结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）：大肠菌群测定中的选择性培养基

产品信息

项目	内容
产品名称	结晶紫中性红胆盐琼脂培养基
英文名称	Violet Red Bile Agar
简称	VRBA
产品货号	GF1002
产品规格	250 g/瓶
保质期	三年
产品用途	用于大肠菌群的测定
配制量	41.5 g/L
最终pH（25℃）	7.4±0.1

培养基配方及各组分作用原理

VRBA培养基的设计思路是同时实现“营养支持、选择性抑制和鉴别显色”三大功能。培养基中的每一种成分都承担着特定作用，共同保证大肠菌群能够被有效检出并与其他微生物区分。

成分	含量（g/L）	作用	原理说明
蛋白胨	7.0	基础营养物质	蛋白胨由蛋白质水解而来，可提供氨基酸、多肽、氮源及部分矿物质，满足细菌生长繁殖所需的基本营养需求，是培养基的主要营养来源之一。
酵母粉	3.0	提供生长因子	富含B族维生素、核苷酸、氨基酸及微量元素，可促进受损菌和营养要求较高菌株的恢复与生长，提高目标菌回收率。
氯化钠	5.0	维持渗透压平衡	调节培养基渗透压，使其接近细菌细胞内环境，防止细胞因渗透压差异发生失水或吸水破裂。
乳糖	10.0	鉴别底物	大肠菌群能够发酵乳糖产生酸性代谢产物，而多数非目标菌不能或发酵能力较弱，因此乳糖是区分大肠菌群的重要鉴别成分。
胆盐	1.5	选择性抑制剂	模拟肠道环境中的胆汁成分，可抑制多数革兰氏阳性菌及部分非肠道细菌，而耐胆盐的大肠菌群能够正常生长，从而提高培养基选择性。
结晶紫	0.002	增强选择性	结晶紫可与革兰氏阳性菌细胞壁中的肽聚糖结合，干扰细胞代谢和分裂，对革兰氏阳性菌具有明显抑制作用，与胆盐协同提高选择性。
中性红	0.03	pH指示剂	当乳糖发酵产生酸时，培养基局部pH下降，中性红由淡黄色转变为红色，使产酸菌形成红色至紫红色菌落，实现可视化鉴别。
琼脂	15.0	凝固剂	为微生物提供稳定的固体生长表面，便于菌落形成、观察和计数，本身不参与微生物代谢。

检验原理

VRBA的核心原理可以概括为“选择性抑制+乳糖发酵显色”。

培养基中的蛋白胨和酵母粉为细菌提供充足营养，使目标菌能够快速恢复和生长。胆盐与结晶紫共同构成选择性体系，对多数革兰氏阳性菌产生抑制作用，而大肠菌群属于耐胆盐的革兰氏阴性肠杆菌，因此能够在培养基上正常生长。

乳糖是培养基中的关键鉴别底物。典型大肠菌群能够利用乳糖进行发酵，产生乳酸等酸性代谢产物，使菌落周围环境pH下降。中性红作为酸碱指示剂，在酸性条件下呈红色，因此乳糖发酵阳性菌通常形成红色至紫红色菌落。

部分菌落周围还会出现红紫色或淡红色胆盐沉淀环。这是由于乳糖发酵产生的酸使局部环境酸化，降低胆盐溶解度，从而形成沉淀。沉淀环的形成程度与菌株产酸能力、培养时间、培养基状态等因素有关，因此在标准质量控制中，典型菌落允许表现为“有或无沉淀环”。

使用方法与制备注意事项

称取本品 41.5 g，加入蒸馏水或去离子水 1 L，充分搅拌，加热煮沸至完全溶解，煮沸时间不超过 2 min。

VRBA通常不建议高压灭菌。原因在于培养基中含有乳糖、中性红、胆盐和结晶紫等热敏感成分，长时间高温处理可能导致乳糖分解、指示剂性能下降以及选择性减弱，从而影响培养基的鉴别效果和检测准确性。因此，培养基只需加热至完全溶解即可使用。

制备完成后应观察培养基外观。正常培养基应呈均匀红紫色，无明显沉淀、焦化、污染或异常变色。倾注平板时温度一般控制在45℃～50℃左右，以保证样品与培养基充分混匀，同时避免对受损细胞造成热损伤。

质量控制要求

接种以下质控菌株，于 36℃±1℃需氧培养18 h～24 h，结果应符合相应评定标准。

质控指标	质控菌株及编号	质控评定标准
生长率	大肠埃希氏菌 ATCC 25922	PR≥0.7；有或无沉淀环的紫红色或红色菌落
生长率	弗氏柠檬酸杆菌 ATCC 43864	PR≥0.7；有或无沉淀环的紫红色或红色菌落
选择性	粪肠球菌 ATCC 29212	G＜5

其中，PR表示培养基对目标菌的生产率（Productivity Ratio），用于评价培养基的促生长能力；G值表示选择性系数，用于评价培养基对非目标菌的抑制能力。

大肠埃希氏菌和弗氏柠檬酸杆菌应形成典型红色至紫红色菌落，说明培养基具有良好的营养支持和鉴别能力；粪肠球菌作为革兰氏阳性菌，应受到明显抑制，说明胆盐和结晶紫的选择性作用有效。

典型结果与判读要点

大肠菌群在VRBA培养基上通常形成圆形、边缘整齐的红色至紫红色菌落，部分菌落周围伴有胆盐沉淀环。菌落颜色来源于乳糖发酵产酸后中性红的显色反应，而沉淀环则来源于局部酸化导致胆盐析出。

需要注意的是，VRBA属于选择性鉴别培养基，而非最终确认培养基。部分非大肠菌群细菌也可能形成类似颜色菌落，而部分受损的大肠菌群菌株则可能表现出较弱的发酵反应。因此，在食品微生物检测中，典型菌落通常还需按照相关标准进行后续确认试验，不能仅依据菌落颜色直接判定结果。

常见问题与控制建议

VRBA培养基的性能主要取决于营养体系、选择性体系和鉴别体系之间的平衡。

如果胆盐或结晶紫浓度过高，虽然能够增强选择性，但也可能抑制部分受损的大肠菌群，导致回收率下降；如果浓度过低，则可能造成革兰氏阳性菌突破抑制，影响计数准确性。因此，在培养基质量控制中，应同时关注目标菌生长率和非目标菌抑制效果。

若大肠埃希氏菌或弗氏柠檬酸杆菌生长不良，应重点检查培养基是否过度加热、pH是否偏离标准范围、干粉是否吸潮变质以及培养条件是否符合要求。若粪肠球菌抑制不足，则应检查胆盐和结晶紫的有效性及配制准确性。

此外，VRBA平板不宜长期储存。随着保存时间延长，培养基中的指示剂和选择性成分可能逐渐发生变化，导致显色效果减弱或选择性下降。使用前应检查平板是否存在干裂、冷凝水过多、颜色异常或污染等情况。

总结

结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）是食品中大肠菌群检测最常用的选择性鉴别培养基之一。其设计充分体现了培养基配方中各组分的协同作用：蛋白胨和酵母粉提供营养支持，氯化钠维持渗透压平衡，乳糖作为鉴别底物，中性红负责显色，胆盐和结晶紫共同构建选择性抑制体系，而琼脂则提供固体培养基结构。

通过“选择性抑制+乳糖发酵显色”的原理，VRBA能够有效筛选并识别大肠菌群，为食品卫生监测和质量控制提供可靠依据。质量控制中，大肠埃希氏菌 ATCC 25922 和弗氏柠檬酸杆菌 ATCC 43864 应达到PR≥0.7，粪肠球菌 ATCC 29212 应受到明显抑制。只有在培养基配方、制备工艺、质量控制和使用条件均符合要求的情况下，VRBA才能发挥最佳检测性能。