《化妆品安全技术规范（2022年版）》微生物检验方法修订要点解析

《化妆品安全技术规范》是化妆品质量安全评价和检验的重要技术依据，其中第五章“微生物检验方法”直接关系到菌落总数、耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌等项目的检测。2022 年版修订内容中，微生物部分的变化并不只是简单的文字校对，还涉及培养基制法、检液表述、结果判定逻辑、英文名称和实验操作细节的规范化。

总体来看，本次修订的核心思路是：统一术语、规范格式、减少歧义、完善培养基制备要求，并使化妆品微生物检验方法与 GB 标准、药典及实际检验操作更加协调。

一、修订重点一：格式和术语更加统一

修订表中有大量内容属于格式规范，例如将部分条款中的逗号改为冒号，将数值范围中的连接符由“-”统一为“～”或“~”。这类修改看似细小，但对标准文本非常重要。

在检验方法中，数值范围经常涉及温度、时间、pH、菌落数和稀释倍数。例如 45℃～50℃、18h～24h、30～300 CFU 等。如果连接符使用不统一，容易造成文本不规范，也不利于实验室 SOP 转化。修订中参考 GB 标准和《中国药典》的书写习惯，将表示量值范围的连接符统一处理，使文本表达更清晰。

此外，部分“调 pH 到”修改为“调 pH 为”，部分“校正 pH”修改为“调节 pH”。这些变化体现了检验方法文本对科学表达的要求。“校正”更常用于仪器校准或偏差修正，而培养基制备中应表述为调节 pH，更符合实验操作含义。

二、修订重点二：菌落总数定义更严谨

菌落总数检验方法中，对“菌落总数”的定义进行了关键修订。原表述为“1g（1mL）检样中所含菌落的总数”，修订为“1g（1mL）检样中形成的微生物菌落总数”。

这一修改非常重要。因为化妆品样品中并不“含有菌落”，菌落是在检样经过处理后，微生物在固体培养基上培养形成的肉眼可见微生物群体。换句话说，检测结果反映的是在规定培养基、培养温度、培养时间、pH 和需氧条件下能够形成菌落的微生物数量，而不是样品中全部微生物的真实总数。

修订后还将“嗜中温的需氧性和兼性厌氧菌落总数”改为“嗜中温需氧菌和兼性厌氧菌的菌落总数”，语义更加准确，避免把“菌落”误解为具有代谢类型的对象。

三、修订重点三：样品制备和移液步骤减少歧义

化妆品基质复杂，既有水溶性样品，也有油性、膏霜、粉剂和疏水性样品。供检样品制备是微生物检验成败的关键步骤。修订中将部分样品类型标题统一为冒号格式，如“水溶性的液体样品：”“油性液体样品：”，与后文“亲水性的样品：”“疏水性样品：”保持一致。

菌落总数检验的稀释步骤也进行了调整。原文字容易让人理解为制备 1:100 检液前就需要更换吸管，修订后明确：从 1:10 检液取 1mL 加入 9mL 灭菌生理盐水并混匀，制成 1:100 检液；随后吸取 1:100 检液注入平皿时再更换吸管。这样更符合实验实际，也减少了操作理解歧义。

对于化妆品微生物检测而言，稀释、混匀和移液步骤不仅影响计数准确性，也影响防腐剂中和和微生物分散效果。文字表达清楚，有助于不同实验人员获得一致操作。

四、修订重点四：培养基制法更加明确

本次修订中，多个培养基制法进行了完善，尤其是 SCDLP 液体培养基、EMB 琼脂、Baird-Parker 平板、绿脓菌素测定用培养基、明胶培养基和虎红培养基等。

SCDLP 液体培养基中，将“卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解”改为“加热溶解”，与后文表述一致。SCDLP 中的卵磷脂和吐温 80 主要用于中和化妆品中的防腐剂或表面活性物质，对检出受抑制微生物具有重要作用。因此，培养基制备文字应尽量清晰，避免因“加温”“微温”“加热”等表述混用造成操作差异。

EMB 琼脂制法的修订更具实质意义。原文中“磷酸氢二钾蛋白胨”存在文字遗漏，修订为“磷酸氢二钾和蛋白胨”；同时明确使用前将琼脂融化后，每 100mL 琼脂中无菌加入 5mL 灭菌的 20%乳糖溶液、2mL 2%伊红水溶液和 1.3mL 0.5%美蓝水溶液，摇匀后冷至 45℃～50℃倾注平皿。这样使乳糖和染料的加入方式、比例和无菌要求更加明确。

金黄色葡萄球菌检验中，Baird-Parker 培养基制法也进行了补充，明确“临用时加热溶化琼脂，冷至 50℃，每 95mL 加入预热至 50℃左右的补充液”。这有助于避免温度过高损伤卵黄亚碲酸盐等补充成分，也避免温度过低导致培养基凝固不均。

五、修订重点五：耐热大肠菌群判定逻辑更完整

耐热大肠菌群检验方法中，修订强调其关键判定特征：发酵乳糖产酸产气、平板上有典型菌落、经证实为革兰氏阴性无芽胞短杆菌，且靛基质试验阳性。原文中“革兰氏阴性短杆菌”修订为“革兰氏阴性无芽胞短杆菌”，补充了“无芽胞”这一重要特征，使判定更完整。

EMB 平板菌落描述也进行了标点调整，例如紫黑色、不带或略带金属光泽，或粉紫色、中心较深的菌落，也可能为耐热大肠菌群，应注意挑选。这类修改有助于检验人员理解：不应只挑取最典型的金属光泽菌落，对可疑非典型菌落也应关注，避免漏检。

培养时间增加“±2h”同样具有实际意义。微生物检验对培养时间敏感，但实验室操作存在批量样品、培养箱安排和读数窗口等现实问题。增加合理时间容差，有助于标准执行更贴近实际检验场景。

六、修订重点六：铜绿假单胞菌检验更符合菌株差异

铜绿假单胞菌检验方法中，原定义中提到“氧化酶阳性，能产生绿脓菌素，此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在 42℃±1℃条件下能生长”。修订后简化为“属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，大部分能产生绿脓菌素”。

这一修改更符合实际情况。铜绿假单胞菌多数可产生绿脓菌素，但并非所有菌株都表现典型；部分生化反应也可能存在菌株差异。将定义写得过于绝对，可能导致检验人员误判非典型菌株。因此，修订后强调“大部分能产生绿脓菌素”，更科学也更谨慎。

氧化酶试验中，“二甲基对苯二胺试液”修订为“二盐酸二甲基对苯二胺试液”，化学名称更规范。绿脓菌素试验中，将“氯仿”规范为“三氯甲烷”，与药典和标准表述更一致。明胶试验中，将“液化明胶”调整为“明胶液化”，并将“溶解状”修订为“溶液状或表面液化”，使观察描述更准确。

七、修订重点七：金黄色葡萄球菌检验细节更清楚

金黄色葡萄球菌检验方法中，多个修改集中在培养基名称、纯化来源和血浆凝固酶试验上。例如“7.5%的氯化钠肉汤”改为“7.5%氯化钠肉汤”，与培养基名称和 GB 标准表述一致；“血琼脂培养基”改为“血琼脂平板”，因为正文中实际使用的是制成平板后的培养基。

在操作步骤中，“挑取分纯菌落”修订为“挑取血琼脂平板上分纯后的菌落”，明确了菌落来源，避免直接从选择性平板上取菌进行后续试验造成干扰。血浆凝固酶试验中，也将“肉汤培养物”明确为“营养肉汤培养物”，并增加“可使用商品化试剂，按照说明书操作”的表述，更符合当前实验室实际。

这些变化提醒实验室：金黄色葡萄球菌确认不能仅依赖 Baird-Parker 平板可疑菌落，仍需纯化、染色镜检和血浆凝固酶等确认步骤。

八、修订重点八：霉菌和酵母菌计数方法更准确

霉菌和酵母菌部分将标题由“霉菌和酵母菌检验方法”调整为“霉菌和酵母菌计数检验方法”，更准确地反映该方法本质。其定义也由“1g 或 1mL 化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量”修订为“1g（1mL）检样中形成的霉菌和酵母菌总数”，与菌落总数定义保持一致。

虎红（孟加拉红）培养基中，硫酸镁由“含 7H₂O”修订为“无水”。这是因为常见干粉培养基和 GB 4789.15 中孟加拉红培养基所用硫酸镁通常按无水硫酸镁计算；若使用七水硫酸镁，质量换算不同，仍写 0.5g/L 可能造成配方偏差。

计数范围也由“5个-50个”规范为“5CFU～50CFU”，明确了单位和范围。霉菌和酵母菌计数通常选择菌落数较少的平板范围，是因为真菌菌落较大、易蔓延，过多时不利于准确计数。

九、修订重点九：英文名称和拉丁名更加规范

修订表最后集中调整了多个方法英文名称。例如：

这些修改主要是为了使英文名称与中文方法名称对应，并规范拉丁学名书写。微生物拉丁学名中，属名首字母大写，种加词小写，通常应斜体，如 Pseudomonas aeruginosa、Staphylococcus aureus。英文名称规范化有助于国际交流、方法引用和检测报告表达。

十、对实验室和培养基使用者的实际意义

这次微生物部分修订虽然很多属于文字、标点和格式调整，但背后反映的是微生物检验方法标准化水平的提升。对于实验室而言，修订内容至少有三方面意义。

第一，减少操作歧义。稀释步骤、培养基制法、补充液添加方式和挑菌来源写得更清楚，有助于不同人员按同一方式执行。

第二，提高判定准确性。对耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等项目的判定描述更加严谨，避免把非典型菌株简单排除，也避免只凭单一培养特征下结论。

第三，促进培养基质量控制。培养基 pH、添加剂加入温度、无菌要求、原料形态和计数范围等内容更加明确，有助于培养基生产企业和实验室更好地进行配制、验证和质控。

十一、小结

《化妆品安全技术规范（2022年版）》微生物检验方法修订内容，表面上看包含大量标点、连接符和文字调整，但实质上体现了检验方法向“表述清晰、操作明确、判定严谨、与现行标准协调”的方向完善。

菌落总数部分更强调“形成的菌落总数”；耐热大肠菌群部分补充了无芽胞等关键特征；铜绿假单胞菌部分避免将绿脓菌素等反应绝对化；金黄色葡萄球菌部分明确了纯化菌落和血浆凝固酶试验要求；霉菌和酵母菌部分进一步突出计数方法属性；多个培养基制法也补充了温度、添加剂和无菌操作细节。

对于化妆品微生物检验实验室和培养基使用者来说，理解这些修订点，有助于正确更新 SOP、规范培养基配制和使用，并提高微生物检验结果的准确性和可比性。