2×YT琼脂培养基：适用于基因工程大肠杆菌培养的高营养固体培养基

产品信息

配方组成与作用

2×YT琼脂培养基的应用特点

2×YT琼脂培养基本身不是选择性培养基，不含抗生素、诱导剂、显色底物或特殊抑制剂。若用于含质粒、噬菌粒或其他抗性标记载体的工程菌筛选，应在灭菌后冷却至约 50～55℃时，无菌加入相应抗生素，如氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素或四环素等。抗生素一般不应与培养基一起高压灭菌，否则可能因热降解导致筛选压力下降。

在分子克隆实验中，2×YT琼脂可用于转化后菌液涂布、工程菌单菌落分离、菌株纯化和后续挑取单克隆。由于其营养更丰富，也常用于噬菌体展示、噬菌粒扩增或需要较好菌落恢复状态的实验体系。但需要注意，营养水平较高并不等于适用于所有实验；若实验方案明确要求 LB、SOC、SOB 或其他培养基，应优先按方案执行，避免培养条件变化影响实验重复性。

使用方法

称取 2×YT琼脂培养基干粉 46.0 g，加入约 900 mL 蒸馏水或去离子水中，搅拌并加热至完全溶解，再定容至 1 L。分装后于 121℃高压灭菌 20 min。灭菌结束后，将培养基冷却至约 50～55℃，如需添加抗生素或其他热敏性添加剂，应在无菌条件下加入并充分混匀，然后倒入无菌培养皿中制成平板。

平板凝固后可用于划线分离、涂布培养或转化子筛选。常用培养条件为 35～37℃培养 12～18 h，具体培养时间应根据菌株类型、接种量、抗生素种类和实验目的调整。已加入抗生素的平板应按相应抗生素稳定性要求保存和使用，不宜长期反复暴露于室温或光照条件下。

质量控制

产品可采用大肠埃希氏菌 ATCC 25922 和大肠杆菌 TOP10 作为质控菌株，在 36±1℃培养 12～18 h 后观察生长情况。合格培养基应支持质控菌株良好生长，生产率比值 PR 应不低于 0.7。

储存条件与注意事项

本品应置于室温、避光、干燥处保存，使用后立即旋紧瓶盖，防止吸潮结块。未开封产品有效期为 3 年。若干粉出现明显结块、受潮、变色或其他异常情况，不建议继续使用，以免影响称量准确性、溶解性、pH 和菌落生长表现。

本产品仅供科研、教学、工业检测及相关实验室用途，不得用于临床诊断。实验结束后的带菌平板、培养物、吸头、接种环等污染物，应按实验室生物安全要求处理，通常可于 121℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃处理。

小结

2×YT琼脂培养基是一种营养丰富的分子生物学固体培养基，由 16.0 g/L 胰蛋白胨、10.0 g/L 酵母提取物、5.0 g/L 氯化钠和 15.0 g/L 琼脂组成，最终 pH 为 7.0±0.2。与普通 LB 琼脂相比，2×YT琼脂提供更充足的营养支持，适用于基因工程大肠杆菌的固体培养、单菌落分离、转化子筛选、菌株纯化及噬菌体/噬菌粒相关实验，是分子克隆实验中常用的基础固体培养基之一。