群、玻片凝集与结果判读要点

志贺菌（Shigella）是重要的肠道致病菌，可引起细菌性痢疾和急性胃肠道感染。食品、临床和公共卫生微生物检验中，志贺菌的鉴定通常包括选择性分离、纯培养、生化鉴定、血清学分群分型以及必要时的分子确认。血清学鉴定的核心，是利用志贺菌菌体O抗原与相应诊断血清发生特异性凝集反应，从而判断其所属群、型或亚型。

需要强调，血清学鉴定不是孤立步骤。志贺菌与大肠埃希氏菌，尤其是肠侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）在遗传、生化和抗原结构上关系密切，部分O抗原存在交叉反应。因此，志贺菌血清学阳性结果必须建立在疑似菌株已完成纯化和基本生化鉴定的基础上，不能仅凭一滴血清凝集就直接判定为志贺菌。

一、志贺菌血清学鉴定的作用

志贺菌血清学鉴定主要用于疑似志贺菌分离株的分群和分型。经过选择性平板分离后，实验室通常会挑取可疑菌落，在非选择性培养基上纯化，再进行生化试验和血清学凝集。血清学鉴定可帮助判断菌株属于A群、B群、C群或D群，并进一步确定部分血清型或亚型。

血清学鉴定的价值在于快速、直观、操作简便，特别适用于常规实验室对分离株进行初步分群分型。但它不能替代生化鉴定和必要的确认试验。

二、志贺菌的抗原结构

志贺菌无鞭毛、无动力，因此没有H抗原。其血清学分类主要依据菌体O抗原。某些新鲜分离株表面可能存在K抗原或包膜样表面结构，可遮蔽O抗原，导致菌体不易与相应O抗血清凝集。

旧资料中将O抗原写作“糖脂蛋白复合物”不够准确。更规范的表述是：志贺菌O抗原属于外膜脂多糖（LPS）的O多糖部分，是血清学分群和分型的主要抗原基础。

三、志贺菌四个血清群

传统上，志贺菌分为四个血清群，对应四个种。不同资料和标准对血清型、亚型数量的统计可能存在差异，原因包括新血清型发现、亚型划分、商品血清覆盖范围和分类体系更新。因此，不建议在科普或产品文章中固定写成“39个”或“48个”而不说明来源。

志贺菌血清学分群一般先用多价血清筛查，再用相应群血清、型血清或因子血清进一步确认。具体操作应按所用诊断血清说明书和现行标准执行。

四、为什么要设置盐水对照

血清学鉴定通常采用玻片凝集法。操作时应同时设置生理盐水对照，即将菌悬液与生理盐水混合，观察是否出现自凝集。如果盐水对照也出现颗粒状凝集，说明该菌株存在自凝集或粗糙型倾向，血清凝集结果不可靠。

设置盐水对照是防止假阳性的重要步骤。省略盐水对照，会把部分粗糙型菌株或自凝集菌株误判为血清阳性。

五、抗原制备与菌落选择

血清学鉴定应使用纯培养、新鲜、典型的菌落。可从5%羊血琼脂、营养琼脂、TSA或其他非选择性培养基上挑取单个菌落进行试验。使用非选择性培养基纯化的目的，是减少选择性培养基成分对菌体表面抗原和凝集反应的干扰。

如果新鲜分离株因K抗原或表面抗原遮蔽导致O血清不凝集，可按标准或血清说明书采用加热菌悬液处理，使表面抗原失活，再重复凝集试验。但加热处理应规范操作，避免菌液浓度过高、加热不足或加热过度影响结果。

六、玻片凝集法基本操作

玻片凝集法操作简便，但要求菌量适中、混合均匀、观察时间统一。一般在洁净玻片上分别滴加生理盐水和诊断血清，用接种环或无菌棒取少量菌苔乳化，轻轻摇动玻片，在规定时间内观察是否出现肉眼可见颗粒状凝集。

凝集反应应在规定时间内判读。放置时间过长，液滴干燥或边缘析出可能造成假凝集。

七、分群分型的一般流程

志贺菌血清学鉴定通常先用志贺菌多价血清进行筛查。若多价血清凝集，再用相应群血清或单价血清进行分群、分型。若某一群多价血清不凝集，再依次检测其他群血清。实际顺序可根据当地流行菌群、标准方法和诊断血清说明书确定。

在常规工作中，B群福氏志贺菌和D群宋内志贺菌较常见，许多实验室会优先检测B群和D群血清；若不凝集，再检查A群和C群。但不能因此忽略当地标准流程和诊断血清使用说明。

八、福氏志贺菌和宋内志贺菌的特殊点

福氏志贺菌血清学较复杂，除型抗原外，还有群抗原，常需结合型因子血清和群因子血清进行亚型判定。宋内志贺菌相对简单，但可出现Ⅰ相和Ⅱ相变化，不同相别凝集表现不同。

进行分型时，应避免只根据一个血清反应下结论。尤其是福氏志贺菌，型抗原和群抗原组合决定最终分型，单一血清反应可能不足以完成判定。

九、交叉凝集与血清学鉴定局限

旧资料中提到志贺菌O抗原与大肠埃希氏菌关系密切，部分菌型与大肠埃希氏菌O抗原相同或相近，可能发生血清交叉凝集。这一点非常重要。志贺菌与EIEC在遗传和表型上也高度接近，传统生化和血清学方法有时难以完全区分。

因此，血清学结果必须与生化结果相互印证。典型志贺菌通常为革兰阴性无芽孢杆菌、氧化酶阴性、无动力，发酵葡萄糖产酸通常不产气，多数不发酵乳糖，H₂S阴性，尿素酶阴性，赖氨酸脱羧酶阴性。若血清学阳性但生化特征明显不符，应重新纯化并复核。

十、质量控制要点

血清学鉴定对诊断血清质量、菌株状态和人员判读要求较高。每批诊断血清应在有效期内使用，按说明书保存，避免反复冻融或污染。关键试验应设置阳性和阴性对照。

若阳性对照不凝集或阴性对照出现凝集，应判定本次试验无效，不能报告分群分型结果。

十一、常见异常与处理

十二、结果报告建议

志贺菌血清学鉴定报告应明确“疑似”“分群”“分型”或“确认”的层级，不宜在证据不足时直接写最终结论。若只完成血清学凝集而未完成完整生化或标准确认，应避免报告为“志贺菌确认阳性”。

对于食品安全或公共卫生事件中的志贺菌分离株，必要时应结合分子检测、全基因组测序或参考实验室分型结果进行确认和溯源。

结语

志贺菌血清学鉴定主要依据菌体O抗原与诊断血清的凝集反应，用于将疑似分离株分为A群痢疾志贺菌、B群福氏志贺菌、C群鲍氏志贺菌和D群宋内志贺菌，并进一步进行型或亚型鉴定。志贺菌无鞭毛、无动力，因此无H抗原；部分新鲜菌株表面抗原可能遮蔽O抗原，必要时可经加热处理后复试。由于志贺菌与大肠埃希氏菌及EIEC关系密切，部分O抗原存在交叉反应，血清学鉴定必须与纯培养、生化鉴定和必要的分子确认结合使用。规范操作中应设置盐水对照，排除自凝集；使用有效诊断血清和对照菌株，记录反应强度和血清批号。只有把血清学结果放在完整鉴定流程中解释，才能提高志贺菌检测结论的可靠性。