采样时应避免用手接触棉拭子头部，采样后及时送检。若不能立即检验，应按公共场所卫生检验要求进行保存和运输，避免样品中微生物继续增殖或死亡。

三、大肠菌群初发酵试验

取采样洗脱液5 mL，接种于双料乳糖胆盐发酵管中，于36 ℃±1 ℃培养24 h。若乳糖胆盐发酵管不产气，可报告大肠菌群阴性；若出现产酸、产气，则需继续进行分离培养和证实试验。

乳糖胆盐发酵管中的胆盐可抑制部分革兰氏阳性菌，乳糖用于观察发酵反应，产酸产气是大肠菌群初步阳性的关键表现。但初发酵阳性不能直接作为最终阳性结果，因为部分非目标菌也可能造成类似现象，必须进一步确认。

四、分离培养与典型菌落观察

将产酸、产气的发酵管培养物划线接种于伊红美蓝琼脂平板，置37 ℃培养18 h～24 h，观察菌落形态，并选择可疑菌落进行革兰氏染色和证实试验。

伊红美蓝琼脂对大肠菌群具有选择和鉴别作用。典型大肠埃希氏菌菌落常呈黑紫色并带金属光泽；其他大肠菌群可表现为红紫色、紫黑色或带不同程度光泽的菌落。需要注意的是，大肠菌群检测并不是只寻找大肠埃希氏菌，因此不能把“无典型金属光泽”简单等同于阴性。

挑取1个～2个可疑大肠菌群菌落进行革兰氏染色镜检，同时接种乳糖发酵管，于36 ℃±1 ℃培养24 h，观察是否产气。若乳糖发酵管最终产酸产气，且镜检为革兰氏阴性无芽胞杆菌，即可报告该样品大肠菌群阳性；若不符合上述条件，则报告阴性或按标准要求进一步处理。

结果报告应注明样品名称、采样部位、检测项目、检测方法和结果。对于公共场所卫生监督或日常质量控制，通常更关注“检出/未检出”及是否符合相应卫生要求。

金黄色葡萄球菌是人体皮肤、鼻腔和环境中常见的条件致病菌，也是公共用品用具卫生检验中的重要指标菌之一。理发用具与头皮、面部、颈部皮肤接触频繁，若消毒不充分，可能造成金黄色葡萄球菌残留和传播风险。

金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，显微镜下常呈葡萄串状排列，典型菌株血浆凝固酶阳性。旧资料中提到“分解甘露醇产酸”可作为部分鉴定项目，但在Baird-Parker平板上主要观察的是亚碲酸盐还原、卵黄反应等特征；甘露醇发酵通常与甘露醇盐类培养基或相关生化鉴定有关，不能与B-P平板特征混淆。

样品洗脱液可接种于7.5%氯化钠肉汤，在37 ℃培养18 h～24 h。金黄色葡萄球菌具有较强耐盐性，高盐肉汤可抑制部分背景菌，同时促进目标菌增殖。增菌后将培养物划线接种于Baird-Parker平板，于37 ℃培养18 h～24 h，观察是否有可疑菌落。

步骤	培养基或试剂	条件	目的
选择性增菌	7.5%氯化钠肉汤	37 ℃，18 h～24 h	利用耐盐性富集葡萄球菌
选择性分离	Baird-Parker平板	37 ℃，18 h～24 h	筛选可疑金黄色葡萄球菌
镜检	革兰氏染色	按常规操作	确认为革兰氏阳性球菌
确认	血浆凝固酶试验	按试剂说明或标准方法	判断凝固酶反应

若Baird-Parker平板无可疑菌落，可按方法要求报告未检出。若有可疑菌落，则需分离纯化并进行后续确认，不能仅凭平板外观直接报告检出。

金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上通常形成灰黑色至黑色、圆形、光滑、凸起的菌落，周围可出现透明圈或混浊带。黑色菌落主要与亚碲酸盐还原有关，透明圈或混浊带与卵黄反应有关。

但需要注意，部分非金黄色葡萄球菌也可能形成黑色或类似菌落；而某些受损菌株或培养条件不佳时，典型反应可能不明显。因此，Baird-Parker平板结果只能作为筛选依据，最终仍需依赖革兰氏染色、血浆凝固酶试验及必要的补充鉴定。

从可疑菌落中挑取典型菌落进行革兰氏染色镜检。若为革兰氏阳性球菌，再进行血浆凝固酶试验；必要时可进行甘露醇发酵、生化鉴定或商品化鉴定系统确认。若菌株符合革兰氏阳性葡萄状球菌、血浆凝固酶阳性等特征，可报告金黄色葡萄球菌检出。

若B-P平板出现可疑菌落但凝固酶阴性，应谨慎报告，必要时重复纯化或采用其他确认方法。公共场所样品背景菌复杂，误把非目标葡萄球菌当作金黄色葡萄球菌，是常见误判风险之一。

理发用具微生物检验的关键在于采样一致性和培养基质量稳定。棉拭子湿润程度、涂抹面积、涂抹力度、洗脱是否充分、接种量是否准确，都会影响检出结果。培养基方面，乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、7.5%氯化钠肉汤、Baird-Parker平板和血浆凝固酶试剂都应进行质量控制。