，4000 r/min 离心5min 。浓缩与复溶：取盐析后的上清液至氮吹管中，40 8451 浓缩至近干，精密加入1ml 乙酸铵（10mmol/l ）：乙腈1 ：1 溶液复溶，过0.22 956 m亲水ptfe 滤膜，上机测试。标准工作曲线：称取空白基质2g 共6 份于50ml 离心管中，分别加入适量二甲基黄和二乙基黄混合中间溶液（100ng/ml ）

配置，用正己烷和丙酮配置曲线时，苏丹红峰形可能会出现异常。三、仪器条件仪器：thermofisher u3000 液相色谱仪色谱柱：commasil® c18   4.6 mm 215 250 mm ，5 956 m流动相：a ：0.02 磷酸水；b ：乙腈洗脱方式：a ：b 5:95 等度洗脱流速：1 ml/min ，柱温：30 8451 ，进样量：20 956 l 检测器：紫外检测器，检测

时，用4ml 乙腈分2 次洗脱小柱，收集洗脱液；氮吹复溶：将收集液于40 8451 下缓缓氮吹至0.5ml 左右，用乙腈定容至2ml ，超声涡旋复溶后过0.22 956 m亲水ptfe 滤膜，上机测试。说明：（1 ）需要收集上样液（2 ）实验中发现氮吹过程中容易造成目标物损失，因此氮吹时建议控制气流，

功能混匀仪3 ）biocomma®   96  孔正压提取装置4 ）biocomma®   96  孔氮吹仪5 ）biocomma® 热封膜仪二、仪器条件仪器：thermo  scientific  tsq  endura 色谱柱：commasil®   c18  2.1mm 215 100  mm   3  181 m  柱温：35 8451 进样量：5  181 l 流动相：a ：水      b ：乙腈（含0.1 fa ）  洗脱方式：梯度洗脱表1  流动相梯度洗脱条件时间（min ）流

功能混匀仪3 ）biocomma®   96 孔正压提取装置4 ）biocomma®   96  孔氮吹仪5 ）biocomma® 热封膜仪二、仪器条件仪器：thermo  scientific  tsq  endura 色谱柱：commasil®   c18  2.1mm 215 100  mm   3  181 m  柱温：35 8451 进样量：8  181 l 流动相：a ：水（含  0.1 fa ）  b ：甲醇（含0.1 fa ）  洗脱方式：等度洗脱  a:b 20:80 电喷雾电压：3500  v  鞘气

沉淀过滤板2 ）biocomma® 多功能混匀仪3 ）biocomma®   96  孔正压提取装置4 ）biocomma® 热封膜仪二、仪器条件仪器：thermo  scientific  tsq  endura 色谱柱：commasil®   c18  2.1mm 215 100  mm   3  181 m  柱温：35 8451 进样量：8  181 l 流动相：a ：水（  含5  mmol/l  乙酸铵和0.05 甲酸）                  b ：甲醇  洗脱方式：梯度洗脱表1  流

混匀仪3 ）biocomma®   96  孔氮吹仪4 ）biocomma®   96 孔正压提取装置5 ）biocomma®   热封膜仪二、仪器条件仪器：thermo  scientific  tsq  endura 色谱柱：commasil®   aq  2.1  mm 215 100  mm   1.9  181 m  柱温：30 8451 样品温度：10 8451   进样量：2  181 l 流动相：a ：水（含0.1   fa ）                  b ：甲醇  洗脱方式：梯度洗脱表1 

沉淀过滤板  2 ）biocomma® 多功能混匀仪  3 ）copure® prp 磷脂去除柱  4 ）biocomma® 热封膜仪  二、仪器条件  仪器：thermo scientific tsq endura  色谱柱：commasil® aq 2.1mm 215 100 mm 1.9 181 m  柱温：35 8451 样品温度：10 8451   进样量：5 181 l 流动相：a ：水（含0.1 甲酸）b ：甲醇（含0.1 甲酸）  洗脱方式：梯度洗脱  表1 流动

管中，从流出液中准确移取2ml 于离心管中，40 8451 氮吹至近干，加入1ml 0.1 甲酸乙腈：0.1 甲酸水1 ：1 溶解残余物，超声涡旋复溶后，过0.22 956 m尼龙滤膜，上机测试。注：（1 ）本应用的固相萃取小柱为通过式的，因此不需要活化、淋洗和洗脱步骤。（2 ）考虑到小柱有死腔体

阴性杆菌经革兰氏染色后，肺炎克雷伯菌在显微镜下呈较短粗的革兰氏阴性杆菌，可单个、成双或短链状排列。细胞大小大致为0.3 ～1.5 956 m215 0.6 ～6 956 m。该菌无芽孢、无鞭毛，通常不运动。镜检是鉴定过程中的重要质量控制步骤。若镜下出现革兰氏阳性菌、球菌、真菌或