尿素酶琼脂基础：用于细菌脲酶试验的经典生化鉴定培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

尿素酶试验的核心是“尿素水解产氨 + 酚红碱性显色”。有些细菌能够产生尿素酶，将尿素水解为氨和二氧化碳。氨溶于培养基后使pH升高，酚红在碱性环境下呈粉红色至桃红色，因此培养基变粉红或桃红即为尿素酶阳性。

普通变形杆菌等变形杆菌属细菌常具有较强尿素酶活性，通常可在较短时间内使培养基明显变桃红色。大肠埃希氏菌通常尿素酶阴性，在该培养基上可生长，但不应出现典型粉红色阳性反应；若培养基变黄色，通常表示未发生尿素酶碱化反应，可能与葡萄糖利用产生酸性代谢有关。

需要注意的是，尿素酶试验结果受培养时间、接种量、菌株活性、尿素浓度和培养基pH影响。强阳性菌可较快变红，弱阳性菌可能需要更长时间；但若培养时间过长，可能因蛋白胨分解或非特异性碱化造成误判。因此应按产品说明或标准方法规定时间观察。

四、使用方法

称取本品24.0 g，加入蒸馏水或去离子水950 mL，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装后于121 ℃高压灭菌15 min。灭菌结束后冷却至50～55 ℃，每95 mL基础培养基加入无菌40%尿素水溶液5 mL，充分混匀后分装试管，制成斜面备用。

尿素不能与基础培养基一同高压灭菌，否则可能发生分解，影响试验灵敏度和结果判读。无菌尿素溶液应通过过滤除菌或使用经验证的无菌溶液。加入尿素时培养基温度不宜过高，以免尿素分解；温度过低则培养基可能凝固，造成混匀不均。

接种时通常挑取纯培养菌落，在斜面表面密集划线接种，不宜穿刺至深层。接种后于36 ℃培养24 h观察结果。若方法要求观察弱阳性，可按规定延长培养，但需设置阴性对照并避免过度培养误判。

五、质量控制

六、结果判读

结果观察时应与未接种对照和阴性质控比较。阳性应以粉红至桃红色碱性反应为准，而不是单纯生长良好。若培养基初始颜色偏红，可能导致弱阳性误判，应检查pH和尿素加入步骤。

七、与其他尿素酶试验培养基的区别

尿素酶琼脂基础制成斜面后适合观察细菌在固体表面的尿素酶反应。临床和食品微生物实验室还常见尿素肉汤、Christensen尿素琼脂等不同形式培养基。它们原理相同，都是尿素水解产氨使酚红变色，但营养强度、缓冲体系和判读时间可能不同。

因此，不同尿素酶试验体系不能随意替代，尤其是判读时间和接种量应按对应方法执行。

八、常见问题与原因分析

若普通变形杆菌质控不变桃红，应检查尿素溶液是否漏加、尿素是否被高温破坏、尿素溶液浓度是否正确、培养基pH是否偏低、酚红是否失效、菌株是否新鲜，以及培养温度和时间是否符合要求。

若大肠埃希氏菌出现明显粉红色，应检查是否菌株污染、培养时间过长、接种量过大、培养基pH偏高、尿素溶液或基础培养基污染，以及是否将蛋白胨分解导致的迟发碱化误判为尿素酶阳性。

若培养基初始颜色偏红，可能是pH偏高或尿素加入后混匀不充分；若初始颜色偏黄，可能是pH偏低或葡萄糖受热变化。若斜面有水珠过多，可能造成接种物流动和颜色扩散，影响判读；若斜面过干，则可能影响菌体生长和反应速度。

九、应用边界与注意事项

尿素酶试验常用于细菌生化鉴定，但单项生化试验不能确认菌种。例如变形杆菌属常为强尿素酶阳性，克雷伯菌属部分菌株也可阳性，而大肠埃希氏菌通常阴性。实际鉴定应结合革兰氏染色、氧化酶、糖发酵、动力、吲哚、硫化氢、赖氨酸脱羧酶等多项结果综合判断。

对弱阳性或结果不典型的菌株，应进行复试或采用经验证的鉴定系统。若用于质量控制，应严格控制接种菌龄、接种量、培养时间和观察时间，避免过度培养造成假阳性。

十、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和指示剂性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

无菌40%尿素溶液应按规定条件保存，避免污染和高温。制备后的尿素酶琼脂斜面应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、pH异常、初始颜色异常、斜面干裂、水分过多或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌斜面、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考资料

尿素酶琼脂基础产品说明。

ASM Urease Test Protocol。

细菌尿素酶试验、Christensen尿素琼脂和肠杆菌科生化鉴定相关资料。