CATC琼脂：用于生活饮用水中肠球菌计数的选择性显色培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

CATC琼脂的核心是“营养支持 + 叠氮化钠选择性 + 红色显色计数”。酪胨和酵母浸粉为肠球菌提供生长所需的氮源、氨基酸、短肽、维生素和生长因子。柠檬酸钠、磷酸二氢钾和碳酸钠共同构成适合肠球菌生长的离子和缓冲环境。吐温-80可改善培养基分散性，并对部分肠球菌生长有促进作用。

叠氮化钠是CATC琼脂的重要选择性成分。它可抑制许多革兰氏阴性菌的呼吸代谢，使肠球菌在培养基上具有相对生长优势。完整CATC培养基加入配套试剂TJ038后，粪肠球菌等目标菌可形成红色菌落，便于在生活饮用水检测中进行计数。

需要注意的是，红色菌落是疑似肠球菌的重要筛选特征，但并非最终确认依据。部分非目标菌在特殊条件下可能耐受选择剂或产生相似颜色反应，因此实际检测中应按GB/T 5750.12-2023规定进行结果判读和必要确认。

四、使用方法

称取本品58.4 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装后冷却至约50 ℃。每100 mL基础培养基加入1支配套试剂TJ038，充分混匀后倾注无菌平皿，凝固后备用。

配制时应避免长时间过度加热。培养基含叠氮化钠和显色相关成分，过度加热可能影响选择性或显色稳定性。加入TJ038时培养基温度不宜过高，以免影响配套试剂活性；温度过低则可能导致培养基凝固或混匀不均。倒板前应轻轻混匀，避免产生大量气泡。

制备后的平板应表面平整、厚度适中、无污染、无明显水膜、无裂纹。若出现颜色异常、沉淀明显、平板干裂或质控不合格，应停止使用并排查原因。

五、质量控制

注：PR≥0.7表示粪肠球菌在该培养基上的回收能力应达到规定要求；G≤1表示非目标菌应受到明显抑制。质量控制应使用加入TJ038后的完整CATC琼脂进行。

六、结果观察与计数提示

粪肠球菌在CATC琼脂上通常形成红色菌落。计数时应选择菌落分布均匀、菌落数量适宜、无明显杂菌覆盖的平板。若菌落过密、相互融合或背景菌较多，应选择合适稀释度或按标准方法重新检测。

CATC琼脂主要用于计数疑似肠球菌，不能仅凭红色菌落作最终确认。对关键样品或可疑结果，应挑取典型菌落进行后续确认试验。

七、与滤膜肠球菌琼脂的区别

CATC琼脂和滤膜肠球菌琼脂均可用于肠球菌检测，但配方体系和应用场景有所不同。滤膜肠球菌琼脂常用于滤膜法分离和计数；CATC琼脂则作为GB/T 5750.12-2023中生活饮用水肠球菌计数相关培养基，用于形成红色典型菌落进行计数。

因此，CATC琼脂更适合用于规定方法下的饮用水肠球菌计数；若需确认肠球菌身份，应结合其他鉴别培养基或确认试验。

八、为什么要加入配套试剂TJ038

CATC琼脂基础配方中含有营养成分、缓冲体系、叠氮化钠和琼脂，但质控标准要求粪肠球菌形成红色菌落。由于基础配方表未列TTC等典型红色显色底物，因此完整显色体系应依赖配套试剂TJ038或配套试剂中的相关成分。

配套试剂应在基础培养基冷却至约50 ℃时加入，既能避免高温破坏试剂活性，又能保证培养基仍处于液态便于混匀。若漏加TJ038，可能出现目标菌生长但不形成典型红色菌落，导致计数和判读困难。

九、常见问题与原因分析

若粪肠球菌质控菌株生长率不足，应检查培养基配制浓度、pH、加热时间、TJ038是否正确加入、培养温度和时间、菌株活性以及平板含水量。叠氮化钠浓度异常或培养基过度加热，可能影响目标菌恢复。

若粪肠球菌生长但菌落不红，应重点检查TJ038是否漏加、加入温度是否过高、配套试剂是否过期或避光保存不当。显色成分受热、受光或储存条件不良，均可能导致显色变弱。

若大肠埃希氏菌或金黄色葡萄球菌选择性不合格，应检查叠氮化钠含量、配套试剂状态、培养基是否过度稀释、非目标菌接种量是否过大，以及培养时间是否过长。选择性培养基的抑制能力有限，背景菌量过高时可能出现选择性突破。

若平板表面水分过多，可能导致菌落扩散、融合或颜色晕染；若平板过干，则可能影响菌落形成。倒板后应控制平板干燥程度，避免明显水膜和过度失水。

十、叠氮化钠安全注意事项

CATC琼脂含叠氮化钠，操作时应注意化学安全。叠氮化钠具有毒性，称量和配制时应避免吸入粉尘、皮肤接触和误食，建议佩戴口罩、手套和护目镜，并在通风良好的环境中操作。

含叠氮化钠的废液不宜直接倒入含铜、铅等金属管道，以免长期积累形成危险金属叠氮化物。检测后的带菌平板、滤膜、试管和接触样品的耗材应先按121 ℃高压灭菌30 min处理，再按实验室生物安全和化学废物管理要求处置。

十一、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和选择性成分性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度、光照和使用频次影响，保质时间可能缩短。

制备后的CATC平板应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、pH异常、显色异常、平板干裂、水膜过多或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养物、平板和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB/T 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标》。

CATC琼脂产品说明。

饮用水肠球菌计数、叠氮化钠选择性培养基和四氮唑显色反应相关资料。