DO Supplement -His：用于制备缺组氨酸酵母筛选培养基的营养补充物

产品信息

项目	内容
产品名称	DO Supplement -His
中文名称	缺组氨酸氨基酸补充物
英文名称	Dropout Supplement -Histidine
产品货号	GF911
包装规格	20 g/瓶
储存条件	2～8℃密封保存
运输条件	常温运输
有效期	2 年
产品用途	用于配制 SD/-His 等缺组氨酸酵母合成培养基，适用于 HIS3 标记筛选、酵母双杂交、功能互补和营养缺陷型筛选实验

DO Supplement -His 的作用原理

酵母合成缺陷型培养基通常由三部分组成：YNB 提供无机氮源、盐类、维生素和微量元素；葡萄糖或其他糖类提供碳源；Dropout Supplement 提供除目标缺失营养成分以外的氨基酸和核苷酸补充物。DO Supplement -His 的特点是缺少组氨酸，其余必要营养补充成分则用于支持酵母基础生长。

在 SD/-His 培养基中，普通不能合成组氨酸的营养缺陷型酵母无法正常生长；而携带 HIS3 筛选标记、HIS3 报告基因被激活，或通过功能互补恢复组氨酸合成能力的酵母，可以在缺组氨酸条件下形成菌落。因此，DO Supplement -His 常用于筛选含 HIS3 标记质粒的酵母转化子，也常见于酵母双杂交系统中，用于检测蛋白互作是否激活 HIS3 报告基因。

需要注意的是，DO Supplement -His 本身不是完整培养基，不能单独用于培养酵母。它也不是抗生素或诱导剂，而是营养缺失筛选体系中的补充物。真正发挥筛选作用的是“培养基缺少组氨酸”这一条件，而不是该补充物直接抑制某类细胞。

配方组成与用途

成分或组分	用量	主要作用	对培养基用途的贡献
DO Supplement -His	按产品标签加入	提供除组氨酸外的氨基酸、碱基等营养补充物	构建缺组氨酸筛选环境，用于 HIS3 标记或 HIS3 报告基因相关筛选
YNB（无氨基酸）	6.7 g/L，常用于酿酒酵母体系	提供硫酸铵、无机盐、维生素和微量元素	构成酵母合成培养基的基础营养体系
葡萄糖	20.0 g/L	提供主要碳源和能源	支持酵母在缺陷型培养基中生长
琼脂	20.0 g/L，仅平板使用	培养基凝固剂	制备 SD/-His 固体平板，便于转化子筛选和菌落挑取
pH	常调至约 5.8	维持适宜酵母生长环境	有助于提高培养条件一致性

SD/-His 培养基配制示例

以下为常见 SD/-His 培养基配方示例。不同批次或不同规格的 DO Supplement -His 推荐用量可能不同，因此实际添加量应以产品标签为准。

培养基类型	1 L 配方示例	主要用途
SD/-His 液体培养基	YNB 6.7 g + 葡萄糖 20.0 g + DO Supplement -His 按标签加入，补水至 1 L，pH 调至约 5.8	用于缺组氨酸条件下的酵母液体培养、质粒维持和功能筛选
SD/-His 平板培养基	YNB 6.7 g + 葡萄糖 20.0 g + DO Supplement -His 按标签加入 + 琼脂 20.0 g，补水至 1 L，pH 调至约 5.8	用于酵母转化子筛选、单菌落分离和 HIS3 相关报告系统筛选
SD/-His + 其他缺陷组合	根据实验目的更换为对应 Dropout Supplement 或组合缺陷补充物	用于双筛、三筛、酵母双杂交和多标记质粒筛选

典型应用场景

DO Supplement -His 最常见的用途是筛选 HIS3 标记相关的酵母转化子。例如，若酵母宿主本身为 his3 缺陷型，只有转入携带 HIS3 标记质粒的细胞才能在 SD/-His 平板上生长。因此，SD/-His 可用于筛选成功获得目标质粒的酵母细胞。

在酵母双杂交实验中，HIS3 常作为报告基因之一。当诱饵蛋白和猎物蛋白发生相互作用时，转录激活结构域可驱动 HIS3 报告基因表达，使酵母在缺组氨酸培养基上生长。此时 SD/-His 平板可用于初步筛选可能存在蛋白互作的克隆。若需要提高筛选强度，部分体系还会加入 3-AT 等 HIS3 竞争性抑制剂，但是否加入以及加入浓度应根据载体系统和实验方案确定。

DO Supplement -His 也可用于功能互补实验。例如，将候选基因导入组氨酸合成缺陷酵母中，若候选基因能够恢复相关代谢功能，酵母即可在缺组氨酸条件下生长。此类实验中，阴性对照、阳性对照和空载体对照非常关键，否则容易误判背景生长或假阳性结果。

使用方法

按产品标签称取适量 DO Supplement -His，加入去离子水中，再加入 6.7 g YNB、20.0 g 葡萄糖，搅拌溶解后调节 pH 至约 5.8。如需制备平板，再加入 20.0 g 琼脂，补水至 1 L。121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 50℃，可根据需要加入热敏性抗生素或其他添加剂，然后倒入无菌培养皿中，室温凝固后使用。制备好的平板可用封口膜封好后倒置置于 4℃保存。

如果配制少于 1 L 的体积，各成分按比例减少即可。例如配制 500 mL SD/-His 平板时，YNB、葡萄糖、琼脂和 DO Supplement -His 均按 1/2 用量加入。剩余粉剂应及时密封，置于推荐条件下保存，避免反复受潮。

对于要求较高的表达调控实验或对培养基颜色敏感的实验，可将葡萄糖单独配制为无菌储备液，过滤除菌后在培养基灭菌并冷却后加入。普通酵母杂交或常规筛选实验中，整体高压灭菌通常更方便，也能降低操作过程中的污染风险。

灭菌方式与葡萄糖颜色变化

SD 培养基中含有葡萄糖和含氮成分，高温高压灭菌过程中可能发生轻微美拉德反应或糖类热降解，使培养基颜色变深。控制好灭菌温度和时间时，这种轻微颜色变化通常不会明显影响多数酿酒酵母筛选实验。但如果培养基明显变褐、出现焦化气味或异常沉淀，则应检查灭菌条件是否过度。

对于毕赤酵母等对碳源条件较敏感的体系，或涉及表达调控、代谢分析的实验，不建议简单忽略葡萄糖高温处理带来的影响。更稳妥的做法是将 YNB、DO Supplement 和琼脂等基础成分先灭菌，葡萄糖单独过滤除菌后无菌加入冷却后的培养基中，以减少糖热反应对实验背景的干扰。

质量控制与结果观察

使用 DO Supplement -His 配制的 SD/-His 培养基应具备明确的缺组氨酸筛选能力。阳性菌株或携带 HIS3 标记的酵母应能在培养基上生长；阴性对照或缺少 HIS3 功能的菌株应不生长或明显受限。若阴性对照大量生长，通常提示培养基中可能存在组氨酸污染、Dropout 用错、菌株背景不匹配或筛选条件过低。

检查项目	合格表现	可能异常
粉剂状态	干燥、均匀、无严重结块	吸潮、结块、变色、异味
培养基外观	灭菌后均一，无明显异常沉淀	明显褐变、焦化气味、沉淀异常
阳性对照	HIS3 阳性或互补阳性菌株可生长	生长弱或不生长，需检查碳源、YNB、pH 或菌株状态
阴性对照	HIS3 阴性菌株不生长或明显受限	背景生长高，需检查补充物是否用错或污染
平板状态	凝固良好，表面平整，无污染	平板失水、开裂、污染或表面水分过多

储存条件与注意事项

DO Supplement -His 应于 2～8℃密封保存，避免受潮和长时间暴露于空气中。若产品出现严重吸水、结块、变色或异味，应停止使用，以免影响配制准确性和筛选结果。开封后建议尽快使用，并在取用后立即密封。

本产品仅限专业实验室科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得作为食品、药品或食品加工原料使用，也不应存放于普通住宅内。操作时应穿实验服并佩戴一次性手套。实验结束后的带菌平板、培养物、吸头、离心管和其他污染物应按实验室生物安全要求处理，通常可于 121℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃。

小结

DO Supplement -His 是用于制备缺组氨酸酵母合成培养基的 Dropout 补充物，需与 YNB、葡萄糖或其他碳源配合使用，才能形成 SD/-His 等具体培养基。该产品通过缺失组氨酸构建选择压力，适用于 HIS3 标记质粒筛选、酵母双杂交、报告基因检测、功能互补、离子耐受和突变体鉴定等实验。使用时应严格按照标签添加，配合正确的 YNB、碳源、pH 和对照菌株，才能获得可靠的筛选结果。